老哥俱乐部

参数规格：

储存条件：
仅用于科研14℃或－20℃样品收集、处理及保存方法
1. 血清：使用不含热原和内毒素的试管
，操作过程中避免任何细胞刺激
，收集血液后，3000 转离心10 分钟将血清和红细胞迅速小心地分离。
2. 血浆：EDTA
、柠檬酸盐或肝素抗凝
。3000 转离心30 分钟取上清
。
3. 细胞上清液：3000 转离心10 分钟去除颗粒和聚合物。
4. 组织匀浆
：将组织加入适量生理盐水捣碎

。3000 转离心10 分钟取上清。
5. 保存：如果样本收集后不及时检测，请按一次用量分装，冻存于-20℃
，避免反复冻融，在室温下解冻并确保样品均匀地充分解冻。
​
使用方法:
一、样品 DNA 的制备
用自选方法提取 Cps DNA。注意
：DNA 纯化方法是决定检测灵敏度的关键因素
。如果不能很好纯化样品 DNA
，后面的 PCR 再灵敏也不能提高整体检测灵敏度。
二
、制备 Cps 标准曲线（以 10-10E6 这 6 个 10 倍稀释度为例。由于标准品浓度非常高
，因此下列稀释操作一定要在独立的区域进行
，千万不能污染样品或本试剂盒的其他成分）。为增加产品稳定性和避免扩散传染性病原
，本产品不提供活体病毒做阳性对照，只提供没有传染性的
、可以直接使用的 DN**段作为阳性对照。
1. 标记 6 个离心管，分别为 6，5
，4

，3，2 和 1 号。
2. 用带芯枪头分别加入 45 μL 超纯水（用带芯枪头，下同）
。
3. 先将本试剂盒提供的阳性对照用 TE 缓冲液或超纯水 10 倍梯度稀释到10E7 拷贝/μL（注：请不要将本试剂盒提供的标准品一次性稀释至 10E7拷贝/μL，建议每次稀释 10 倍

，梯度稀释至 10E7 拷贝/μL）。
4. 在 6 号管中加入 5 μL 10E7 拷贝/μL 的 Cps 阳性对照(上步稀释所得)
，充分震荡 1 分钟，得 10E6 拷贝/μL 的阳性对照。
5. 换枪头，从 6 号管中取 5 μL 溶液到 5 号管中，充分震荡 1 分钟，得 10E5拷贝/μL 的阳性对照。
6. 换枪头，从 5 号管中取 5 μL 溶液到 4 号管中，重复上面的操作直到得到 6个稀释度的阳性对照

。
7. NC 管中不加任何阳性对照
。
8. 从 1-6 号管中分别取 5 μL 和待测样品一起进行定量 PCR（见下步）
，每个样品做 3 次重复。PCR 后得到每个阳性对照稀释样品的荧光 PCR Ct 值，并以之为纵轴

，以浓度的对数值为横轴，绘制标准曲线。 
检测步骤
：
一、 试剂的准备
从试剂盒中取出荧光PCR反应液(BC-qPCR MIX)、酶混合物(Enzymes MIX)
，冰上融化并振荡混匀后，10000rpm离心10s。
设所需要的PCR反应管管数为N(N=样本数+1管阴性对照+1管阳性对照)，每个测试反应体系配制如下表：
试剂 每个反应加入的量 N个反应加入的量
荧光PCR反应液 14µL N×14µL
酶混合物 1 µL N×1 µL
总量 15 µL N×15µL
（1） 计算好各试剂的使用量
，加入一适当体积洁净离心管中
，充分混匀，10000rpm离心10s，向设定的N个PCR反应管中分别加入15μL荧光PCR反应液

，向每管中加入处理后样品或阴性对照(NTC)和阳性对照(BC-PTC)5μL，10000rpm瞬时离心10秒
。
7.2 qPCR反应条件
将各反应管放入定量PCR仪器的反应槽内。
循环条件:
1循环 50℃ for 2 min
预变性 1循环 95℃ for 10 min
PCR扩增 40循环 95℃ for 15 sec
60℃ for 60 sec
在60℃延伸时收集荧光信号
。报告基团
：设置为FAM。淬灭基团：NONE，请勿选择ROX参比荧光
。

6-氯-2-甲喹啉：177.636- -2- methyl group：92-46-6 C10H8ClN

3-溴-4-三氟甲吡：225.993- three -4-
：936841-70-2 C6H3BrF3N

(S,S)-(-)-2,2'-异亚丙双(4-叔丁-2-恶唑啉)：294.44(S, S) - (-) -2,2'- isopropylidenebis (4- tert butyl -2- oxazolinyl)
：131833-93-7 C17H30N2O2

双(2,6-二叔丁-4-甲氧)甲铝(0.4MOL/L的甲溶液)：480.7Bis (2,6- tert butyl -4- methyl phenoxy) methyl aluminum (toluene solution 0.4MOL/L)：56252-55-2 C31H49AlO2

磺隆Triasulfuron
：401.83 C14H16ClN5O5S：82097-50-5

3-溴-4-氟甲
：189.023- -4- fluoride：452-62-0 C7H6BrF

Up to that：337.46 C22H27NO2：17230-88-5

孕诺酮Pregnant women
：316.43 C20H28O3：2137-18-0

4,4',4',4'-四叔丁酞菁铜4,4 ', 4', 4 '- Tetra tert butyl phthalocyanine copper：800.51 C48H48CuN8：39001-64-4

丝状支原体簇LAMP试剂盒甲型流感 H7N9 (A/Anhui/1/2013) 神经氨酸酶 (Neuraminidase/NA) 基因全长ORF克隆 (表达载体, 密码子优化), 无标签

人 FABP4 基因全长ORF克隆 (表达载体), 无标签

人 CD50 / ICAM3 人细胞裂解液 (阳性对照) (变性)

甲型流感 H7N9 (A/Hangzhou/1/2013) 血凝素 (Hemagglutinin / HA) 杆状病毒-昆虫细胞裂解液 (阳性对照) (变性)

斑马鱼 VEGFAA 基因全长ORF克隆

人 CD46 人细胞裂解液 (阳性对照) (变性)

人 SLAIN1 基因全长ORF克隆

重组大鼠 IFNG / Interferon Gamma 蛋白 (Fc 标签)

人 CTAG1A 基因全长ORF克隆

人 LRRN3 基因全长ORF克隆

小鼠 IL13 / ALRH 基因全长ORF克隆

大鼠 RPL36A 基因全长ORF克隆