Annexin A5 DRGelisa試劑盒說明書服務承諾 ：
一 、質量保證,有問題免費包換 ；
二 、提供免費代測服務（為客戶提供來樣檢測服務,zui大限度實驗結果的有效性） ；
三 、提供全程技術指導 。

大鼠膜聯蛋白A5（Annexin A5）DRGelisa試劑盒 Rat Annexin A5 ELISA Kit
Annexin A5 DRGelisa試劑盒說明書【實驗用途】Annexin A5(膜聯蛋白A5), 膜聯蛋白A5是一個Ca~(2+)依賴的磷脂結合蛋白家族,從上世紀70年代末發現*個膜聯蛋白至今,在脊椎類生物中已發現了12個家族成員 。它們在結構上都具有高度保守的C末端 。所提供的ELISA Kit是典型的夾心法酶聯免疫吸附測定試劑盒（ELISA） 。預先包被的抗體為多克隆抗體 。檢測相抗體也為多克隆抗體 ，經（biotin）標記 。樣品和標記抗體先後加入酶標板孔反應後 ，PBS或TBS洗滌 。隨後加入過氧化物酶標記的親和素反應 ；經過PBS或TBS的*洗滌後用底物TMB顯色 。TMB在過氧化物酶的催化下轉化成藍色 ，並在酸的作用下轉化成終的黃色 。顏色的深淺和樣品中的待測因子呈正相關 。
試劑盒組成及試劑配製  ：
1.Annexin A5 DRGelisa試劑盒說明書 酶聯板（Assay plate ） ：一塊（96孔） 。 
2. 標準品（Standard） ：2瓶（凍幹品） 。
3. 樣品稀釋液（Sample Diluent） ：1×20ml/瓶
4. 標記抗體稀釋液（Biotin-antibody Diluent） ：1×10ml/瓶 。
5. 辣根過氧化物酶標記親和素稀釋液 （HRP-avidin Diluent）：1×10ml/瓶 。
6. 標記抗體（Biotin-antibody） ：1×120μl/瓶（1 ：100）
7. 辣根過氧化物酶標記親和素（HRP-avidin）：1×120μl/瓶（1 ：100）
8. 底物溶液（TMB Substrate） ：1×10ml/瓶 。 
9. 濃洗滌液（Wash Buffer） ：1×20ml/瓶 ，使用時每瓶用蒸餾水稀釋25倍 。 
10. 終止液（Stop Solution） ：1×10ml/瓶（2N H2SO4） 。
​
操作流程 ：
（1）Annexin A5 DRGelisa試劑盒說明書待測樣品孔中每孔加入待測樣品100μl ，每種樣品設3個平行孔 ；設兩個陰性對照孔 ，每孔加未處理組的細胞裂解液100μl ；另設一個空白對照孔 ，加入純細胞裂解液100μl 。 
（2）酶標板置4℃ ，包被過夜 。
（3）洗板 ：吸幹孔內反應液 ，用洗滌液過洗一遍（將洗滌液注滿板孔後 ，即甩去） ，之後將洗滌液注滿板孔 ，浸泡1-2分鍾 ，間歇搖動 。甩去孔內液體後在吸水紙上拍幹 。重複洗滌3-4次 。
（4）陰性對照孔每孔加入PBS 50μl ，樣品孔及空白孔每孔加入1:500稀釋的兔抗人AIF抗體工作液50μl 。 
（5）酶標板置37℃培養箱的濕盒內 ，孵育60min。 
（6）洗板 ，同（4） 。 
（7）每孔加1:5000稀釋的HRP-標記的山羊抗兔抗體工作液 100μl 。 
（8）酶標板置37℃培養箱的濕盒內 ，孵育60min 。 
（9）洗板 ，同（4） 。 
（10）每孔加TMB顯色液 100μl ，輕輕混勻10s ，置37℃暗處反應15-20min 。 
（11）每孔加100μl 2mol/L H2SO4終止反應 。 
（12）分別測450nm 吸光值W1和630nm吸光值W2 ，終測得的OD值為兩者之差（W1-W2） ，以減少由容器上的劃痕或指印等造成的光幹擾 。
（13）數據處理 ：在得出標本（S）和陰性對照（N）的 OD值後 ，計算S/N值 。S/N≥2.1為陽性判定標準 。
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PC-3M細胞株　1瓶　PC-3M　低溫運輸和保存

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