老哥俱乐部

产品仅供研究使用，不适用于人类或临床诊断
商品属性
：

产品英文名称
：Fluo-4 Calcium Assay Kit

产品中文名称
：Fluo-4钙离子检测试剂盒

规格：200T/1000T

货号
：EY-01X8528
用途：仅供科研研究实验

特点&优势:

保存建议:收到货后，请避光保存于-20℃。请参阅说明书中各个组件的存储条件，自发货之日起
，按照推荐的保存条件，有效期为12个月
。

运输条件:蓝冰运输

背景

Fluo-4 钙离子检测试剂盒是一种基于 Fluo-4 AM 钙离子荧光探针检测细胞内钙离子浓度的试剂盒。本试剂盒可以使用荧光显微镜进行荧光成像检测，也可以使用荧光酶标仪或流式细胞仪进行荧光的定量检测。使用荧光显微镜或荧光酶标仪还可以进行细胞内钙离子浓度的动态变化检测。Fluo-4 是一种将 Fluo-3 结构中的 Cl 离子替换成 F 离子的钙荧光探针
。由于将 Cl 离子替换成了电子吸引力更强的 F 离子
，它的最大激发波长会向短波长方向偏离 10 nm 左右。这个波长更接近于氩激光器的波长
，所以用氩激光器激发时，Fluo-4 的荧光强度比 Fluo-3 更强。

本产品具有下列特点:

 1.操作简便
、快捷。可直接加入到检测平板。在96-孔板中检测时,无需洗涤或收获细胞,免去溶解步骤。

2. 无放射性。不需要配制液闪混合物,也不需要处理废弃物。

3. 与MTT相比,使用更安全。不需要使用挥发性的有机溶剂来溶解甲臜产物。

4. 操作灵活,与MTT不同,平板读数后可放回温箱继续孵育,使颜色进一步生成
。
公司正在出售的产品

：

35kDa核孔蛋白(NUP35)重组蛋白 Recombinant Nucleoporin 35kDa (NUP35)

DSC2 Protein Human 重组人 DSC2 / Desmocollin-2 蛋白

CD79B重组小鼠 CD79B / B29 蛋白 Protein

LCN2 Protein Rat 重组大鼠 LCN2 / NGAL 蛋白

EPHA2重组人 EphA2 蛋白 (aa 585-976, His & GST 标签) Protein

小鼠抗卵巢抗体(AOAb)ELISA 试剂盒  试剂盒 组装/原装

Ai thyroid globulin aibody against rat (ATGA/TGAB) ELISA Kit 大鼠抗甲状腺球蛋白抗体(ATGA/TGAB)检测试剂盒

Humanepidermalkeratin,EKELISAKit 人表皮角蛋白(EK)检测试剂盒 96T/48T 进口分装

HumanAngiopoietin4,ANG-4检测试剂盒人血管生成素4(ANG-4)检测试剂盒规格：96T/48T

植物辅酶Q含量比色法定量检测试剂盒20次

IL-1βELISAKit鱼类白介素1β(IL-1β)检测试剂盒规格
：96T/48T

小鼠骨成型蛋白-2   英文名称
：   Bone morphogenetic protein-2   规格：      英文缩写：   BMP-2

小鼠骨成型蛋白-4   英文名称：   Bone morphogenetic protein-4   规格

：      英文缩写

：   BMP-4

小鼠骨成型蛋白受体1A   英文名称：   Bone morphogenetic protein-Receptor 1A   规格：      英文缩写
：   BMP-R1A

小鼠免疫细胞表面抗原分子CD4+   动겸动

大鼠Ⅰ型胶原(Col Ⅰ)检测试剂盒 ，英文名： Col Ⅰ ELISA Kit

Mouse myoglobin (MYO/MB) ELISA Kit 小鼠肌红蛋白(MYO/MB)检测试剂盒

Mouseglycogensyhasekinase,GSKELISAKit 小鼠糖原合成酶激酶(GSK)检测试剂盒 96T/48T 进口分装

CLIAKitforHumansimilaoRIKENcDNA3110050K21geneELISAKit人类似RIKENcDNA3110050K21基因

通用型鱼滤过性毒菌败血症(ViralHaemorrhagicSepticaemia)试剂盒20次

ELISAKitFⅩⅢ大鼠ⅩⅢ

Fluo-4钙离子检测试剂盒CD79B重组小鼠 CD79B / B29 蛋白 Protein

35kDa核孔蛋白(NUP35)重组蛋白 Recombinant Nucleoporin 35kDa (NUP35)

EPHA2重组人 EphA2 蛋白 (aa 585-976, His & GST 标签) Protein

DSC2 Protein Human 重组人 DSC2 / Desmocollin-2 蛋白

LCN2 Protein Rat 重组大鼠 LCN2 / NGAL 蛋白

操作步骤：

(一)获得目的基因

1
、通过PCR方法:以含目的基因的克隆质粒为模板,按基因序列设计一对引物(在上游和下游引物分别引入不同的酶切位点),PCR循环获得所需基因片段
。

2、通过RT-PCR方法:用TRIzol法从细胞或组织中提取总RNA,以mRNA为模板,逆转录形成cDNA第一链,以逆转录产物为模板进行PCR循环获得产物。

(二)构建重组表达载体

1
、载体酶切:将表达质粒用限制性内切酶(同引物的酶切位点)进行双酶切,酶切产物行琼脂糖电泳后,用胶回收Kit或冻融法回收载体大片段。

2
、PCR产物双酶切后回收,在T4DNA连接酶作用下连接入载体。

(三)  获得含重组表达质粒的表达菌种

1
、 将连接产物转化大肠杆菌DH5α,根据重组载体的标志(抗Amp或蓝白斑)作筛选,挑取单斑,碱裂解法小量抽提质粒,双酶切初步鉴定。

2
、 测序验证目的基因的插入方向及阅读框架均正确,进入下步操作
。否则应筛选更多克隆,重复亚克隆或亚克隆至不同酶切位点。

3、 以此重组质粒DNA转化表达宿主菌的感受态细胞。

(四)诱导表达

1、挑取含重组质粒的菌体单斑至2ml LB(含Amp50μg/ml)中37℃过夜培养。

2
、按1∶50比例稀释过夜菌,一般将1ml菌加入到含50mlLB培养基的300ml培养瓶中, 37℃震荡培养至OD600≌0.4-1.0(*0.6,大约需3hr)。

3

、取部分液体作为未诱导的对照组,余下的加入IPTG诱导剂至终浓度0.4mM作为实验组,两组继续37℃震荡培养3hr
。

4、分别取菌体1ml, 离心12000g×30s收获沉淀,用100μl 1%SDS重悬,混匀, 70℃10min
。

5、离心12000g×1min,取上清作为样品,可做SDS-PAGE等分析
。