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细胞培养方法

：
1、细胞传代
：细胞密度达到80-90%时即可传代
①弃去培养上清，用PBS或生理盐水清洗1-2次
；
②加入2ml0.25%（T25瓶），使覆盖整个瓶或皿
，盖好放入培养箱消化；
③1-2min后，显微镜下观察细胞
，若大部分细胞回缩且有少量细胞脱落，轻轻吹打下确认消化情况后加入*培养基终止消化

；若细胞还是贴壁，放回培养箱继续消化至可以轻轻吹打下为止；
④将细胞悬液1000RPM左右条件下离心4min
，弃上清；
⑤用新鲜培养基重悬后加入培养瓶或皿中，T25培养瓶加6-8ml培养基；
⑥悬浮细胞直接离心收集，细胞沉淀重悬后分到新培养瓶中。
2、细胞复苏

：
①将冻存管在37℃温水中快速摇晃融化，时间1min左右，加入4-5ml培养基混匀。
②在1000RPM左右条件下离心4min，弃上清,加1-2ml培养基吹匀，将细胞悬液加入培养瓶中，补加适量培养基
。
3、细胞冻存
：待细胞生长状态良好时进行细胞冻存保种
①弃去培养上清，用PBS或生理盐水清洗1-2次，加入1mL 0.25%（T25瓶）
②1-2min后，显微镜下观察细胞，大部分细胞回缩且有少量细胞脱落，轻轻吹打下确认消化情况后加入*培养基终止消化；
③将细胞悬液1000RPM左右条件下离心4min
，弃上清

，加1ml冻存液重悬细胞；
④将冻存管放入程序降温盒，放入-80℃冰箱
，4小时后将冻存管转入液氮罐储存
。

下列是产品的订购信息：

细胞培养的优点
：
1.研究的对象是活细胞
在实验过程中，根据要求可始终保持细胞活力，并可长时间监控、检测甚至定量评估一部分活细胞的情况，包括活细胞的形态
、结构、生命活动等。
2.研究条件可以人为控制
pH
、温度
、氧气
、二氧化碳、张力等物理化学的条件，可以根据实际需要进行人为的控制
，同时，可以施加化学
、物理、生物等因素作为条件而进行实验观察
，这些因素同样可以处于严格控制之下
。
3.研究的样本可以达到比较均一性
通过细胞培养一定代数后，所得到的细胞系则可以达到均一性而属于同一类型的细胞，需要时，可采用克隆化等方法使细胞达到纯化
。
4.研究内容便于观察
、检测和记录
采用各种研究技术：如倒置生物显微镜
、荧光显微镜
、电子显微镜、流式细胞术、激光共焦显微镜
、免疫组织化学、原位杂交
、同位素标记等各种仪器设备
。
​
培养操作步骤 
：
1．用盖片镊将盖玻片自75%乙醇中取出，用无菌丝绸布擦拭干净，不要用纱布； 
2．将盖玻片轻轻放入6孔培养板（每孔一片）或培养皿中（每个平皿可放置2-3片）； 
3．在距离紫外灯直射范围内20-30 厘米处照射2-3小时； 
4．将经过计数的细胞悬浮液移入培养板中，使盖玻片*浸在培养液中； 
5．将培养板在5% CO2水浴孵箱中37℃孵育2-3天，当贴壁细胞生长至覆盖培养板底部2/3面积时，将培养板取出，用盖片镊轻轻取出盖玻片
，用蒸馏水漂洗后即可进行快速固定以及免疫细胞化学检测
。 
实验要点及说明：
1．本方法适用于贴壁细胞培养，而不适用于悬浮细胞培养，悬浮细胞可使用滴片法； 
2．所使用的盖玻片应该为优质玻璃，并经过铬酸洗液处理； 
3．盖玻片非常薄，易碎
，取放盖玻片时动作要轻
； 
4．如果需要更多生长状态一致的细胞，可以使用较大的培养皿，但不宜过大，以避免培养液的浪费和增加污染机率
； 
5．如果细胞贴壁生长能力较差
，可将盖玻片在0.5%多聚赖氨酸溶液中浸泡5-10分钟并自然晾干
。

TE-10(人食管细胞)5×106cells/瓶×2

小鼠胚胎成纤维细胞PA317

小鼠畸胎瘤细胞P19

猪髋动脉内细胞PIEC

SY5Y/神经母细胞瘤细胞小鼠膀胱上皮细胞*培养基

酿酒酵母 Saccharomyces cerevisiaeSP2/0(小鼠骨髓瘤细胞)

人小细胞肺细胞NCI-H446

U-937(人组织细胞淋巴瘤细胞)5×106cells/瓶×2

MC3T3-E1(小鼠胚胎成骨细胞前体细胞)5×106cells/瓶×2

3% NaC1胰胨水发酵管BR20支国产/进口

戊糖杆菌 Lactobacillus pentosusrCF, 大鼠心脏成纤维细胞

C3H 10T1/2 2A6细胞，小鼠成纤维细胞规格小鼠巨噬细胞炎性蛋白2MIP-2(Mouse Macrophage Inflammatory Protein 2) ELISA Kit 96T

大鼠热休克蛋白27HSP-27 ELISA Kit 96T

小鼠催产素OT(Mouse oxytocin) ELISA Kit 96T

人中性粒细胞趋化蛋白2NAP-2/CXCL7(Human neutrophil activating protein-2) ELISA Kit 96T

小鼠巨噬细胞炎性蛋白3βMIP-3 Beta/ELC/CCL19(Mouse macrophage inflammatory protein 3 Beta) ELISA Kit 96T

大鼠Smad1大鼠Smad1 ELISA Kit  96T

人趋化因子Human fractalkine/CX3CL1 ELISA Kit  96T

小鼠Ⅰ型胶原N末端肽NTX(Mouse cross linked N-telopeptide of type I collagen) ELISA Kit 96T

人碱性成纤维细胞生长因子9bFGF-9(Human basic fibroblast growth factor 9) ELISA Kit 96T

大鼠Smad7大鼠Smad7 ELISA Kit  96T

大鼠26S蛋白酶体26S PSM ELISA Kit  96T