老哥俱乐部

ELISA 试验时
，注意事项如下： 
     1. 正式试验时，应分别以阳性对照与阴性对照控制试验条件
，待检样品应作一式二份，以保证实验结果的准确性。有时本底较高
，说明有非特异性反应，可采用羊血清、兔血清或BSA等封闭。 
     2. 在ELISA中，进行各项实验条件的选择是很重要的
，其中包括: 
     （1） 固相载体的选择
：许多物质可作为固相载体
，如聚氯乙烯

、聚苯乙烯、聚丙酰胺和纤维素等。其形式可以是凹孔平板

、试管
、珠粒等。目前常用的是40孔聚苯乙烯凹孔板。不管何种载体，在使用前均可进行筛选：用等量抗原包被，在同一实验条件下进行反应，观察其显色反应是否均一性，据此判明其吸附性能是否良好

。 
     （2） 包被抗体（或抗原）的选择
：将抗体（或抗原）吸附在固相载体表面时
，要求纯度要好,吸附时一般要求PH在9.0～9.6之间。吸附温度，时间及其蛋白量也有一定影响,一般多采用4℃18～24小时。蛋白质包被的zui适浓度需进行滴定：即用不同的蛋白质浓度（0.1、1.0和10μg／ml等）进行包被后
，在其它试验条件相同时

，观察阳性标本的OD值。选择OD值zui大而蛋白量zui少的浓度。对于多数蛋白质来说通常为1～10μg／ml。 
     （3） 酶标记抗体工作浓度的选择
：首先用直接ELISA法进行初步效价的滴定（见酶标记抗体部份）
。然后再固定其它条件或采取“方阵法”（包被物、待检样品的参考品及酶标记抗体分别为不同的稀释度）在正式实验系统里准确地滴定其工作浓度。 
     （4） 酶的底物及供氢体的选择：对供氢体的选择要求是价廉、安全
、有明显地显色反应，而本身无色。有些供氢体（如OPD等）有潜在的致癌作用
，应注意防护。有条件者应使用不致癌
、灵敏度高的供氢体
，如TMB和ABTS是目前较为满意的供氢体

。底物作用一段时间后，应加入强酸或强碱以终止反应
。通常底物作用时间，以10-30分钟为宜。底物使用液必须新鲜配制，尤其是H2O2在临用前加入 。

产品名称
：增殖诱导配体ELIS检测试剂盒
英文名称

：a proliferation inducing ligand
产品货号：EY-E97472
产品规格
：48T/96T
产品保存
：2-8℃，有效期6个月
主要组成成分：试剂 
    性状
：液体 
    产品规格
：96T/48T 
    96T指可以做94个标本，2个标准对照 
    48T指可以做47个标本
，1个标准对照 
    96T-84个样本 
    48T-42个样本 
    待检样本：体液，血清，血浆，细胞培养上清液，尿液，组织匀浆,心房水标本等等

。 

样品收集、处理及保存方法
1）血清-----操作过程中避免任何细胞刺激。使用不含热原和内毒素的试管。收集血液后，1000×g离心10分钟将血清和红细胞迅速小心地分离
。
2）血浆-----EDTA、柠檬酸盐、肝素血浆可用于检测。1000×g离心30分钟去除颗粒。
3）细胞上清液---1000×g离心10分钟去除颗粒和聚合物。
4）组织匀浆-----将组织加入适量生理盐水捣碎
。1000×g离心10分钟，取上清液
5）保存------如果样品不立即使用
，应将其分成小部分-70 ℃保存，避免反复冷冻。尽可能的不要使用溶血或高血脂血


。如果血清中大量颗粒，检测前先离心或过滤
。不要在37℃或更高的温度加热解冻。应在室温下解冻并确保样品均匀地充分解冻。
注意事项
1）试剂应按标签说明书储存
，使用前恢复到室温
。稀稀过后的标准品应丢弃，不可保存
。
2）实验中不用的板条应立即放回包装袋中，密封保存，以免变质。
3）不用的其它试剂应包装好或盖好。不同批号的试剂不要混用。保质前使用

。
4）使用一次性的吸头以免交叉污染，吸取终止液和底物A、B液时，避免使用带金属部分的加样器。
5）使用干净的塑料容器配置洗涤液
。使用前充分混匀试剂盒里的各种成份及样品。
6）洗涤酶标板时应充分拍干，不要将吸水纸直接放入酶标反应孔中吸水

。
7）底物A应挥发
，避免长时间打开盖子。底物B对光敏感
，避免长时间暴露于光下
。避免用手接触，有毒。实验完成后应立即读取OD值。
8）加入试剂的顺序应一致，以保证所有反应板孔温育的时间一样。
9）按照说明书中标明的时间
、加液的量及顺序进行温育操作。

Agarose 琼脂糖 100g  瓶

Nitrofurantoin 妥因 5g  瓶

Enrofloxacin HCl 盐酸 112732-17-9  100mg

Methyl jasmonate茉莉酸甲酯 5ml  瓶

圆盖玻片 直径10mm 100片  个

Erythritol 赤藓糖醇 25g  瓶

Tetracyclin HCl 10g  瓶

Methyl methacrylate polymer 聚甲丙烯酸甲酯（牙托粉） 100g  瓶

D-Alanine D- 338-69-2  100mg

HZ830大孔吸附树脂 500g  瓶

0.2mlPCR管(鼓盖) 1000支  包

细胞过滤筛(不锈钢) 200目  个

增殖诱导配体ELIS检测试剂盒RhoA抗原RhoA (RhoA protein) 0.5mg

RhoC抗原Rho C(Ras homolog gene family member C) 0.5mg

环指蛋白148抗原RNF148(Ring finger protein 148) 0.5mg

Rho相关蛋白激酶1抗原ROCK1 (Rho-associated coiled-coil containing protein kinase 1) 0.5mg

Rho相关蛋白激酶2抗原ROCK2 (Rho-associated coiled-coil containing protein kinase 2) 0.5mg

6-磷酸脱氢酶抗原S6PDH(NADP sorbitol-6-phosphate dehydrogenase) 0.5mg

核受体RXRα抗原RXR Alpha(retinoid-X receptor alpha) 0.5mg

S100B蛋白抗原S100B 0.5mg

S100B蛋白多肽S100B(S100 calcium binding protein B)(human, mouse, rat, bovine, Rabbit, chicken) 0.5mg

钙结合蛋白S100A1抗原S-100A1 (S100 calcium-binding protein A1) 0.5mg

核基质结合区结合蛋白1抗原SATB1(special AT-rich sequence binding protein) 0.5mg