產品僅供研究使用 ，不適用於人類或臨床診斷
商品屬性 ：

產品英文名稱 ：CFDA SE Cell Proliferation and Cell Tracking Kit

產品中文名稱 ：CFDA SE 細胞增殖與示蹤檢測試劑盒

規格 ：200T×5/200T×10

貨號 ：EY-01X8526
用途 ：僅供科研研究實驗

特點&優勢:

•  CFDA SE探針可以在幾代中很好地保留在活細胞中 。

•  探針會轉移到子細胞 ，但不轉移到群體中的相鄰細胞 。

•  兼容流式細胞儀或熒光顯微鏡等檢測方法

• 實驗開始前 ，確保所有的組分及設備處於合適的溫度 。

保存建議:收到貨後 ，請避光保存於-20℃ 。請參閱說明書中各個組件的存儲條件 ，自發貨之日起 ，按照推薦的保存條件 ，有效期為12個月 。

運輸條件:藍冰運輸

背景

5(6)-CFDA, SE 是一種可對活細胞進行熒光標記的細胞示蹤染料，不僅可用於細胞增殖的體外實驗 ，還可用於追蹤細胞在體內的分裂增殖過程 。5(6)-CFDA, SE 是二乙酸熒光素（Fluorescein diacetate ，FDA）的衍生物 ，具有細胞膜滲透性 ，本身不具有熒光發光性 。當通過被動運輸穿透細胞膜進入活細胞後 ，被胞漿內的酯酶催化生成羧基熒光素琥珀酰亞胺（carboxyfluoresceinsuccinimidyl ester ，CFSE），可發強烈的綠色熒光 ，不能穿透細胞膜 ，能完好的保留在胞內 。CFSE 還可自發並不可逆地與細胞內的氨基結合從而偶聯到細胞蛋白質上 ，同時過量且未被偶聯的 5(6)-CFDA, SE 通過被動擴散回到細胞外培養基內 ，被後續清洗步驟所清除 。經 5(6)-CFDA, SE 標記的非分裂細胞的熒光非常穩定 ，穩定標記的時間可達數月 ，因此非常適用於細胞群落分析。5(6)-CFDA, SE 標記細胞的熒光非常均一 ，優於以前使用的其他細胞示蹤熒光探針如 PKH26 ，並且分裂後的子代細胞的熒光分配也很均一 。在細胞分裂增殖過程中 ，CFSE 標記熒光可平均分配至兩個子代細胞中 ，熒光強度變為親代細胞的一半 ，通過流式細胞儀（FL1 通道）根據熒光強度的不同 ，可檢測出未分裂細胞 ，分裂一次（1/2 的熒光強度），二次（1/4 的熒光強度） ，三次（1/8 的熒光強度） ，以及更多分裂次數的細胞 。5(6)-CFDA, SE 可檢測分裂次數多達八次甚至更多 。

本產品具有下列特點:

 1.操作簡便 、快捷 。可直接加入到檢測平板 。在96-孔板中檢測時,無需洗滌或收獲細胞,免去溶解步驟 。

2. 無放射性 。不需要配製液閃混合物,也不需要處理廢棄物 。

3. 與MTT相比,使用更安全 。不需要使用揮發性的有機溶劑來溶解甲臢產物 。

4. 操作靈活,與MTT不同,平板讀數後可放回溫箱繼續孵育,使顏色進一步生成 。
公司正在出售的產品 ：

1α(MEP1α)重組蛋白 Recombinant Meprin A Alpha (MEP1a)

CDC37 Protein Human 重組人 CDC37 / CDC37A 蛋白 (GST 標簽)

CCL2重組小鼠 CCL2 / MCP-1 / MCP1 蛋白 Protein

IgG Protein Rabbit 重組兔 IgG-Fc 蛋白 (185 Thr/Ala, Asn 284/Ser)

RIOK1重組人 RIOK1 / RIO kinase 1 蛋白 (His & GST 標簽) Protein

小鼠仙台病毒(Sendai)檢測試劑盒 96T/48T

Rat bone morphogenetic protein 4 (BMP-4) ELISA Kit 大鼠骨成型蛋白4(BMP-4)檢測試劑盒

Humanproteinase-aineuophilcytoplasmicaibody,PR3-ANCAELISAKit 人蛋白酶3特異性抗中性粒細胞胞質抗體(PR3-ANCA)檢測試劑盒 96T/48T 進口分裝

