老哥俱乐部

细胞培养方法

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、细胞传代：细胞密度达到80-90%时即可传代
①弃去培养上清
，用PBS或生理盐水清洗1-2次；
②加入2ml0.25%（T25瓶）
，使覆盖整个瓶或皿
，盖好放入培养箱消化；
③1-2min后，显微镜下观察细胞，若大部分细胞回缩且有少量细胞脱落，轻轻吹打下确认消化情况后加入*培养基终止消化；若细胞还是贴壁，放回培养箱继续消化至可以轻轻吹打下为止；
④将细胞悬液1000RPM左右条件下离心4min，弃上清；
⑤用新鲜培养基重悬后加入培养瓶或皿中
，T25培养瓶加6-8ml培养基；
⑥悬浮细胞直接离心收集，细胞沉淀重悬后分到新培养瓶中。
2、细胞复苏：
①将冻存管在37℃温水中快速摇晃融化，时间1min左右，加入4-5ml培养基混匀。
②在1000RPM左右条件下离心4min，弃上清,加1-2ml培养基吹匀，将细胞悬液加入培养瓶中
，补加适量培养基。
3、细胞冻存
：待细胞生长状态良好时进行细胞冻存保种
①弃去培养上清
，用PBS或生理盐水清洗1-2次

，加入1mL 0.25%（T25瓶）
②1-2min后，显微镜下观察细胞
，大部分细胞回缩且有少量细胞脱落，轻轻吹打下确认消化情况后加入*培养基终止消化；
③将细胞悬液1000RPM左右条件下离心4min，弃上清，加1ml冻存液重悬细胞；
④将冻存管放入程序降温盒
，放入-80℃冰箱
，4小时后将冻存管转入液氮罐储存。

下列是产品的订购信息

：

细胞培养的优点：
1.研究的对象是活细胞
在实验过程中，根据要求可始终保持细胞活力
，并可长时间监控
、检测甚至定量评估一部分活细胞的情况，包括活细胞的形态、结构
、生命活动等。
2.研究条件可以人为控制
pH
、温度
、氧气、二氧化碳

、张力等物理化学的条件，可以根据实际需要进行人为的控制，同时，可以施加化学、物理

、生物等因素作为条件而进行实验观察，这些因素同样可以处于严格控制之下
。
3.研究的样本可以达到比较均一性
通过细胞培养一定代数后，所得到的细胞系则可以达到均一性而属于同一类型的细胞，需要时，可采用克隆化等方法使细胞达到纯化。
4.研究内容便于观察
、检测和记录
采用各种研究技术：如倒置生物显微镜
、荧光显微镜、电子显微镜
、流式细胞术、激光共焦显微镜
、免疫组织化学、原位杂交、同位素标记等各种仪器设备
。
​
培养操作步骤 ：
1．用盖片镊将盖玻片自75%乙醇中取出
，用无菌丝绸布擦拭干净
，不要用纱布； 
2．将盖玻片轻轻放入6孔培养板（每孔一片）或培养皿中（每个平皿可放置2-3片）； 
3．在距离紫外灯直射范围内20-30 厘米处照射2-3小时
； 
4．将经过计数的细胞悬浮液移入培养板中
，使盖玻片*浸在培养液中
； 
5．将培养板在5% CO2水浴孵箱中37℃孵育2-3天，当贴壁细胞生长至覆盖培养板底部2/3面积时，将培养板取出，用盖片镊轻轻取出盖玻片，用蒸馏水漂洗后即可进行快速固定以及免疫细胞化学检测。 
实验要点及说明：
1．本方法适用于贴壁细胞培养，而不适用于悬浮细胞培养，悬浮细胞可使用滴片法； 
2．所使用的盖玻片应该为优质玻璃，并经过铬酸洗液处理
； 
3．盖玻片非常薄，易碎，取放盖玻片时动作要轻； 
4．如果需要更多生长状态一致的细胞，可以使用较大的培养皿

，但不宜过大，以避免培养液的浪费和增加污染机率； 
5．如果细胞贴壁生长能力较差，可将盖玻片在0.5%多聚赖氨酸溶液中浸泡5-10分钟并自然晾干。

咪丁 CAS  规格
：200mg 订购|咨询

圣草次苷;Eriocitrin CAS 13463-28-0 规格：20mg 订购|咨询

药根碱 CAS 6681-15-8 规格：20mg 订购|咨询

山银花(灰毡毛忍冬) CAS  规格：1g 订购|咨询

10-姜酚 CAS 23513-15-7 规格
：HPLC≥98%;20mg 订购|咨询

香荆芥酚 CAS 499-75-2 规格：50mg 订购|咨询

香兰素;Vanillin CAS 121-33-5 规格
：20mg 订购|咨询

乙酰水杨酸 CAS 50-78-2 规格：HPLC≥98%;20mg 订购|咨询

环嗪;纯品型;标准品;有证书 CAS 51235-04-2 规格：0.1g 订购|咨询

维生素B2 CAS 83-88-5 规格
：20mg 订购|咨询

五味藤 CAS  规格：0.5g 订购|咨询

WI-38细胞，系规格NCKAP5蛋白抗体 英文名称：NCKAP5 0.1ml

一氧化氮合酶转运诱导抗体 英文名称：NOSTRIN 0.1ml

中性鞘磷脂相关因子抗体 英文名称：NSMAF 0.1ml

人白介素3介导核因子抗体 英文名称
：NFIL3 0.2ml

SH2结构域蛋白3A抗体 英文名称：NSP3 0.1ml

NPIP样蛋白1抗体 英文名称：NPIP-like protein 1 0.1ml

转化神经突起蛋白抗体 英文名称：Neuritin 0.2ml

老年性痴呆蛋白APH2抗体 英文名称：Nicastrin 0.1ml

神经细胞凋亡调节转化蛋白1抗体（前蛋白转化酶枯草溶菌素9） 英文名称：NARC1 0.1ml

G蛋白偶联受体147抗体 英文名称
：NPFF1 Receptor 0.2ml

孤儿核受体蛋白Nur77抗体 英文名称
：Nur77 0.1ml