產品僅供研究使用 ，不適用於人類或臨床診斷
商品屬性 ：

產品英文名稱 ：LDH Cytotoxicity Assay Kit

產品中文名稱 ：細胞毒性檢測試劑盒（乳酸脫氫酶法）

規格 ：96 T/480T

貨號 ：EY-01X8524
用途 ：僅供科研研究實驗

特點&優勢:

•  分析化合物或環境因素對細胞死亡的作用 。

•  LDH從細胞內被釋放到培養基中 ，形成了一個可視化的顏色反應 。

•  檢測範圍 ：10,00-100,0000個細胞/孔 。

保存建議:建議收到貨後避光保存於-20°C ，有效期為6個月 。

運輸條件:藍冰運輸

背景

對細胞死亡或細胞毒性的評估往往是基於細胞質膜損傷來定量的 。 LDH是一種穩定的酶 ，存在於所有細胞類型中 ，並且在質膜損傷後迅速釋放到細胞培養基中 。 因此 ，LDH是細胞毒性研究中使用廣泛的標記物 。

本產品具有下列特點:

 1.操作簡便 、快捷 。可直接加入到檢測平板 。在96-孔板中檢測時,無需洗滌或收獲細胞,免去溶解步驟 。

2. 無放射性 。不需要配製液閃混合物,也不需要處理廢棄物 。

3. 與MTT相比,使用更安全 。不需要使用揮發性的有機溶劑來溶解甲臢產物 。

4. 操作靈活,與MTT不同,平板讀數後可放回溫箱繼續孵育,使顏色進一步生成 。
公司正在出售的產品 ：

10(KLK10)重組蛋白 Recombinant Kallikrein 10 (KLK10)

CA13 Protein Human 重組人 Carbonic Anhydrase XIII / CA13 蛋白 (His 標簽)

CTSH重組小鼠 Cathepsin H / CTSH 蛋白 (His 標簽) Protein

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TMUB2重組人 TMUB2 蛋白 (His 標簽) Protein

魚雌二醇(E2)ELISA 試劑盒

Human rheumatoid ahritis associated nuclear aigen aibody (RANA) ELISA Kit 人抗類風濕關節核抗原抗體(RANA)檢測試劑盒

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CLIAKitforADMELISAKit大鼠腎上腺髓質素

血液乙酰酯酶活性比色法定量檢測試劑盒20次

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大鼠幹細胞因子受體(SCFR)檢測試劑盒  ，英文名 ： SCFR ELISA Kit

Rabbit follicle stimulating hormone (FSH) ELISA Kit 兔子促卵泡素(FSH)檢測試劑盒

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CLIAKitforMethylase(MouseMethylase)ELISAKit小鼠甲基化酶

體液牛病毒性腹瀉病毒II型(BovineViralDiarrhoeaVirus-2;BVDV-2)定性試劑盒20次

ELISAKitMT牛金屬硫蛋白

細胞毒性檢測試劑盒（乳酸脫氫酶法）CTSH重組小鼠 Cathepsin H / CTSH 蛋白 (His 標簽) Protein

10(KLK10)重組蛋白 Recombinant Kallikrein 10 (KLK10)

TMUB2重組人 TMUB2 蛋白 (His 標簽) Protein

CA13 Protein Human 重組人 Carbonic Anhydrase XIII / CA13 蛋白 (His 標簽)

CA9 Protein Canine 重組狗 Carbonic Anhydrase IX / CA9 蛋白 (His 標簽)

操作步驟：

(一)獲得目的基因

1 、通過PCR方法:以含目的基因的克隆質粒為模板,按基因序列設計一對引物(在上遊和下遊引物分別引入不同的酶切位點),PCR循環獲得所需基因片段 。

2 、通過RT-PCR方法:用TRIzol法從細胞或組織中提取總RNA,以mRNA為模板,逆轉錄形成cDNA第一鏈,以逆轉錄產物為模板進行PCR循環獲得產物 。

(二)構建重組表達載體

1 、載體酶切:將表達質粒用限製性內切酶(同引物的酶切位點)進行雙酶切,酶切產物行瓊脂糖電泳後,用膠回收Kit或凍融法回收載體大片段 。

2 、PCR產物雙酶切後回收,在T4DNA連接酶作用下連接入載體 。

(三)  獲得含重組表達質粒的表達菌種

1 、 將連接產物轉化大腸杆菌DH5α,根據重組載體的標誌(抗Amp或藍白斑)作篩選,挑取單斑,堿裂解法小量抽提質粒,雙酶切初步鑒定 。

2 、 測序驗證目的基因的插入方向及閱讀框架均正確,進入下步操作 。否則應篩選更多克隆,重複亞克隆或亞克隆至不同酶切位點 。

3 、 以此重組質粒DNA轉化表達宿主菌的感受態細胞 。

(四)誘導表達

1 、挑取含重組質粒的菌體單斑至2ml LB(含Amp50μg/ml)中37℃過夜培養 。

2 、按1∶50比例稀釋過夜菌,一般將1ml菌加入到含50mlLB培養基的300ml培養瓶中, 37℃震蕩培養至OD600≌0.4-1.0(*0.6,大約需3hr) 。

3 、取部分液體作為未誘導的對照組,餘下的加入IPTG誘導劑至終濃度0.4mM作為實驗組,兩組繼續37℃震蕩培養3hr 。

4 、分別取菌體1ml, 離心12000g×30s收獲沉澱,用100μl 1%SDS重懸,混勻, 70℃10min 。

5 、離心12000g×1min,取上清作為樣品,可做SDS-PAGE等分析 。