老哥俱乐部

储存条件：
仅用于科研14℃或－20℃样品收集

、处理及保存方法
1. 血清：使用不含热原和内毒素的试管，操作过程中避免任何细胞刺激
，收集血液后，3000 转离心10 分钟将血清和红细胞迅速小心地分离。
2. 血浆：EDTA、柠檬酸盐或肝素抗凝
。3000 转离心30 分钟取上清。
3. 细胞上清液：3000 转离心10 分钟去除颗粒和聚合物。
4. 组织匀浆
：将组织加入适量生理盐水捣碎。3000 转离心10 分钟取上清。
5. 保存：如果样本收集后不及时检测，请按一次用量分装
，冻存于-20℃
，避免反复冻融，在室温下解冻并确保样品均匀地充分解冻
。

参数规格
：

​
使用方法:
一、样品 DNA 的制备
用自选方法提取 Cps DNA
。注意：DNA 纯化方法是决定检测灵敏度的关键因素
。如果不能很好纯化样品 DNA，后面的 PCR 再灵敏也不能提高整体检测灵敏度。
二
、制备 Cps 标准曲线（以 10-10E6 这 6 个 10 倍稀释度为例。由于标准品浓度非常高，因此下列稀释操作一定要在独立的区域进行，千万不能污染样品或本试剂盒的其他成分）。为增加产品稳定性和避免扩散传染性病原，本产品不提供活体病毒做阳性对照，只提供没有传染性的
、可以直接使用的 DN**段作为阳性对照。
1. 标记 6 个离心管
，分别为 6，5，4，3，2 和 1 号
。
2. 用带芯枪头分别加入 45 μL 超纯水（用带芯枪头，下同）
。
3. 先将本试剂盒提供的阳性对照用 TE 缓冲液或超纯水 10 倍梯度稀释到10E7 拷贝/μL（注
：请不要将本试剂盒提供的标准品一次性稀释至 10E7拷贝/μL，建议每次稀释 10 倍，梯度稀释至 10E7 拷贝/μL）

。
4. 在 6 号管中加入 5 μL 10E7 拷贝/μL 的 Cps 阳性对照(上步稀释所得)，充分震荡 1 分钟，得 10E6 拷贝/μL 的阳性对照。
5. 换枪头，从 6 号管中取 5 μL 溶液到 5 号管中，充分震荡 1 分钟，得 10E5拷贝/μL 的阳性对照
。
6. 换枪头
，从 5 号管中取 5 μL 溶液到 4 号管中，重复上面的操作直到得到 6个稀释度的阳性对照
。
7. NC 管中不加任何阳性对照
。
8. 从 1-6 号管中分别取 5 μL 和待测样品一起进行定量 PCR（见下步），每个样品做 3 次重复。PCR 后得到每个阳性对照稀释样品的荧光 PCR Ct 值

，并以之为纵轴，以浓度的对数值为横轴
，绘制标准曲线
。 
检测步骤

：
一、 试剂的准备
从试剂盒中取出荧光PCR反应液(BC-qPCR MIX)、酶混合物(Enzymes MIX)
，冰上融化并振荡混匀后，10000rpm离心10s
。
设所需要的PCR反应管管数为N(N=样本数+1管阴性对照+1管阳性对照)
，每个测试反应体系配制如下表：
试剂 每个反应加入的量 N个反应加入的量
荧光PCR反应液 14µL N×14µL
酶混合物 1 µL N×1 µL
总量 15 µL N×15µL
（1） 计算好各试剂的使用量
，加入一适当体积洁净离心管中，充分混匀，10000rpm离心10s，向设定的N个PCR反应管中分别加入15μL荧光PCR反应液，向每管中加入处理后样品或阴性对照(NTC)和阳性对照(BC-PTC)5μL，10000rpm瞬时离心10秒
。
7.2 qPCR反应条件
将各反应管放入定量PCR仪器的反应槽内。
循环条件:
1循环 50℃ for 2 min
预变性 1循环 95℃ for 10 min
PCR扩增 40循环 95℃ for 15 sec
60℃ for 60 sec
在60℃延伸时收集荧光信号。报告基团

：设置为FAM。淬灭基团
：NONE
，请勿选择ROX参比荧光。

二十五Twenty-five acid
：382.67 CH3(CH2)23COOH：

4-(2-吡)甲醚：185.234- (2- pyridine) phenyl ether ether：5957-90-4 C12H11NO

1-乙酰溴吡：278.151- acetyl phenyl bromide：16883-69-5 C13H12BrNO

柚皮苷Naringin：580.53458C27H32O14
：10236-47-2

硫酸铝：666.43Aluminium sulfate：7784-31-8 Al2(SO4)3·18H2O

对氟甲

：110.13To f：352-32-9 C7H7F； CH3C6H4F

结晶紫Crystal violet：407.98 C25H30N3Cl：548-62-9

八氟萘：248.075Eight f

：313-72-4 C8F8

3-邻-甲氧
：3- ortho toluene oxypiperidine：63843-39-0 C12H17NO

鲑鱼立克次氏体LAMP试剂盒甲型流感 H1N2 (A/swine/Guangxi/13/2006) 血凝素 (Hemagglutinin / HA) 人细胞裂解液 (阳性对照) (变性)

人 KIR2DL4 / CD158D CHO细胞裂解液 (阳性对照) (变性)

人 RB1 / OSRC 基因全长ORF克隆 (表达载体), 无标签

小鼠 INSR 基因全长ORF克隆

人 CD155 / PVR 转录变体1 基因全长ORF克隆

人 XG 基因全长ORF克隆

人 / 食蟹猴 VEGF / VEGFA / VEGF165 人细胞裂解液 (阳性对照) (变性)

大鼠 CD111 / Nectin-1 / PVRL1 人细胞裂解液 (阳性对照) (变性)

小鼠 CD157 / BST1 ELISA配对抗体

大鼠 CD25 / IL2Ra 基因全长ORF克隆

人 BCAR3 基因全长ORF克隆 (表达载体), 无标签

人 CLVS1 基因全长ORF克隆