本產品具有下列特點:

1.操作簡便 、快捷 。可直接加入到檢測平板 。在96-孔板中檢測時,無需洗滌或收獲細胞,免去溶解步驟 。

2. 無放射性 。不需要配製液閃混合物,也不需要處理廢棄物。

3. 與MTT相比,使用更安全 。不需要使用揮發性的有機溶劑來溶解甲臢產物 。

4. 操作靈活,與MTT不同,平板讀數後可放回溫箱繼續孵育,使顏色進一步生成 。

商品屬性 ：

產品英文名稱 ：Human 4-1BBL Protein, His tag (Animal-Free)

產品中文名稱 ：重組人4-1BB配體,His標簽無動物源4-1BBL

規格 ：5 μg/20 μg/100 μg/1 mg

貨號 ：EY-01X8896
用途 ：僅供科研研究實驗

特點&優勢:

表達宿主:大腸杆菌

種屬:人

序列:氨基酸序列來源於 ：人源4-1BBL Protein (Arg71-Glu254) (P41273)

活性:Measure by its ability to induce IL-8 secretion in human PBMCs. The ED₅₀ for this effect is 1-5 ng/mL.

蛋白長度 ：重組人4-1BBL蛋白由184個氨基酸組成 ，預測分子量為20.4 KD 。

純度:> 95 %  ，使用SDS-PAGE檢測

通過LAL法測定 ，每微克蛋白裏

背景

4-1BB ligand (4-1BBL) is a type II transmembrane protein that is part of the tumor necrosis factor (TNF) ligand family. As an inducible co-stimulatory molecule, it presents on several antigen presenting cell (APC) types, including B cells, macrophages and DCs. The interactions between 4-1BB and 4-1BBL trigger pleiotropic effects on the immune response including antigen presenting process, proliferation of CD4 and CD8 positive T-cells, as well as cytokine secretion from T-cells through NFκB, c-Jun, and p38 downstream signal pathways activation.Therefore, 4-1BB and 4-1BBL are recently used for the immunotherapy of cancer.

操作步驟 ：

(一)獲得目的基因

1 、通過PCR方法:以含目的基因的克隆質粒為模板,按基因序列設計一對引物(在上遊和下遊引物分別引入不同的酶切位點),PCR循環獲得所需基因片段。

2 、通過RT-PCR方法:用TRIzol法從細胞或組織中提取總RNA,以mRNA為模板,逆轉錄形成cDNA第一鏈,以逆轉錄產物為模板進行PCR循環獲得產物 。

(二)構建重組表達載體

1 、載體酶切:將表達質粒用限製性內切酶(同引物的酶切位點)進行雙酶切,酶切產物行瓊脂糖電泳後,用膠回收Kit或凍融法回收載體大片段 。

2 、PCR產物雙酶切後回收,在T4DNA連接酶作用下連接入載體 。

(三)  獲得含重組表達質粒的表達菌種

1 、 將連接產物轉化大腸杆菌DH5α,根據重組載體的標誌(抗Amp或藍白斑)作篩選,挑取單斑,堿裂解法小量抽提質粒,雙酶切初步鑒定 。

2 、 測序驗證目的基因的插入方向及閱讀框架均正確,進入下步操作 。否則應篩選更多克隆,重複亞克隆或亞克隆至不同酶切位點 。

3 、 以此重組質粒DNA轉化表達宿主菌的感受態細胞 。

(四)誘導表達

1 、挑取含重組質粒的菌體單斑至2ml LB(含Amp50μg/ml)中37℃過夜培養 。

2 、按1∶50比例稀釋過夜菌,一般將1ml菌加入到含50mlLB培養基的300ml培養瓶中, 37℃震蕩培養至OD600≌0.4-1.0(*0.6,大約需3hr) 。

3 、取部分液體作為未誘導的對照組,餘下的加入IPTG誘導劑至終濃度0.4mM作為實驗組,兩組繼續37℃震蕩培養3hr 。

4 、分別取菌體1ml, 離心12000g×30s收獲沉澱,用100μl 1%SDS重懸,混勻, 70℃10min 。

5 、離心12000g×1min,取上清作為樣品,可做SDS-PAGE等分析 。

公司正在出售的產品 ：

CTRC Protein Human 重組人 CTRC / chymotrypsin C 蛋白

TNFRSF17重組小鼠 TNFRSF17 / BCMA 蛋白 (Fc 標簽) Protein

SIGIRR Protein Mouse 重組小鼠 SIGIRR / TIR8 蛋白 (His & Fc 標簽)

PGA4重組人 PGA4 / Pepsinogen A 蛋白 Protein

小鼠末端補體複合物C5b-9(TCC C5b-9)ELISA 試劑盒 96T/48T

Rat alkaline phosphatase (ALP) ELISA Kit 大鼠堿性0酸酶(ALP)檢測試劑盒

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Humanacetylcholinereceptoraibody,AChRab檢測試劑盒人乙酰受體抗體(AChRab)檢測試劑盒規格 ：96T/48T

正常人體腸組織S9組分(5毫克/毫升)500微升

Mouseai-cenolandcenosomeaibody,ACAELISAKit小鼠抗中性粒/中心體抗體(ACA)檢測試劑盒規格 ：96T/48T

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小鼠抗鹽抵抗的酸性0酸酶(AP)檢測試劑盒   96T/48T   試劑盒   組裝/原裝

小鼠抗酸性0酸酶5b(ACP-5b)檢測試劑盒   96T/48T   試劑盒   組裝/原裝

大鼠周期素依賴性激酶2(CDK2)檢測試劑盒  ，英文名 ： CDK2 ELISA Kit

Mouse proliferating cell nuclear aigen aibody (PCNA) ELISA Kit 小鼠抗增殖細胞核抗原抗體(PCNA)檢測試劑盒

MouseBonemorphogeneticprotein4,BMP-4ELISAKit 小鼠骨成型蛋白4(BMP-4)檢測試劑盒 96T/48T 進口分裝

CLIAKitforHumanInvolucrin,iNVELISAKit人套膜蛋白

微型RNA(miRNA)表達載體細胞轉染試劑盒10次

ELISAKitMIP-1β/CCL4大鼠巨噬細胞症蛋白1β

重組人4-1BB配體,His標簽無動物源4-1BBLTNFRSF17重組小鼠 TNFRSF17 / BCMA 蛋白 (Fc 標簽) Protein

chloramphenicol/BSA 偶聯牛血清白蛋白 2mgchloramphenicol/BSA 偶聯牛血清白蛋白

PGA4重組人 PGA4 / Pepsinogen A 蛋白 Protein

CTRC Protein Human 重組人 CTRC / chymotrypsin C 蛋白

SIGIRR Protein Mouse 重組小鼠 SIGIRR / TIR8 蛋白 (His & Fc 標簽)

不適用於人類或臨床診斷