老哥俱乐部

产品仅供研究使用，不适用于人类或临床诊断
商品属性：

产品英文名称
：One-step TUNEL Apoptosis Assay Kit (Orange Fluorescence)

产品中文名称
：一步法TUNEL细胞凋亡检测试剂盒红色荧光

规格：50T/100T

货号：EY-01X8533
用途：仅供科研研究实验

特点&优势:

• 提供优化的阳性对照品，解决凋亡检测非标准化的问题
。

• 优化的实验方案，分别适用于荧光酶标仪
、荧光显微镜、流式细胞仪。

•  通用的荧光检测参数(Ex/Em = 555nm/565 nm)，检测方便
。

保存建议:建议收到货后保存于-20°C，有效期少为6个月。一旦开封
，请参考说明书中各个组分的佳保存条件进行储存
。

运输条件:蓝冰运输

背景

细胞凋亡中, 染色体DNA双链断裂或单链断裂而产生大量的粘性3'-OH末端，可在脱氧核糖核苷酸末端转移酶（TdT）的作用下
，将脱氧核糖核苷酸和荧光素
、过氧化物酶、碱性磷酸酶或形成的衍生物标记到DNA的3'-末端
，从而可进行凋亡细胞的检测
，这类方法称为脱氧核糖核苷酸末端转移酶介导的缺口末端标记法（terminal -deoxynucleotidyl transferase mediated nick end labeling, TUNEL）
。由于正常的或正在增殖的细胞几乎没有DNA的断裂
，因而没有3'-OH形成


，很少能够被染色
。由此

，TUNEL成为了检测DNA片段化（细胞凋亡）的常用方法。

本产品具有下列特点:

 1.操作简便、快捷

。可直接加入到检测平板
。在96-孔板中检测时,无需洗涤或收获细胞,免去溶解步骤
。

2. 无放射性。不需要配制液闪混合物,也不需要处理废弃物。

3. 与MTT相比,使用更安全
。不需要使用挥发性的有机溶剂来溶解甲臜产物
。

4. 操作灵活,与MTT不同,平板读数后可放回温箱继续孵育,使颜色进一步生成
。

操作步骤：

(一)获得目的基因

1、通过PCR方法:以含目的基因的克隆质粒为模板,按基因序列设计一对引物(在上游和下游引物分别引入不同的酶切位点),PCR循环获得所需基因片段。

2、通过RT-PCR方法:用TRIzol法从细胞或组织中提取总RNA,以mRNA为模板,逆转录形成cDNA第一链,以逆转录产物为模板进行PCR循环获得产物。

(二)构建重组表达载体

1
、载体酶切:将表达质粒用限制性内切酶(同引物的酶切位点)进行双酶切,酶切产物行琼脂糖电泳后,用胶回收Kit或冻融法回收载体大片段
。

2
、PCR产物双酶切后回收,在T4DNA连接酶作用下连接入载体。

(三)  获得含重组表达质粒的表达菌种

1、 将连接产物转化大肠杆菌DH5α,根据重组载体的标志(抗Amp或蓝白斑)作筛选,挑取单斑,碱裂解法小量抽提质粒,双酶切初步鉴定。

2、 测序验证目的基因的插入方向及阅读框架均正确,进入下步操作
。否则应筛选更多克隆,重复亚克隆或亚克隆至不同酶切位点。

3、 以此重组质粒DNA转化表达宿主菌的感受态细胞。

(四)诱导表达

1

、挑取含重组质粒的菌体单斑至2ml LB(含Amp50μg/ml)中37℃过夜培养。

2、按1∶50比例稀释过夜菌,一般将1ml菌加入到含50mlLB培养基的300ml培养瓶中, 37℃震荡培养至OD600≌0.4-1.0(*0.6,大约需3hr)。

3
、取部分液体作为未诱导的对照组,余下的加入IPTG诱导剂至终浓度0.4mM作为实验组,两组继续37℃震荡培养3hr。

4
、分别取菌体1ml, 离心12000g×30s收获沉淀,用100μl 1%SDS重悬,混匀, 70℃10min
。

5、离心12000g×1min,取上清作为样品,可做SDS-PAGE等分析
。

公司正在出售的产品
：

5-LOX (5-lipoxygenase 0.5mg5-LOX (5-lipoxygenase) 5-脂氧合酶抗原

ANP32A Protein Human 重组人 ANP32A / PHAP1 蛋白 (His & GST 标签)

PGLYRP1重组小鼠 PGLYRP1 / PGRP-S 蛋白 (His 标签) Protein

IL1R2 Protein Rat 重组大鼠 IL1R2 / IL1RB / CD121b 蛋白 (His 标签)

BLOC1S2重组人 BLOC1S2 / BLOS2 蛋白 (GST 标签) Protein

猪红细胞生成素(EPO)ELISA 试剂盒

One pit protein Caveolin1 (Cav-1) ELISA Kit 人窖蛋白Caveolin1(Cav-1)检测试剂盒

Porcinemyelinbasicprotein,MBPELISAKit 猪髓0脂碱性蛋白(MBP)检测试剂盒 进口分装

CLIAKitforAlpha-GST(HumanAlpha-glathioneS-ansferases)ELISAKit人αS转移酶

血液结构型神经元合成酶(cNOS/NOS1/nNOS)活性比色法定量检测试剂盒20次

Plagrowthhormone,GHELISAKit植物生长激素(GH)检测试剂盒

猪雌激素(E)检测试剂盒     试剂盒   组装/原装

猪雌二醇受体(ER)检测试剂盒     试剂盒   组装/原装

猪雌二醇(E2)检测试剂盒     试剂盒   组装/原装

猪传染性胃肠病毒抗体（TGEV）检测试剂盒     试剂盒   组装/原装

大鼠固醇调节元件结合蛋白1A(SREBP-1A)检测试剂盒 ，英文名： SREBP-1A ELISA Kit

Rabbit type III procollagen (P III NP) ELISA Kit 兔子Ⅲ型前胶原肽(PⅢNP)检测试剂盒

破伤风芽孢梭菌(CT)核酸检测试剂盒(PCR-荧光探针法) 48T

CLIAKitforMMP-13(HumanMaixmetalloproteinase13)ELISAkit人基质金属蛋白酶13

体液基质金属蛋白酶(MMP-3)活性比色法定量检测试剂盒20次

ELISAKitET-1犬内皮素1

一步法TUNEL细胞凋亡检测试剂盒红色荧光PRLR重组小鼠 PRLR / Prolactin receptor 蛋白 (His 标签) Protein

低密度脂蛋白受体相关蛋白1(LRP1)重组蛋白 Recombinant Low Density Lipoprotein Receptor Related Protein 1 (LRP1)

ATP5D重组人 ATP5D 蛋白 (His 标签) Protein

ANP32A Protein Human 重组人 ANP32A / PHAP1 蛋白 (His & GST 标签)

TNFSF8 Protein Cynomolgus 重组食蟹猴 CD153 / CD30L / TNFSF8 蛋白