老哥俱乐部

参数规格：

储存条件：
仅用于科研14℃或－20℃样品收集、处理及保存方法
1. 血清：使用不含热原和内毒素的试管，操作过程中避免任何细胞刺激，收集血液后，3000 转离心10 分钟将血清和红细胞迅速小心地分离。
2. 血浆：EDTA、柠檬酸盐或肝素抗凝
。3000 转离心30 分钟取上清

。
3. 细胞上清液：3000 转离心10 分钟去除颗粒和聚合物。
4. 组织匀浆
：将组织加入适量生理盐水捣碎。3000 转离心10 分钟取上清。
5. 保存
：如果样本收集后不及时检测
，请按一次用量分装
，冻存于-20℃
，避免反复冻融
，在室温下解冻并确保样品均匀地充分解冻
。
​
使用方法:
一
、样品 DNA 的制备
用自选方法提取 Cps DNA。注意：DNA 纯化方法是决定检测灵敏度的关键因素
。如果不能很好纯化样品 DNA，后面的 PCR 再灵敏也不能提高整体检测灵敏度
。
二、制备 Cps 标准曲线（以 10-10E6 这 6 个 10 倍稀释度为例
。由于标准品浓度非常高，因此下列稀释操作一定要在独立的区域进行，千万不能污染样品或本试剂盒的其他成分）。为增加产品稳定性和避免扩散传染性病原，本产品不提供活体病毒做阳性对照，只提供没有传染性的
、可以直接使用的 DN**段作为阳性对照
。
1. 标记 6 个离心管，分别为 6
，5
，4

，3，2 和 1 号

。
2. 用带芯枪头分别加入 45 μL 超纯水（用带芯枪头，下同）。
3. 先将本试剂盒提供的阳性对照用 TE 缓冲液或超纯水 10 倍梯度稀释到10E7 拷贝/μL（注
：请不要将本试剂盒提供的标准品一次性稀释至 10E7拷贝/μL，建议每次稀释 10 倍
，梯度稀释至 10E7 拷贝/μL）
。
4. 在 6 号管中加入 5 μL 10E7 拷贝/μL 的 Cps 阳性对照(上步稀释所得)
，充分震荡 1 分钟，得 10E6 拷贝/μL 的阳性对照
。
5. 换枪头
，从 6 号管中取 5 μL 溶液到 5 号管中

，充分震荡 1 分钟，得 10E5拷贝/μL 的阳性对照。
6. 换枪头
，从 5 号管中取 5 μL 溶液到 4 号管中，重复上面的操作直到得到 6个稀释度的阳性对照
。
7. NC 管中不加任何阳性对照。
8. 从 1-6 号管中分别取 5 μL 和待测样品一起进行定量 PCR（见下步），每个样品做 3 次重复。PCR 后得到每个阳性对照稀释样品的荧光 PCR Ct 值，并以之为纵轴，以浓度的对数值为横轴
，绘制标准曲线。 
检测步骤：
一、 试剂的准备
从试剂盒中取出荧光PCR反应液(BC-qPCR MIX)、酶混合物(Enzymes MIX)，冰上融化并振荡混匀后，10000rpm离心10s。
设所需要的PCR反应管管数为N(N=样本数+1管阴性对照+1管阳性对照)
，每个测试反应体系配制如下表：
试剂 每个反应加入的量 N个反应加入的量
荧光PCR反应液 14µL N×14µL
酶混合物 1 µL N×1 µL
总量 15 µL N×15µL
（1） 计算好各试剂的使用量，加入一适当体积洁净离心管中，充分混匀，10000rpm离心10s，向设定的N个PCR反应管中分别加入15μL荧光PCR反应液，向每管中加入处理后样品或阴性对照(NTC)和阳性对照(BC-PTC)5μL，10000rpm瞬时离心10秒。
7.2 qPCR反应条件
将各反应管放入定量PCR仪器的反应槽内。
循环条件:
1循环 50℃ for 2 min
预变性 1循环 95℃ for 10 min
PCR扩增 40循环 95℃ for 15 sec
60℃ for 60 sec
在60℃延伸时收集荧光信号。报告基团：设置为FAM。淬灭基团：NONE，请勿选择ROX参比荧光。

3,4,7,8-四甲-1,10-菲罗啉分子式：236.32英文名称：3,4,7,8- four methyl -1,10-：1660-93-1分子量： C16H16N2

二氯(1,10-菲咯啉)铜分子式
：314.66英文名称
：二氯（1,10 -菲咯啉）铜：14783-09-6分子量： C12H8Cl2CuN2

牛磺雄去氧胆英文名称：Niu Huangxiong deoxycholic acid分子式：499.7分子量：C26H45NO6S：14605-22-2

5-氯-8-羟喹啉分子式：179.6英文名称
：5- -8- hydroxy group：130-16-5分子量： C9H6ClNO

1,2-双(二膦)分子式
：446.46英文名称
：1,2- bis (two phenyl) benzene
：13991-08-7分子量
： C30H24P2

2-溴-3-三氟甲吡分子式：226英文名称：2- three -3-
：175205-82-0分子量： C6H3BrF3N

天青I英文名称
：Azure I分子式：305.83分子量： C15H16ClN3S：531-55-5

碳酸锰分子式
：114.94英文名称
：Manganese carbonate：598-62-9分子量
： MnCO3

吉拉尔特试剂T英文名称
：Giralt reagent T分子式：167.64分子量
： C5H14ClN3O

：123-46-6

杜氏利什曼虫(黑热病病原虫)LAMP试剂盒甲型流感 H7N7 (A/Netherlands/219/2003) Matrix protein 1 / M1 基因全长ORF克隆 (密码子优化)(表达载体), 无标签

人 BMP-2 基因全长ORF克隆 (表达载体), 带HA标签

小鼠 GLIPR1 基因全长ORF克隆

重组狗 ANGPTL7 / Angiopoietin-like 7 蛋白 (His 标签)

人 F13A1 基因全长ORF克隆

小鼠 Carbonic Anhydrase VIII / Car8 ELISA配对抗体

小鼠 ALK-3 / BMPR1A 人细胞裂解液 (阳性对照) (变性)

人 BTG1 基因全长ORF克隆

人 MTHFR 基因全长ORF克隆

人 JTB 基因全长ORF克隆

大鼠 VPS36 基因全长ORF克隆

人 HFE2 / RGM-C 转录变体a 基因全长ORF克隆