Chickenheparansulfate,HS檢測試劑盒雞類肝素(HS)檢測試劑盒規格 ：96T/48T

載玻片細胞CDK4蛋白表達熒光顯微鏡檢測試劑盒10/20次

MouseHeatShockProtein70,Hsp-70ELISAKit小鼠熱休克蛋白70(HSP-70)檢測試劑盒規格 ：96T/48T

小鼠血管緊張素 I (mouse ANG I)   作用 ：   ELISA   規格 ：   96T   美國 Phoenix

小鼠血管緊張素 II (mouse ANG II)   作用 ：   ELISA   規格 ：   96T   美國 Phoenix

mouse CD 40L ELISA Kit   作用 ：   ELISA   規格 ：   96T   奧地利 Bender

大鼠 C 反應蛋白 (rat CRP)   作用 ：   ELISA   規格 ：   96T   美國 ADI

豬組織因子(TF)ELISA 試劑盒

Peroxisome proliferator activated receptor alpha (PPAR- alpha) ELISA Kit 人過氧化物酶體增殖物激活受體α(PPAR-α)檢測試劑盒

Rabbitalpha-granularmembraneprotein,GMP-140ELISAKit 兔血漿α顆粒膜蛋白(GMP-140)檢測試劑盒 96T/48T 進口分裝

CLIAKitforApo-H(HumanApolipoproteinH)ELISAKit人載脂蛋白H

溴脫氧尿核苷(BrdU)溶液(100毫摩爾)1毫升

Porcinemyelinbasicprotein,MBPELISAKit豬髓0脂堿性蛋白(MBP)檢測試劑盒規格 ：96T/48T

CFDA SE 細胞增殖與示蹤檢測試劑盒CCL2重組小鼠 CCL2 / MCP-1 / MCP1 蛋白 Protein

1α(MEP1α)重組蛋白 Recombinant Meprin A Alpha (MEP1a)

RIOK1重組人 RIOK1 / RIO kinase 1 蛋白 (His & GST 標簽) Protein

CDC37 Protein Human 重組人 CDC37 / CDC37A 蛋白 (GST 標簽)

IgG Protein Rabbit 重組兔 IgG-Fc 蛋白 (185 Thr/Ala, Asn 284/Ser)

操作步驟 ：

(一)獲得目的基因

1 、通過PCR方法:以含目的基因的克隆質粒為模板,按基因序列設計一對引物(在上遊和下遊引物分別引入不同的酶切位點),PCR循環獲得所需基因片段 。

2 、通過RT-PCR方法:用TRIzol法從細胞或組織中提取總RNA,以mRNA為模板,逆轉錄形成cDNA第一鏈,以逆轉錄產物為模板進行PCR循環獲得產物 。

(二)構建重組表達載體

1 、載體酶切:將表達質粒用限製性內切酶(同引物的酶切位點)進行雙酶切,酶切產物行瓊脂糖電泳後,用膠回收Kit或凍融法回收載體大片段 。

2 、PCR產物雙酶切後回收,在T4DNA連接酶作用下連接入載體 。

(三)  獲得含重組表達質粒的表達菌種

1 、 將連接產物轉化大腸杆菌DH5α,根據重組載體的標誌(抗Amp或藍白斑)作篩選,挑取單斑,堿裂解法小量抽提質粒,雙酶切初步鑒定 。

2 、 測序驗證目的基因的插入方向及閱讀框架均正確,進入下步操作 。否則應篩選更多克隆,重複亞克隆或亞克隆至不同酶切位點 。

3 、 以此重組質粒DNA轉化表達宿主菌的感受態細胞 。

(四)誘導表達

1 、挑取含重組質粒的菌體單斑至2ml LB(含Amp50μg/ml)中37℃過夜培養 。

2 、按1∶50比例稀釋過夜菌,一般將1ml菌加入到含50mlLB培養基的300ml培養瓶中, 37℃震蕩培養至OD600≌0.4-1.0(*0.6,大約需3hr) 。

3 、取部分液體作為未誘導的對照組,餘下的加入IPTG誘導劑至終濃度0.4mM作為實驗組,兩組繼續37℃震蕩培養3hr 。

4 、分別取菌體1ml, 離心12000g×30s收獲沉澱,用100μl 1%SDS重懸,混勻, 70℃10min 。

5 、離心12000g×1min,取上清作為樣品,可做SDS-PAGE等分析 。