老哥俱乐部

产品仅供研究使用，不适用于人类或临床诊断
商品属性

：

产品英文名称
：Terminal Deoxynucleotidyl Transferase (TdT)

产品中文名称
：末端脱氧核苷酸转移酶（TdT）

规格：40 μg/100 μg

货号
：EY-01X8582
用途
：仅供科研研究实验

特点&优势:

序列:氨基酸序列来源于：牛TdT（P06526）（Mer1-Ala509）的氨基酸序列
。

蛋白长度：重组牛TdT由509个氨基酸组成，在还原条件下的SDS-PAGE中，它的条带与理论分子:量一致，为58.3 kDa。

纯度:> 90 % ，使用SDS-PAGE检测

产品形式:蛋白复溶液
，复溶液为无菌水溶液50 mM K2HPO4, 100 mM NaCl, 1 mM DTT, 0.1% Tween20, 1% BSA, 50% Glycerol, pH 6.5.

基因ID:9913

存储缓冲液无菌水溶液5动겸动

背景

，也称为末端转移酶，是在未成熟的
，B淋巴样细胞前提
，T淋巴细胞前体和急性淋巴细胞白血病/淋巴瘤细胞中表达的一种特殊的DNA聚合酶
。 通常，TdT催化将核苷酸添加到DNA分子的3'末端
。 与大多数DNA聚合酶不同，它不需要模板
。 该酶的优选底物是3'突出端
，但它也可以将核苷酸添加到平末端或凹入的3'末端。

本产品具有下列特点:

1.操作简便、快捷
。可直接加入到检测平板
。在96-孔板中检测时,无需洗涤或收获细胞,免去溶解步骤

。

2. 无放射性。不需要配制液闪混合物,也不需要处理废弃物
。

3. 与MTT相比,使用更安全。不需要使用挥发性的有机溶剂来溶解甲臜产物
。

4. 操作灵活,与MTT不同,平板读数后可放回温箱继续孵育,使颜色进一步生成。

操作步骤：

(一)获得目的基因

1
、通过PCR方法:以含目的基因的克隆质粒为模板,按基因序列设计一对引物(在上游和下游引物分别引入不同的酶切位点),PCR循环获得所需基因片段。

2、通过RT-PCR方法:用TRIzol法从细胞或组织中提取总RNA,以mRNA为模板,逆转录形成cDNA第一链,以逆转录产物为模板进行PCR循环获得产物。

(二)构建重组表达载体

1

、载体酶切:将表达质粒用限制性内切酶(同引物的酶切位点)进行双酶切,酶切产物行琼脂糖电泳后,用胶回收Kit或冻融法回收载体大片段
。

2、PCR产物双酶切后回收,在T4DNA连接酶作用下连接入载体。

(三)  获得含重组表达质粒的表达菌种

1、 将连接产物转化大肠杆菌DH5α,根据重组载体的标志(抗Amp或蓝白斑)作筛选,挑取单斑,碱裂解法小量抽提质粒,双酶切初步鉴定。

2
、 测序验证目的基因的插入方向及阅读框架均正确,进入下步操作。否则应筛选更多克隆,重复亚克隆或亚克隆至不同酶切位点
。

3
、 以此重组质粒DNA转化表达宿主菌的感受态细胞。

(四)诱导表达

1、挑取含重组质粒的菌体单斑至2ml LB(含Amp50μg/ml)中37℃过夜培养。

2
、按1∶50比例稀释过夜菌,一般将1ml菌加入到含50mlLB培养基的300ml培养瓶中, 37℃震荡培养至OD600≌0.4-1.0(*0.6,大约需3hr)。

3、取部分液体作为未诱导的对照组,余下的加入IPTG诱导剂至终浓度0.4mM作为实验组,两组继续37℃震荡培养3hr。

4、分别取菌体1ml, 离心12000g×30s收获沉淀,用100μl 1%SDS重悬,混匀, 70℃10min
。

5、离心12000g×1min,取上清作为样品,可做SDS-PAGE等分析。

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