產品名稱 :休斯新孢子蟲LAMP試劑盒
產品特點 :休斯新孢子蟲LAMP試劑盒上海老哥俱樂部生物相關產品 :二乙二二甲Diethylene glycol ether two :134.18 C6H14O3 :111-96-63-酚3- amino phenol :109.13 C6H7NO :591-27-52-氟-5- :125.142- -5- methyl aniline :452-84-6 C7H8FN磺胺甲惡唑 :253.2
產品型號 :50次
更新日期 :2021-02-20
訪問次數 :409
50次休斯新孢子蟲LAMP試劑盒的詳細資料 :
使用方法:
一
、樣品 DNA 的製備
用自選方法提取 Cps DNA
。注意
:DNA 純化方法是決定檢測靈敏度的關鍵因素
。如果不能很好純化樣品 DNA
,後麵的 PCR 再靈敏也不能提高整體檢測靈敏度
。
二
、製備 Cps 標準曲線(以 10-10E6 這 6 個 10 倍稀釋度為例
。由於標準品濃度非常高
,因此下列稀釋操作一定要在獨立的區域進行
,千萬不能汙染樣品或本試劑盒的其他成分)
。為增加產品穩定性和避免擴散傳染性病原
,本產品不提供活體病毒做陽性對照
,隻提供沒有傳染性的
、可以直接使用的 DN**段作為陽性對照
。
1. 標記 6 個離心管
,分別為 6
,5
,4
,3
,2 和 1 號
。
2. 用帶芯槍頭分別加入 45 μL 超純水(用帶芯槍頭
,下同)
。
3. 先將本試劑盒提供的陽性對照用 TE 緩衝液或超純水 10 倍梯度稀釋到10E7 拷貝/μL(注
:請不要將本試劑盒提供的標準品一次性稀釋至 10E7拷貝/μL
,建議每次稀釋 10 倍
,梯度稀釋至 10E7 拷貝/μL)
。
4. 在 6 號管中加入 5 μL 10E7 拷貝/μL 的 Cps 陽性對照(上步稀釋所得)
,充分震蕩 1 分鍾
,得 10E6 拷貝/μL 的陽性對照
。
5. 換槍頭
,從 6 號管中取 5 μL 溶液到 5 號管中
,充分震蕩 1 分鍾,得 10E5拷貝/μL 的陽性對照
。
6. 換槍頭
,從 5 號管中取 5 μL 溶液到 4 號管中
,重複上麵的操作直到得到 6個稀釋度的陽性對照
。
7. NC 管中不加任何陽性對照
。
8. 從 1-6 號管中分別取 5 μL 和待測樣品一起進行定量 PCR(見下步)
,每個樣品做 3 次重複
。PCR 後得到每個陽性對照稀釋樣品的熒光 PCR Ct 值
,並以之為縱軸
,以濃度的對數值為橫軸
,繪製標準曲線
。
參數規格 :
產品名稱 | 休斯新孢子蟲LAMP試劑盒 |
英文名稱 | Lamp kit for neosporidium Hughes |
規格 | 50次 |
儲存條件
:
僅用於科研14℃或-20℃樣品收集
、處理及保存方法
1. 血清
:使用不含熱原和內毒素的試管
,操作過程中避免任何細胞刺激
,收集血液後
,3000 轉離心10 分鍾將血清和紅細胞迅速小心地分離
。
2. 血漿
:EDTA
、檸檬酸鹽或肝素抗凝
。3000 轉離心30 分鍾取上清
。
3. 細胞上清液
:3000 轉離心10 分鍾去除顆粒和聚合物
。
4. 組織勻漿
:將組織加入適量生理鹽水搗碎
。3000 轉離心10 分鍾取上清
。
5. 保存
:如果樣本收集後不及時檢測
,請按一次用量分裝
,凍存於-20℃,避免反複凍融
,在室溫下解凍並確保樣品均勻地充分解凍
。
檢測步驟
:
一
、 試劑的準備
從試劑盒中取出熒光PCR反應液(BC-qPCR MIX)
、酶混合物(Enzymes MIX)
,冰上融化並振蕩混勻後
,10000rpm離心10s
。
設所需要的PCR反應管管數為N(N=樣本數+1管陰性對照+1管陽性對照)
,每個測試反應體係配製如下表
:
試劑 每個反應加入的量 N個反應加入的量
熒光PCR反應液 14µL N×14µL
酶混合物 1 µL N×1 µL
總量 15 µL N×15µL
(1) 計算好各試劑的使用量
,加入一適當體積潔淨離心管中
,充分混勻
,10000rpm離心10s
,向設定的N個PCR反應管中分別加入15μL熒光PCR反應液
,向每管中加入處理後樣品或陰性對照(NTC)和陽性對照(BC-PTC)5μL
,10000rpm瞬時離心10秒
。
7.2 qPCR反應條件
將各反應管放入定量PCR儀器的反應槽內
。
循環條件:
1循環 50℃ for 2 min
預變性 1循環 95℃ for 10 min
PCR擴增 40循環 95℃ for 15 sec
60℃ for 60 sec
在60℃延伸時收集熒光信號
。報告基團
:設置為FAM
。淬滅基團
:NONE
,請勿選擇ROX參比熒光
。
S,S)-(+)-2,2'-BIS[-(N,N-二甲)()甲]-1,1'-雙(二環己磷)二茂鐵 :932.97S, S) - (+) -2,2'-BIS[- (N, N- two (dimethylamino) methyl]-1,1'- (Ben Ji) - dicyclohexylammonium P Er Maotie) :793718-16-8 C60H66FeN2P2 10*
二氫麻醉椒苦素Two hydrogen anesthesia :276.28454C15H16O5 :19902-91-1 ,3155-57-5
醋環丙氯地孕酮Acetic acid and chloride :416.94 C24H29ClO4 :427-51-0
3-氯-4-硝甲 :171.583- -4- nitro toluene :38939-88-7 C7H6ClNO2
二乙二二甲Diethylene glycol ether two :134.18 C6H14O3 :111-96-6
3-酚3- amino phenol :109.13 C6H7NO :591-27-5
2-氟-5- :125.142- -5- methyl aniline :452-84-6 C7H8FN
磺胺甲惡唑 :253.28磺胺甲惡唑 :723-46-6 C10H11N3O3S
5-喹啉 :145.165-, the alcohol :578-67-6 C9H7NO
休斯新孢子蟲LAMP試劑盒人 Coagulation Factor III / Tissue Factor / CD142 人細胞裂解液 (陽性對照) (變性)
人 DPEP2 / MBD-2 人細胞裂解液 (陽性對照) (變性)
大鼠 ARF1 基因全長ORF克隆
大鼠 TLR4 基因全長ORF克隆
人 DMP1 基因全長ORF克隆 (表達載體), 無標簽
人 RAB6B 基因全長ORF克隆
人 CDC23 基因全長ORF克隆
人 APRT 基因全長ORF克隆
人 CD200R1 人細胞裂解液 (陽性對照) (變性)
小鼠 ARSA 人細胞裂解液 (陽性對照) (變性)
甲型流感 H3N2 (Victoria/208/2009) 血凝素 (Hemagglutinin / HA) 基因全長ORF克隆 (密碼子優化)(表達載體), 無標簽
大鼠 THBD 基因全長ORF克隆
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