老哥俱乐部

储存条件：
仅用于科研14℃或－20℃样品收集、处理及保存方法
1. 血清
：使用不含热原和内毒素的试管

，操作过程中避免任何细胞刺激，收集血液后
，3000 转离心10 分钟将血清和红细胞迅速小心地分离。
2. 血浆：EDTA
、柠檬酸盐或肝素抗凝。3000 转离心30 分钟取上清。
3. 细胞上清液：3000 转离心10 分钟去除颗粒和聚合物
。
4. 组织匀浆：将组织加入适量生理盐水捣碎。3000 转离心10 分钟取上清。
5. 保存：如果样本收集后不及时检测，请按一次用量分装，冻存于-20℃，避免反复冻融
，在室温下解冻并确保样品均匀地充分解冻。

参数规格：

​
使用方法:
一
、样品 DNA 的制备
用自选方法提取 Cps DNA

。注意：DNA 纯化方法是决定检测灵敏度的关键因素。如果不能很好纯化样品 DNA，后面的 PCR 再灵敏也不能提高整体检测灵敏度。
二、制备 Cps 标准曲线（以 10-10E6 这 6 个 10 倍稀释度为例
。由于标准品浓度非常高，因此下列稀释操作一定要在独立的区域进行，千万不能污染样品或本试剂盒的其他成分）
。为增加产品稳定性和避免扩散传染性病原，本产品不提供活体病毒做阳性对照，只提供没有传染性的
、可以直接使用的 DN**段作为阳性对照。
1. 标记 6 个离心管，分别为 6
，5，4，3，2 和 1 号。
2. 用带芯枪头分别加入 45 μL 超纯水（用带芯枪头，下同）
。
3. 先将本试剂盒提供的阳性对照用 TE 缓冲液或超纯水 10 倍梯度稀释到10E7 拷贝/μL（注：请不要将本试剂盒提供的标准品一次性稀释至 10E7拷贝/μL，建议每次稀释 10 倍，梯度稀释至 10E7 拷贝/μL）
。
4. 在 6 号管中加入 5 μL 10E7 拷贝/μL 的 Cps 阳性对照(上步稀释所得)
，充分震荡 1 分钟，得 10E6 拷贝/μL 的阳性对照
。
5. 换枪头，从 6 号管中取 5 μL 溶液到 5 号管中，充分震荡 1 分钟，得 10E5拷贝/μL 的阳性对照。
6. 换枪头
，从 5 号管中取 5 μL 溶液到 4 号管中，重复上面的操作直到得到 6个稀释度的阳性对照。
7. NC 管中不加任何阳性对照
。
8. 从 1-6 号管中分别取 5 μL 和待测样品一起进行定量 PCR（见下步）
，每个样品做 3 次重复。PCR 后得到每个阳性对照稀释样品的荧光 PCR Ct 值，并以之为纵轴，以浓度的对数值为横轴，绘制标准曲线。 
检测步骤：
一、 试剂的准备
从试剂盒中取出荧光PCR反应液(BC-qPCR MIX)、酶混合物(Enzymes MIX)，冰上融化并振荡混匀后
，10000rpm离心10s。
设所需要的PCR反应管管数为N(N=样本数+1管阴性对照+1管阳性对照)

，每个测试反应体系配制如下表：
试剂 每个反应加入的量 N个反应加入的量
荧光PCR反应液 14µL N×14µL
酶混合物 1 µL N×1 µL
总量 15 µL N×15µL
（1） 计算好各试剂的使用量，加入一适当体积洁净离心管中
，充分混匀
，10000rpm离心10s，向设定的N个PCR反应管中分别加入15μL荧光PCR反应液，向每管中加入处理后样品或阴性对照(NTC)和阳性对照(BC-PTC)5μL
，10000rpm瞬时离心10秒

。
7.2 qPCR反应条件
将各反应管放入定量PCR仪器的反应槽内。
循环条件:
1循环 50℃ for 2 min
预变性 1循环 95℃ for 10 min
PCR扩增 40循环 95℃ for 15 sec
60℃ for 60 sec
在60℃延伸时收集荧光信号。报告基团：设置为FAM
。淬灭基团：NONE
，请勿选择ROX参比荧光。

5-溴-2-氟三氟甲：2435- -2- three f
：393-37-3 C7H3BrF4

2,4-双-(羟甲)*
：180.242,4- bis - (Qiang Jiaji) three methyl benzene：29329-35-9 C11H16O2

1-乙酰咪唑

：110.111- acetyl
：2466-76-4 C5H6N2O

水合茚三酮Three indene ketone hydrate
：178.14 C9H6O4：485-47-2

2-吡

：104.112- cyanopyridine：100-70-9 C6H4N2

2-异腈萘：153.1832- ISO
：10124-78-4 C11H7N

3-氯-2-甲氧吡：143.573- chloride -2- a：13472-84-9 C6H6ClNO

对氯酚Parachlorophenol：128.56 C6H5OCl：106-48-9

蓝Musk grass phenol blue
：466.59 C27H30O5S：76-61-9

鸡败血支原体LAMP试剂盒大鼠 GM-CSF / CSF2 人细胞裂解液 (阳性对照) (变性)

大鼠 SURF4 基因全长ORF克隆

人 IL1R2 / IL1RB / CD121b 人细胞裂解液 (阳性对照) (变性)

人 CEP68 基因全长ORF克隆

小鼠 IFNA4 / Interferon alpha-4 人细胞裂解液 (阳性对照) (变性)

人 CDH16 / Cadherin-16 人细胞裂解液 (阳性对照) (变性)

甲型流感 H5N1 (A/Duck/Hong Kong/p46/97) HA 人细胞裂解液 (阳性对照) (变性)

小鼠 MARCO 基因全长ORF克隆

重组小鼠 IL25 蛋白 (His 标签)

人 IDO2 基因全长ORF克隆 (密码子优化)

食蟹猴 GFRA3 基因全长ORF克隆

小鼠 CD14 ELISA配对抗体