老哥俱乐部

细胞简介
：

鼓膜也称耳膜

，为一弹性灰白色半透明薄膜，将外耳道与中耳隔开。鼓膜穿孔不能，可能与干细胞受损或增殖抑制有关。鼓膜上皮干细胞的分布与鼓膜的血供丰富的区域一致。

鼓膜上皮干细胞高表达 β1整合素
，有很强的黏附型，对Ⅳ型胶原的黏附鼻其他细胞更快、更强。

细胞特性：

1）组织来源于实验动物的正常鼓膜组织。

2)细胞鉴定
：广谱角蛋白(PCK)荧光染色为阳性。

3)经鉴定细胞纯度高于90%


。

4)不含有 HIV-1、 HBV、HCV
、支原体
、、酵母和
。

5)细胞生长方式：铺路石状细胞，不规则细胞
，贴壁培养。

推荐培养基
：

老哥俱乐部推荐使用 Delf原代 上皮 细胞培养体系 作为体外培养的培养基。

实验报告：

一
、分离与培养：

1、无菌条件下
，取出1-3d 龄SD大鼠心房组织

，然后用PBS将此组织块清洗2次
，将组织剪成1mm3左右大小；

2、往组织块中加入4 mL酶消化液（0.1% 和0.1% I型胶原酶），混悬10s

，置37℃条件下消化10min，之后用滴管吹打制成单细胞悬液
，自然沉淀并收集上清，用含10% FBS培养基终止消化后4℃放置
；

3
、剩下的组织再加入3～4mL酶消化液
，混悬10s，置37℃消化10 min后，按上述方法收集上清并终止消化后4℃放置

，重复此步骤2-3次，直至组织被消化；

4、用200目不锈钢筛网过滤细胞消化液
，1200r/min 离心10min

，弃去上清，沉淀细胞用含有10％ FBS DMEM/F12培养基混悬，接种于25cm2培养瓶，放置于37℃ 
，5％CO2 培养箱中培养；

5、差速贴壁1h后，吸出培养基，按实验需要接种于6孔板中继续培养；二、免疫荧光鉴定：

1
、待心房肌细胞生长至80%融合时，弃去培养基，用温育的PBS冲洗细胞2次，每次10min，然后用4%多聚甲醛在室温条件下固定细胞15min；

2、PBS冲洗细胞2次，每次10min，然后在4℃条件下，用0.1％Triton X-100透膜15min；

3
、PBS冲洗细胞2次，每次10min
，然后在室温条件下，用4% BSA封闭细胞30min；

4、按1: 100的比例稀释α-actin一抗，然后将其放在4℃冰箱中孵育细胞过夜
；

5
、PBS冲洗细胞3次
，每次10min，按1：150的比例稀释抗α-actin的二抗， 37℃条件下放置1h；

6
、用PBS冲洗3次，每次10min，在倒置荧光显微镜下观察图像并拍照。

公司正在出售的产品：

植物组织可溶性总蛋白制备试剂盒

多巴胺受体调节因子DRRF抗体

KLF16

碳水化合物磺基转移酶5抗体

CHST5

细胞冻存试剂盒

大鼠组织金属蛋白酶抑制因子3(TIMP3)elisa检测试剂盒

食品（lactulose）含量酶偶联反应比色法定量检测试剂盒

小鼠白介素27(IL-27)elisa检测试剂盒免费代测

NADH氧化还原酶辅酶4样蛋白抗体

NDUFA4L2

GAGE12H蛋白抗体

GAGE12H

转胺酶2抗体  Anti-Transglutaminase 2/TGase2

蛋白磷酸酶2A抑制剂1抗体  Anti-PHAP1

螺旋转录因子OTP抗体  Anti-OTP

磷酸化S6核糖体蛋白抗体 (Ser240/244)  Anti-Phospho-S6 Ribosomal Protein (Ser240/244)

磷酸化A-Raf抗体

Phospho-A Raf (Ser299)

神经囊泡膜蛋白2抗体

NRSN2

氢离子转运ATP合成酶A1抗体  Anti-V-ATPase A1

活化T细胞核因子5蛋白抗体  Anti-NFAT5

RAS癌基因家族蛋白RAB40B抗体  Anti-RAB40B

肿瘤坏死因子配体超家族成员9抗体  Anti-TNFSF9/CD137L

大鼠波形蛋白(VIM)elisa分析检测试剂盒

卟胆原脱氨酶抗体

HMBS

血管生成素相关蛋白5抗体

大鼠鼓膜上皮干细胞ANGPTL5

注意事项：

1. 收到细胞后首先观察细胞瓶是否完好
，培养液是否有漏液、浑浊等现象，若有上述现象发生请及时和老哥俱乐部联系。

2. 仔细阅读细胞说明书，了解细胞相关信息，如细胞形态、所用培养基、血清比例

、所需细胞因子等
，确保细胞培养条件一致

，若由于培养条件不一致而导致细胞出现问题，责任由客户自行承担。

3. 用75%酒精擦拭细胞瓶表面，显微镜下观察细胞状态。因运输问题，部分细胞由于温度变化及剧烈碰亡破碎形成碎片
，是正常现象

。观察好细胞状态后，75%酒精消毒瓶壁将T25瓶置于37℃培养箱放置4-6h
。

4. 贴壁细胞可以消化，悬浮细胞直接混匀收集细胞

，900 rpm-1000 rpm离心3 min，弃上清。加5 mL PBS重悬细胞，再900 rpm-1000 rpm离心3 min，，用新鲜的*培养基重悬细胞
，并接种到新的培养瓶或培养皿中，置于培养箱中进行培养。

5. 请客户用相同条件的培养基用于细胞培养。

6. 建议客户收到细胞后前3天各拍几张细胞照片

，记录细胞状态，便于和我司技术部沟通交流。由于运输的原因，个别敏感细胞会出现不稳定的情况，请及时和老哥俱乐部联系
，告知细胞的具体情况，以便老哥俱乐部的技术人员跟踪回访直至问题解决
。

7. 该细胞仅供科研使用。

8. 备注
：运输用的培养基(灌液培养基)不能再用来培养细胞，请换用按照说明书细胞培养条件新配制的*培养基来培养细胞。收到细胞后次传代建议1
：2传代 。

9.注意： 1:2传代就是1个T25瓶传2个T25瓶或者2个6cm皿
。不是1个T25瓶传2个10cm皿
。