老哥俱乐部

储存条件：
仅用于科研14℃或－20℃样品收集、处理及保存方法
1. 血清

：使用不含热原和内毒素的试管，操作过程中避免任何细胞刺激
，收集血液后
，3000 转离心10 分钟将血清和红细胞迅速小心地分离
。
2. 血浆
：EDTA
、柠檬酸盐或肝素抗凝
。3000 转离心30 分钟取上清。
3. 细胞上清液
：3000 转离心10 分钟去除颗粒和聚合物。
4. 组织匀浆：将组织加入适量生理盐水捣碎
。3000 转离心10 分钟取上清。
5. 保存：如果样本收集后不及时检测
，请按一次用量分装
，冻存于-20℃，避免反复冻融
，在室温下解冻并确保样品均匀地充分解冻。

参数规格
：

​
使用方法:
一、样品 DNA 的制备
用自选方法提取 Cps DNA
。注意：DNA 纯化方法是决定检测灵敏度的关键因素。如果不能很好纯化样品 DNA，后面的 PCR 再灵敏也不能提高整体检测灵敏度。
二、制备 Cps 标准曲线（以 10-10E6 这 6 个 10 倍稀释度为例。由于标准品浓度非常高，因此下列稀释操作一定要在独立的区域进行
，千万不能污染样品或本试剂盒的其他成分）。为增加产品稳定性和避免扩散传染性病原，本产品不提供活体病毒做阳性对照
，只提供没有传染性的、可以直接使用的 DN**段作为阳性对照。
1. 标记 6 个离心管，分别为 6，5
，4，3，2 和 1 号。
2. 用带芯枪头分别加入 45 μL 超纯水（用带芯枪头，下同）。
3. 先将本试剂盒提供的阳性对照用 TE 缓冲液或超纯水 10 倍梯度稀释到10E7 拷贝/μL（注
：请不要将本试剂盒提供的标准品一次性稀释至 10E7拷贝/μL
，建议每次稀释 10 倍，梯度稀释至 10E7 拷贝/μL）。
4. 在 6 号管中加入 5 μL 10E7 拷贝/μL 的 Cps 阳性对照(上步稀释所得)，充分震荡 1 分钟
，得 10E6 拷贝/μL 的阳性对照。
5. 换枪头
，从 6 号管中取 5 μL 溶液到 5 号管中，充分震荡 1 分钟，得 10E5拷贝/μL 的阳性对照
。
6. 换枪头，从 5 号管中取 5 μL 溶液到 4 号管中，重复上面的操作直到得到 6个稀释度的阳性对照
。
7. NC 管中不加任何阳性对照。
8. 从 1-6 号管中分别取 5 μL 和待测样品一起进行定量 PCR（见下步）

，每个样品做 3 次重复。PCR 后得到每个阳性对照稀释样品的荧光 PCR Ct 值，并以之为纵轴，以浓度的对数值为横轴，绘制标准曲线
。 
检测步骤
：
一
、 试剂的准备
从试剂盒中取出荧光PCR反应液(BC-qPCR MIX)、酶混合物(Enzymes MIX)，冰上融化并振荡混匀后，10000rpm离心10s。
设所需要的PCR反应管管数为N(N=样本数+1管阴性对照+1管阳性对照)，每个测试反应体系配制如下表：
试剂 每个反应加入的量 N个反应加入的量
荧光PCR反应液 14µL N×14µL
酶混合物 1 µL N×1 µL
总量 15 µL N×15µL
（1） 计算好各试剂的使用量，加入一适当体积洁净离心管中，充分混匀，10000rpm离心10s，向设定的N个PCR反应管中分别加入15μL荧光PCR反应液
，向每管中加入处理后样品或阴性对照(NTC)和阳性对照(BC-PTC)5μL，10000rpm瞬时离心10秒。
7.2 qPCR反应条件
将各反应管放入定量PCR仪器的反应槽内
。
循环条件:
1循环 50℃ for 2 min
预变性 1循环 95℃ for 10 min
PCR扩增 40循环 95℃ for 15 sec
60℃ for 60 sec
在60℃延伸时收集荧光信号
。报告基团：设置为FAM。淬灭基团：NONE，请勿选择ROX参比荧光。

盐酸四咪唑：240.75Hydrochloric acid four：5086-74-8 C11H13ClN2S

补骨脂定Psoralidin：

：18642-23-4

酪里达唑：333.45Cheese with Trinidad
：74772-77-3 C18H23NO3S

橙皮素HESPERITIN：302.29C16H14O6：520-33-2

3-(N,N-二甲甲酰氧)吡
：166.183- (N, N- two) pyridine：51581-32-9 C8H10N2O2

1-戊咪唑：138.211- methyl imidazole： C8H14N2

1,2,4-1,2,4- acid：239.25 C10H9NO4S：116-63-2

3-氯-5-硝三氟甲：225.553- -5- nitro three
：401-93-4 C7H3ClF3NO2

2-硝-4-乙砜氯
：249.672- nitro -4- ethyl
：74159-80-1 C8H8ClNO4S

猪痘病毒LAMP试剂盒人 REG4 ELISA配对抗体

食蟹猴 ALK-7 / ALK7 / ACVR1C 人细胞裂解液 (阳性对照) (变性)

小鼠 SELP / selectin P / P-selectin 人细胞裂解液 (阳性对照) (变性)

人 KHDRBS3 基因全长ORF克隆

重组人 CCL22 / MDC 蛋白 (His 标签)

人 FAM19A3 基因全长ORF克隆

人 HGD 基因全长ORF克隆

人 AKR1A1 基因全长ORF克隆

人 EGFL7 基因全长ORF克隆

人 EREG 基因全长ORF克隆

小鼠 SPG21 基因全长ORF克隆

人 ATP6V1E1 基因全长ORF克隆