老哥俱乐部

参数规格
：

储存条件
：
仅用于科研14℃或－20℃样品收集
、处理及保存方法
1. 血清
：使用不含热原和内毒素的试管
，操作过程中避免任何细胞刺激，收集血液后
，3000 转离心10 分钟将血清和红细胞迅速小心地分离。
2. 血浆：EDTA、柠檬酸盐或肝素抗凝。3000 转离心30 分钟取上清
。
3. 细胞上清液：3000 转离心10 分钟去除颗粒和聚合物
。
4. 组织匀浆：将组织加入适量生理盐水捣碎。3000 转离心10 分钟取上清
。
5. 保存：如果样本收集后不及时检测
，请按一次用量分装
，冻存于-20℃
，避免反复冻融，在室温下解冻并确保样品均匀地充分解冻
。
​
使用方法:
一、样品 DNA 的制备
用自选方法提取 Cps DNA
。注意：DNA 纯化方法是决定检测灵敏度的关键因素
。如果不能很好纯化样品 DNA，后面的 PCR 再灵敏也不能提高整体检测灵敏度。
二、制备 Cps 标准曲线（以 10-10E6 这 6 个 10 倍稀释度为例
。由于标准品浓度非常高，因此下列稀释操作一定要在独立的区域进行，千万不能污染样品或本试剂盒的其他成分）
。为增加产品稳定性和避免扩散传染性病原，本产品不提供活体病毒做阳性对照
，只提供没有传染性的
、可以直接使用的 DN**段作为阳性对照
。
1. 标记 6 个离心管，分别为 6，5
，4
，3
，2 和 1 号
。
2. 用带芯枪头分别加入 45 μL 超纯水（用带芯枪头，下同）。
3. 先将本试剂盒提供的阳性对照用 TE 缓冲液或超纯水 10 倍梯度稀释到10E7 拷贝/μL（注：请不要将本试剂盒提供的标准品一次性稀释至 10E7拷贝/μL
，建议每次稀释 10 倍，梯度稀释至 10E7 拷贝/μL）。
4. 在 6 号管中加入 5 μL 10E7 拷贝/μL 的 Cps 阳性对照(上步稀释所得)
，充分震荡 1 分钟，得 10E6 拷贝/μL 的阳性对照。
5. 换枪头，从 6 号管中取 5 μL 溶液到 5 号管中
，充分震荡 1 分钟，得 10E5拷贝/μL 的阳性对照。
6. 换枪头，从 5 号管中取 5 μL 溶液到 4 号管中
，重复上面的操作直到得到 6个稀释度的阳性对照。
7. NC 管中不加任何阳性对照
。
8. 从 1-6 号管中分别取 5 μL 和待测样品一起进行定量 PCR（见下步），每个样品做 3 次重复
。PCR 后得到每个阳性对照稀释样品的荧光 PCR Ct 值，并以之为纵轴，以浓度的对数值为横轴，绘制标准曲线。 
检测步骤：
一

、 试剂的准备
从试剂盒中取出荧光PCR反应液(BC-qPCR MIX)、酶混合物(Enzymes MIX)，冰上融化并振荡混匀后，10000rpm离心10s。
设所需要的PCR反应管管数为N(N=样本数+1管阴性对照+1管阳性对照)
，每个测试反应体系配制如下表：
试剂 每个反应加入的量 N个反应加入的量
荧光PCR反应液 14µL N×14µL
酶混合物 1 µL N×1 µL
总量 15 µL N×15µL
（1） 计算好各试剂的使用量
，加入一适当体积洁净离心管中，充分混匀
，10000rpm离心10s

，向设定的N个PCR反应管中分别加入15μL荧光PCR反应液，向每管中加入处理后样品或阴性对照(NTC)和阳性对照(BC-PTC)5μL，10000rpm瞬时离心10秒。
7.2 qPCR反应条件
将各反应管放入定量PCR仪器的反应槽内。
循环条件:
1循环 50℃ for 2 min
预变性 1循环 95℃ for 10 min
PCR扩增 40循环 95℃ for 15 sec
60℃ for 60 sec
在60℃延伸时收集荧光信号。报告基团：设置为FAM。淬灭基团：NONE
，请勿选择ROX参比荧光
。

SABC(兔IgG)-AP kit 100-200T  盒

HE染色试剂盒 3×100ml  瓶

Cow Bile Salt 牛胆盐 25g  瓶

血球计数器 四位  个

40%丙烯酰胺(19:1) 500ml  瓶

结晶紫染色液(1%) 500ml  瓶

Ligustroflavone 女贞苷 260413-62-5  20mg

4×SDS-PAGE分离胶缓冲液(PH=8.8) 100ml  瓶

Alpha-Naphthoflsvone 苯并黄素 604-59-1  20mg

红细胞裂解液 100ml  瓶

anti-GAPDH Rabbit Polyclonal antibody 100ul  瓶

Tanshinone IIA-sulfonic sodium 丹参酮IIA-磺酸钠 69659-80-9  20mg

腺病毒C型LAMP试剂盒人 PAEP 基因全长ORF克隆

重组狗 IL-8 / CXCL8 蛋白

人 CPXM2 基因全长ORF克隆

甲型流感 H7N9 (Shanghai/Patient3/2013) 血凝素 (Hemagglutinin / HA) 基因全长ORF克隆 (密码子优化)(表达载体), 无标签

人 KEAP1 / INRF2 杆状病毒-昆虫细胞裂解液 (阳性对照) (变性)

人 Galectin-1 基因全长ORF克隆

人 PNP 基因全长ORF克隆

人 Insulin Receptor / INSR / CD220 ( Short Isoform ) 人细胞裂解液 (阳性对照) (变性)

人 CDC37 基因全长ORF克隆

人肠道病毒71型 VP0 杆状病毒-昆虫细胞裂解液 (阳性对照) (变性)

人 GFRα1 / GDNFRA 转录变体2 基因全长ORF克隆

小鼠 CAR2 基因全长ORF克隆