老哥俱乐部

产品仅供研究使用
，不适用于人类或临床诊断
商品属性：

产品英文名称
：Annexin V-EGFP/PI Apoptosis Detection kit

产品中文名称：Annexin V-EGFP/PI双染细胞凋亡检测试剂盒

规格：20T/50T/100T

货号
：EY-01X8541
用途

：仅供科研研究实验

特点&优势:

•  标准化，具有阳性对照。解决凋亡检测的非标准化问题

•  荧光强度和光稳定性更好；EGFP是FITC的替代物，荧光强度和光稳定性更好

•  适用于流式细胞术和荧光显微镜

保存建议:-20℃，避光保存12个月。

运输条件:蓝冰运输

背景

细胞凋亡（apoptosis）是一种基本生物学现象，指为维持内环境稳定
，由基因控制的细胞自主的有序的死亡，在多细胞生物去除不需要的或异常的细胞中起着必要的作用。在正常活细胞中，磷脂酰（PS）位于细胞膜的内侧
，而在细胞凋亡的早期

，PS可从细胞膜的内侧翻转到细胞膜的表面，暴露在细胞外环境中
。膜联蛋白V(Annexin V) 是一种分子量为35~36KDa的钙离子依赖型磷脂结合蛋白
，能与PS高亲和力特异性结合。通过荧光素或者标记Annexin V即可简单快速地直接检测出细胞早期凋亡情况。 碘化丙啶（propidine iodide
，PI）是一种核酸染料，它不能透过完整的细胞膜，而早期凋亡细胞的细胞膜是完好的，对PI有拒染性

。但在凋亡中晚期的细胞和死细胞，PI能透过细胞膜而使细胞核染上。因此将Annexin V 与PI 匹配使用

，就可以将凋亡早晚期的细胞以及死细胞区分开来。PI可以被488,532或546nm激光线激发，并发出红色荧光。

本产品具有下列特点:

 1.操作简便、快捷。可直接加入到检测平板。在96-孔板中检测时,无需洗涤或收获细胞,免去溶解步骤。

2. 无放射性。不需要配制液闪混合物,也不需要处理废弃物。

3. 与MTT相比,使用更安全
。不需要使用挥发性的有机溶剂来溶解甲臜产物
。

4. 操作灵活,与MTT不同,平板读数后可放回温箱继续孵育,使颜色进一步生成。

操作步骤
：

(一)获得目的基因

1、通过PCR方法:以含目的基因的克隆质粒为模板,按基因序列设计一对引物(在上游和下游引物分别引入不同的酶切位点),PCR循环获得所需基因片段。

2、通过RT-PCR方法:用TRIzol法从细胞或组织中提取总RNA,以mRNA为模板,逆转录形成cDNA第一链,以逆转录产物为模板进行PCR循环获得产物。

(二)构建重组表达载体

1
、载体酶切:将表达质粒用限制性内切酶(同引物的酶切位点)进行双酶切,酶切产物行琼脂糖电泳后,用胶回收Kit或冻融法回收载体大片段。

2

、PCR产物双酶切后回收,在T4DNA连接酶作用下连接入载体。

(三)  获得含重组表达质粒的表达菌种

1
、 将连接产物转化大肠杆菌DH5α,根据重组载体的标志(抗Amp或蓝白斑)作筛选,挑取单斑,碱裂解法小量抽提质粒,双酶切初步鉴定。

2
、 测序验证目的基因的插入方向及阅读框架均正确,进入下步操作
。否则应筛选更多克隆,重复亚克隆或亚克隆至不同酶切位点。

3、 以此重组质粒DNA转化表达宿主菌的感受态细胞。

(四)诱导表达

1、挑取含重组质粒的菌体单斑至2ml LB(含Amp50μg/ml)中37℃过夜培养
。

2
、按1∶50比例稀释过夜菌,一般将1ml菌加入到含50mlLB培养基的300ml培养瓶中, 37℃震荡培养至OD600≌0.4-1.0(*0.6,大约需3hr)。

3、取部分液体作为未诱导的对照组,余下的加入IPTG诱导剂至终浓度0.4mM作为实验组,两组继续37℃震荡培养3hr。

4、分别取菌体1ml, 离心12000g×30s收获沉淀,用100μl 1%SDS重悬,混匀, 70℃10min。

5
、离心12000g×1min,取上清作为样品,可做SDS-PAGE等分析
。

公司正在出售的产品：

A Beta1-40 (mutation type, MT 0.1mgA Beta1-40 (mutation type, MT) peptide 突变型β淀粉样肽1-40

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小鼠第八因子相关抗原(FⅧAg)ELISA 试剂盒

Human fetal hemoglobin (HBF) ELISA Kit 人胎儿血红蛋白(HBF)检测试剂盒

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植物源性食品芥末(mustard)试剂盒20次

Humahymosinα1ELISAKit人肽α1(Thymosinα1)检测试剂盒

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东方体核酸检测试剂盒(PCR-荧光探针法)   48T

人疱疹病毒6型(HHV-6)核酸检测试剂盒(PCR-荧光探针法)   48T

(OC43/HKU1)核酸检测试剂盒(PCR-荧光探针法)   48T

大鼠β细胞素(BTC)检测试剂盒 ，英文名： BTC ELISA Kit

Mouse esadiol receptor (ER) ELISA Kit 小鼠雌二醇受体(ER)检测试剂盒

ELISA 小鼠核转录因子p65(mouse NF-kBp65)  进口分装

CLIAKitforIL-15ELISAKIT大鼠白介素15

通用型马莱姆症嗜吞噬细胞无形体(LymeandAnaplasmaPhagocytophilum)试剂盒20次

ELISAKitANG-R-Tie1大鼠血管生成素受体Tie1

Annexin V-EGFP/PI双染细胞凋亡检测试剂盒GREM1重组小鼠 Gremlin 1 / GREM1 蛋白 (His 标签) Protein

蛋白酶激活受体4(PAR4)重组蛋白 Recombinant Protease Activated Receptor 4 (PAR4)

CFL1重组人 CFL1 / N-cofilin 蛋白 (His 标签) Protein

FETUB Protein Human 重组人 Fetuin-B / FETUB 蛋白 (His 标签)

TNFRSF10D Protein Cynomolgus 重组食蟹猴 TRAIL R4 / CD264 / TNFRSF10D 蛋白 (His 标签)