老哥俱乐部

产品仅供研究使用，不适用于人类或临床诊断
商品属性
：

产品英文名称
：Human OSM Protein

产品中文名称：重组人肿瘤抑制素M（OSM）

规格
：20 μg/100 μg/500 μg

货号：EY-01X8660
用途

：仅供科研研究实验

特点&优势:

标签:无标签

表达宿主:大肠杆菌

种属:人

序列:氨基酸序列来源于
：人源 OSM（P13725）（Ala26-Arg221）表达的蛋白片段，内含一个6xHis标签。

蛋白长度：重组人 OSM是由202个氨基酸组成

，预测的理论分子量为24.4 KDa
，与SDS-PAGE结果一致。

纯度:> 98 % ，使用SDS-PAGE检测

产品形式:冻干粉，冻干缓冲液为无菌的PBS, 350mM NaCl，pH 6.5溶液。

基因ID:5008

使用中注意事项:开盖使用前，请先离心。本产品为冻干粉
，推荐用该产品配套的R动겸动

背景

抑瘤素M (Oncostatin M, OSM)是一种糖蛋白
，属于白细胞介素-6家族细胞因子
，包括白血病抑制因子、粒细胞集落刺激因子和白细胞介素-6。OSM编码一种生长调节因子
，抑制多种肿瘤细胞的增殖。刺激AIDS-KS细胞增殖
。OSM调节内皮细胞产生的细胞因子，包括IL-6, G-CSF和GM-CSF。OSM被认为是一种多效的细胞因子

，通过特定的细胞表面受体启动其生物活性:。与含蛋白gp130相似的低亲和力LIF受体现已被鉴定为高亲和力OSM受体的一个组成部分

，它将转导OSM信号。OSM也被证明在促炎和抗炎作用中发挥作用

。OSM也可以参与许多biometabolism过程包括肝脏开发、haematopoeisis,炎症,骨形成和破坏,可能是中枢神经系统发展。

本产品具有下列特点:

 1.操作简便、快捷。可直接加入到检测平板。在96-孔板中检测时,无需洗涤或收获细胞,免去溶解步骤

。

2. 无放射性。不需要配制液闪混合物,也不需要处理废弃物。

3. 与MTT相比,使用更安全

。不需要使用挥发性的有机溶剂来溶解甲臜产物。

4. 操作灵活,与MTT不同,平板读数后可放回温箱继续孵育,使颜色进一步生成

。

操作步骤：

(一)获得目的基因

1
、通过PCR方法:以含目的基因的克隆质粒为模板,按基因序列设计一对引物(在上游和下游引物分别引入不同的酶切位点),PCR循环获得所需基因片段。

2
、通过RT-PCR方法:用TRIzol法从细胞或组织中提取总RNA,以mRNA为模板,逆转录形成cDNA第一链,以逆转录产物为模板进行PCR循环获得产物。

(二)构建重组表达载体

1

、载体酶切:将表达质粒用限制性内切酶(同引物的酶切位点)进行双酶切,酶切产物行琼脂糖电泳后,用胶回收Kit或冻融法回收载体大片段。

2
、PCR产物双酶切后回收,在T4DNA连接酶作用下连接入载体。

(三)  获得含重组表达质粒的表达菌种

1、 将连接产物转化大肠杆菌DH5α,根据重组载体的标志(抗Amp或蓝白斑)作筛选,挑取单斑,碱裂解法小量抽提质粒,双酶切初步鉴定
。

2、 测序验证目的基因的插入方向及阅读框架均正确,进入下步操作
。否则应筛选更多克隆,重复亚克隆或亚克隆至不同酶切位点。

3

、 以此重组质粒DNA转化表达宿主菌的感受态细胞。

(四)诱导表达

1、挑取含重组质粒的菌体单斑至2ml LB(含Amp50μg/ml)中37℃过夜培养。

2
、按1∶50比例稀释过夜菌,一般将1ml菌加入到含50mlLB培养基的300ml培养瓶中, 37℃震荡培养至OD600≌0.4-1.0(*0.6,大约需3hr)。

3
、取部分液体作为未诱导的对照组,余下的加入IPTG诱导剂至终浓度0.4mM作为实验组,两组继续37℃震荡培养3hr
。

4
、分别取菌体1ml, 离心12000g×30s收获沉淀,用100μl 1%SDS重悬,混匀, 70℃10min。

5
、离心12000g×1min,取上清作为样品,可做SDS-PAGE等分析
。

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