老哥俱乐部

产品仅供研究使用，不适用于人类或临床诊断
商品属性
：

产品英文名称
：Human Leptin Protein

产品中文名称：重组人瘦素蛋白

规格

：100 μg/1 mg

货号：EY-01X8721
用途
：仅供科研研究实验

特点&优势:

标签:无标签

表达宿主:大肠杆菌

种属:人

序列:氨基酸序列来源于
：人源Leptin (Val22-Cys167)表达的蛋白片段
。

蛋白长度
：由146个氨基酸组成，预测分子量为16 KD

。

纯度:> 98 % 
，使用SDS-PAGE检测

采用 LAL 法检测，每 1 μg 蛋白质中的 EU 含量小于 1.0。

产品形式:冻干粉，冻干缓冲液为无菌的 PBS，pH 7.5
。

基因ID:3952

使用中注意事项:开盖使用前，请先离心。本产品为冻干粉
，推荐用该产品配套的Reconstitution 动겸动

背景

瘦素是脂肪组织分泌的一种激素，其在血清中的含量与动物脂肪组织的大小成正比。它作用于位于中枢神经系统的瘦素受体
，调节生物体的行为和代谢
。当体脂减少或处于低能量状态(如饥饿)时，血清中瘦素含量会显著降低，从而刺激觅食行为
，降低自身能量消耗。

本产品具有下列特点:

1.操作简便、快捷。可直接加入到检测平板
。在96-孔板中检测时,无需洗涤或收获细胞,免去溶解步骤

。

2. 无放射性
。不需要配制液闪混合物,也不需要处理废弃物
。

3. 与MTT相比,使用更安全
。不需要使用挥发性的有机溶剂来溶解甲臜产物。

4. 操作灵活,与MTT不同,平板读数后可放回温箱继续孵育,使颜色进一步生成。
公司正在出售的产品：

CCR-1(CC chemokine receptor 1 0.5mgCCR-1(CC chemokine receptor 1) 细胞表面趋化因子受体1抗原

CD93 Protein Human 重组人 CD93 / C1QR1 蛋白

BSG重组小鼠 CD147 / EMMPRIN / Basigin 蛋白 (His & Fc 标签) Protein

CD63 Protein Rat 重组大鼠 CD63 / Tspan-30 / Tetraspanin-30 蛋白

PTPMT1重组人 PTPMT1 蛋白 Protein

小鼠纤溶酶原激活物抑制因子(PAI)ELISA 试剂盒 96T/48T

Rat glamic acid decarboxylase aoaibody (GAD-Ab) ELISA Kit 大鼠谷脱羧酶自身抗体(GAD-Ab)检测试剂盒

Humanβ-lipoopichormone,β-LPHELISAKit 人β-促脂素(β-LPH)检测试剂盒 96T/48T 进口分装

ChickenGlucagon,GC检测试剂盒鸡胰高血糖素(GC)检测试剂盒规格：96T/48T

载玻片细胞CASPASE-7蛋白表达荧光显微镜检测试剂盒10/20次

Mousehemeoxygenase2,HO-2ELISAKit小鼠血红素氧合酶2(HO-2)检测试剂盒规格
：96T/48T

小鼠血管紧张素转化酶检测试剂盒   小鼠血管紧张素转化酶试剂盒   规格型号：96T/48T   小鼠血管紧张素转化酶试剂盒，规格型号：96T/48T
，来源：检测试剂盒（进口分装），产品别名：小鼠血管紧张素转化酶试剂盒、小鼠血管紧张素转化酶检测试剂盒   保存条件：2-8℃   保质期：6个月
。

小鼠血管紧张素原检测试剂盒   小鼠血管紧张素原试剂盒   规格型号：96T/48T   小鼠血管紧张素原试剂盒
，规格型号：96T/48T，来源
：检测试剂盒（进口分装），产品别名：小鼠血管紧张素原试剂盒、小鼠血管动겸动

大鼠蛋白激酶G(PKG)检测试剂盒 ，英文名

： PKG ELISA Kit

Pig angiopoietin 2 (ANG-2) ELISA Kit 猪血管生成素2(ANG-2)检测试剂盒

病毒H5亚型核酸检测试剂盒(荧光PCR法) 48T

CLIAKitforLPS(HumanLipopolysaccharides)ELISAKit人脂多糖/内毒素

通用免疫化学固着溶液10毫升

ELISAKitPPP鸡蛋卵黄高0蛋酸肽

重组人瘦素蛋白BSG重组小鼠 CD147 / EMMPRIN / Basigin 蛋白 (His & Fc 标签) Protein

CCR-1(CC chemokine receptor 1 0.5mgCCR-1(CC chemokine receptor 1) 细胞表面趋化因子受体1抗原

PTPMT1重组人 PTPMT1 蛋白 Protein

CD93 Protein Human 重组人 CD93 / C1QR1 蛋白

CD63 Protein Rat 重组大鼠 CD63 / Tspan-30 / Tetraspanin-30 蛋白

操作步骤
：

(一)获得目的基因

1、通过PCR方法:以含目的基因的克隆质粒为模板,按基因序列设计一对引物(在上游和下游引物分别引入不同的酶切位点),PCR循环获得所需基因片段。

2
、通过RT-PCR方法:用TRIzol法从细胞或组织中提取总RNA,以mRNA为模板,逆转录形成cDNA第一链,以逆转录产物为模板进行PCR循环获得产物。

(二)构建重组表达载体

1、载体酶切:将表达质粒用限制性内切酶(同引物的酶切位点)进行双酶切,酶切产物行琼脂糖电泳后,用胶回收Kit或冻融法回收载体大片段。

2、PCR产物双酶切后回收,在T4DNA连接酶作用下连接入载体
。

(三)  获得含重组表达质粒的表达菌种

1、 将连接产物转化大肠杆菌DH5α,根据重组载体的标志(抗Amp或蓝白斑)作筛选,挑取单斑,碱裂解法小量抽提质粒,双酶切初步鉴定
。

2、 测序验证目的基因的插入方向及阅读框架均正确,进入下步操作
。否则应筛选更多克隆,重复亚克隆或亚克隆至不同酶切位点。

3、 以此重组质粒DNA转化表达宿主菌的感受态细胞。

(四)诱导表达

1、挑取含重组质粒的菌体单斑至2ml LB(含Amp50μg/ml)中37℃过夜培养
。

2、按1∶50比例稀释过夜菌,一般将1ml菌加入到含50mlLB培养基的300ml培养瓶中, 37℃震荡培养至OD600≌0.4-1.0(*0.6,大约需3hr)。

3
、取部分液体作为未诱导的对照组,余下的加入IPTG诱导剂至终浓度0.4mM作为实验组,两组继续37℃震荡培养3hr
。

4、分别取菌体1ml, 离心12000g×30s收获沉淀,用100μl 1%SDS重悬,混匀, 70℃10min。

5
、离心12000g×1min,取上清作为样品,可做SDS-PAGE等分析
。