實驗報告 ：

一 、分離與培養 ：

1 、無菌條件下 ，取出1-3d 齡SD大鼠心房組織 ，然後用PBS將此組織塊清洗2次 ，將組織剪成1mm3左右大小 ；

2 、往組織塊中加入4 mL酶消化液（0.1% 和0.1% I型膠原酶），混懸10s ，置37℃條件下消化10min ，之後用滴管吹打製成單細胞懸液 ，自然沉澱並收集上清 ，用含10% FBS培養基終止消化後4℃放置 ；

3 、剩下的組織再加入3～4mL酶消化液 ，混懸10s ，置37℃消化10 min後 ，按上述方法收集上清並終止消化後4℃放置 ，重複此步驟2-3次 ，直至組織被消化 ；

4 、用200目不鏽鋼篩網過濾細胞消化液 ，1200r/min 離心10min ，棄去上清 ，沉澱細胞用含有10％ FBS DMEM/F12培養基混懸 ，接種於25cm2培養瓶 ，放置於37℃  ，5％CO2 培養箱中培養 ；

5 、差速貼壁1h後 ，吸出培養基 ，按實驗需要接種於6孔板中繼續培養 ；二 、免疫熒光鑒定 ：

1 、待心房肌細胞生長至80%融合時 ，棄去培養基 ，用溫育的PBS衝洗細胞2次 ，每次10min ，然後用4%多聚甲醛在室溫條件下固定細胞15min ；

2 、PBS衝洗細胞2次 ，每次10min ，然後在4℃條件下 ，用0.1％Triton X-100透膜15min ；

3 、PBS衝洗細胞2次 ，每次10min ，然後在室溫條件下 ，用4% BSA封閉細胞30min ；

4 、按1: 100的比例稀釋α-actin一抗 ，然後將其放在4℃冰箱中孵育細胞過夜 ；

5 、PBS衝洗細胞3次 ，每次10min ，按1 ：150的比例稀釋抗α-actin的二抗 ， 37℃條件下放置1h ；

6 、用PBS衝洗3次 ，每次10min ，在倒置熒光顯微鏡下觀察圖像並拍照。

細胞簡介 ：

大鼠表皮角化分離自皮膚組織 ；表皮位於動物皮膚的外層 ，由胚胎時期外胚層形成 ，具有抗摩擦和抗損傷的作用 。表皮是皮膚的淺層結構 ，由複層扁平上皮構成 。從基底層到表麵可分為五層 ，即基底層 、棘層 、顆粒層 、透明層和角質層 。表皮角化細胞（KC）是構成表皮的主要細胞成分 ，在體內處於不斷增殖過程中 ，分裂的角化細胞主要位於其基底層 ，少數位於棘細胞層 。隨著向表層的推移 ，細胞的分化程度逐漸增加 ，並喪失分裂活性 。

方法簡介 ：

公司實驗室分離的大鼠表皮角化先消化 、後-膠原酶混合消化法製備而來 ，細胞總量約為5×10?cells/瓶 。

質量檢測

公司實驗室分離的大鼠表皮角化經PCNA免疫熒光鑒定 ，純度可達90%以上 ，且不含有HIV-1 、HBV 、HCV 、支原體 、細菌 、酵母和真菌等 。

培養信息 ：

包被條件 鼠尾膠原Ⅰ（2-5μg/cm2）

培養基 含FBS 、生長添加劑 、Penicillin 、Streptomycin等

換液頻率 每2-3天換液一次

生長特性 貼壁

細胞形態 上皮細胞樣

傳代特性 可傳1-2代

消化液 0.25%

培養條件 氣相 ：空氣 ，95% ；CO2 ，5%

注意事項 ：

1. 收到細胞後首先觀察細胞瓶是否完好 ，培養液是否有漏液 、渾濁等現象 ，若有上述現象發生請及時和老哥俱樂部聯係 。

2. 仔細閱讀細胞說明書 ，了解細胞相關信息 ，如細胞形態 、所用培養基 、血清比例 、所需細胞因子等 ，確保細胞培養條件一致 ，若由於培養條件不一致而導致細胞出現問題 ，責任由客戶自行承擔 。

3. 用75%酒精擦拭細胞瓶表麵 ，顯微鏡下觀察細胞狀態 。因運輸問題 ，部分細胞由於溫度變化及劇烈碰亡破碎形成碎片 ，是正常現象 。觀察好細胞狀態後 ，75%酒精消毒瓶壁將T25瓶置於37℃培養箱放置4-6h 。

4. 貼壁細胞可以消化 ，懸浮細胞直接混勻收集細胞 ，900 rpm-1000 rpm離心3 min ，棄上清 。加5 mL PBS重懸細胞 ，再900 rpm-1000 rpm離心3 min ， ，用新鮮的*培養基重懸細胞 ，並接種到新的培養瓶或培養皿中 ，置於培養箱中進行培養 。

5. 請客戶用相同條件的培養基用於細胞培養 。

6. 建議客戶收到細胞後前3天各拍幾張細胞照片 ，記錄細胞狀態 ，便於和我司技術部溝通交流 。由於運輸的原因 ，個別敏感細胞會出現不穩定的情況 ，請及時和老哥俱樂部聯係 ，告知細胞的具體情況 ，以便老哥俱樂部的技術人員跟蹤回訪直至問題解決 。

7. 該細胞僅供科研使用 。

8. 備注 ：運輸用的培養基(灌液培養基)不能再用來培養細胞 ，請換用按照說明書細胞培養條件新配製的*培養基來培養細胞 。收到細胞後次傳代建議1 ：2傳代  。

9.注意 ： 1:2傳代就是1個T25瓶傳2個T25瓶或者2個6cm皿。不是1個T25瓶傳2個10cm皿 。

公司正在出售的產品 ：

大鼠胱抑素S(CST4)檢測試劑盒  ，英文名 ： CST4 ELISA Kit

Rabbit apolipoprotein E (Apo-E) ELISA Kit 兔載脂蛋白E(Apo-E)檢測試劑盒

乙型流感病毒(IBV)核酸檢測試劑盒(PCR-熒光探針法) 48T

CLIAKitforMMP-5(Humanmaixmetalloproteinase5)ELISAKit人基質金屬蛋白酶5

體液基質金屬蛋白酶(MMP-12)活性比色法定量檢測試劑盒20次

ELISAKitVK1犬K1

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PROS1重組人 PROS1 / Protein S 蛋白 Protein

CAMK4 Protein Human 重組人 CAMK4 / CaMKIV 蛋白 (GST 標簽)

CD40LG Protein Canine 重組狗 CD40L / CD154 / TNFSF5 蛋白 (Fc 標簽)

含RNA結合冷休克域蛋白E1(CSDE1)重組蛋白 Recombinant Cold Shock Domain Containing Protein E1, RNA Binding (CSDE1)

CAMK4 Protein Human 重組人 CAMK4 / CaMKIV 蛋白 (GST 標簽)

CNTN5重組小鼠 Contactin 5 / CNTN5 蛋白 Protein

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Human ai bactericidal permeability increasing protein aibody (BPI-Ab) ELISA Kit 人抗殺菌通透性蛋白抗體(BPI-Ab)檢測試劑盒

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煙草葉片原生質細胞分離試劑盒5次

Mouseplasmin-aiplasmincomplex,PAPELISAKit小鼠纖溶酶抗纖溶酶複合物(PAP)檢測試劑盒規格 ：96T/48T

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