老哥俱乐部

细胞培养方法
：
1
、细胞传代：细胞密度达到80-90%时即可传代
①弃去培养上清，用PBS或生理盐水清洗1-2次

；
②加入2ml0.25%（T25瓶），使覆盖整个瓶或皿
，盖好放入培养箱消化；
③1-2min后
，显微镜下观察细胞，若大部分细胞回缩且有少量细胞脱落，轻轻吹打下确认消化情况后加入*培养基终止消化；若细胞还是贴壁
，放回培养箱继续消化至可以轻轻吹打下为止
；
④将细胞悬液1000RPM左右条件下离心4min，弃上清
；
⑤用新鲜培养基重悬后加入培养瓶或皿中，T25培养瓶加6-8ml培养基
；
⑥悬浮细胞直接离心收集
，细胞沉淀重悬后分到新培养瓶中。
2、细胞复苏：
①将冻存管在37℃温水中快速摇晃融化，时间1min左右，加入4-5ml培养基混匀
。
②在1000RPM左右条件下离心4min，弃上清,加1-2ml培养基吹匀

，将细胞悬液加入培养瓶中
，补加适量培养基
。
3、细胞冻存
：待细胞生长状态良好时进行细胞冻存保种
①弃去培养上清，用PBS或生理盐水清洗1-2次，加入1mL 0.25%（T25瓶）
②1-2min后
，显微镜下观察细胞，大部分细胞回缩且有少量细胞脱落

，轻轻吹打下确认消化情况后加入*培养基终止消化；
③将细胞悬液1000RPM左右条件下离心4min，弃上清，加1ml冻存液重悬细胞
；
④将冻存管放入程序降温盒，放入-80℃冰箱，4小时后将冻存管转入液氮罐储存。

下列是产品的订购信息：

细胞培养的优点：
1.研究的对象是活细胞
在实验过程中，根据要求可始终保持细胞活力
，并可长时间监控、检测甚至定量评估一部分活细胞的情况，包括活细胞的形态、结构、生命活动等
。
2.研究条件可以人为控制
pH
、温度、氧气、二氧化碳

、张力等物理化学的条件，可以根据实际需要进行人为的控制
，同时，可以施加化学
、物理
、生物等因素作为条件而进行实验观察
，这些因素同样可以处于严格控制之下。
3.研究的样本可以达到比较均一性
通过细胞培养一定代数后
，所得到的细胞系则可以达到均一性而属于同一类型的细胞

，需要时，可采用克隆化等方法使细胞达到纯化。
4.研究内容便于观察、检测和记录
采用各种研究技术：如倒置生物显微镜
、荧光显微镜、电子显微镜
、流式细胞术、激光共焦显微镜、免疫组织化学
、原位杂交
、同位素标记等各种仪器设备
。
​
培养操作步骤 ：
1．用盖片镊将盖玻片自75%乙醇中取出，用无菌丝绸布擦拭干净，不要用纱布
； 
2．将盖玻片轻轻放入6孔培养板（每孔一片）或培养皿中（每个平皿可放置2-3片）； 
3．在距离紫外灯直射范围内20-30 厘米处照射2-3小时； 
4．将经过计数的细胞悬浮液移入培养板中，使盖玻片*浸在培养液中； 
5．将培养板在5% CO2水浴孵箱中37℃孵育2-3天，当贴壁细胞生长至覆盖培养板底部2/3面积时
，将培养板取出，用盖片镊轻轻取出盖玻片

，用蒸馏水漂洗后即可进行快速固定以及免疫细胞化学检测。 
实验要点及说明：
1．本方法适用于贴壁细胞培养，而不适用于悬浮细胞培养，悬浮细胞可使用滴片法
； 
2．所使用的盖玻片应该为优质玻璃
，并经过铬酸洗液处理； 
3．盖玻片非常薄，易碎
，取放盖玻片时动作要轻
； 
4．如果需要更多生长状态一致的细胞
，可以使用较大的培养皿，但不宜过大，以避免培养液的浪费和增加污染机率； 
5．如果细胞贴壁生长能力较差

，可将盖玻片在0.5%多聚赖氨酸溶液中浸泡5-10分钟并自然晾干

。

特拉唑嗪 CAS 63074-08-8 规格
：100mg 订购|咨询

L-天冬酰胺 CAS 70-47-3 规格

：HPLC≥98%;200mg 订购|咨询

异去甲蟛蜞菊内酯 CAS 6468-55-9 规格：20mg 订购|咨询

伪碱 CAS  规格：100mg 订购|咨询

没食子酸甲酯;Methyl gallat CAS 99-24-1 规格
：20mg 订购|咨询

律草 CAS 26472-41-3 规格：HPLC≥98%;10mg 订购|咨询

绿原酸 CAS 327-97-9 规格：20mg 订购|咨询

山麦冬 CAS  规格
：1g 订购|咨询

格列风内酯;Griffonilide CAS 61371-55-9 规格
：20mg 订购|咨询

辅酶Q10 CAS 303-98-0 规格：HPLC≥98%;20mg 订购|咨询

五味子甲素 CAS 61281-38-7 规格：20mg 订购|咨询

GBC-SD细胞，胆囊癌细胞说明书神经元，肌肉特异性烯醇化酶抗体 英文名称

：ENO1+ENO2+ENO3 0.2ml

内皮分化型G蛋白偶联受体3抗体 英文名称：EDG3 0.1ml

发育相关蛋白ERCC6L抗体（乙醇致畸因子） 英文名称
：ERCC6L 0.2ml

猪源产肠毒素性大肠杆菌K99抗体 英文名称：Escherichka coli K99 0.2ml

α内磺肽抗体 英文名称
：ENSA 0.2ml

表皮生长因子样激素受体1抗体 英文名称

：EMR1 0.1ml

磷酸化转录因子E2F-1抗体 英文名称：phospho-E2F1 (Ser337) 0.1ml

CREB结合蛋白p300抗体 英文名称：Ep300 0.1ml

EB病毒LMP-2A蛋白抗体 英文名称
：LMP2A 0.2ml

EB病毒核抗原1抗体 英文名称
：EBV Nuclear Antigen 0.1ml

磷酸化雌激素受体β抗体 英文名称：phospho-Estrogen Receptor beta (Ser87) 0.1ml