實驗材料與試劑配製 ：
1. 儀器與材料 ：酶標儀（使用前預熱30分鍾） ，微量加液器 、吸頭 、蒸餾水或去離子水 ，濾紙 。
2. 緩衝液使用 ：加5ul 的緩衝液於50ul 的樣品中 ，如果樣品量不夠或者不確定 ，緩衝液和樣品的混合比例不要小於1:10即可 。
混勻 ，靜置1小時備用（如果標本是血清或者血漿 ，此步驟忽略） 。
3. 洗液的配製 ：按1:100的比例配製洗液備用 。
樣品收集 、處理及保存
1. 細胞培養上清 ：適用於檢測體外培養的細胞分泌性成份 。用無菌管收集細胞上清液 ，以1000×g離心15分鍾 ，收集上清 。
2. 細胞 ：用PBS反複洗滌細胞3次 ，調整細胞濃度達到104-106/ml 左右 ，通過反複凍融 ，使細胞破壞並放出細胞內成份 ，或者細胞超聲粉碎 ，離心取上清液檢測 。
3. 血清 ：在室溫下 ，血液自然凝固 ，以1000×g離心15分鍾 ，取上清待測 。
4. 血漿 ：應根據標本的要求選擇EDTA 或檸檬酸鈉作為抗凝劑 ，混合後靜置10-20 分鍾後 ，以1000×g離心15分鍾 ，收集上
清 。
5. 體液 ：包括胸腹水 、腦脊液 ，分泌物等 。使用不含熱原和內毒素的離心管收集 ，以1000×g離心15分鍾 ，收集上清 。
6. 組織標本 ：切取組織標本 ，稱取重量0.5mg ，加入500ul 的PBS ，用手工或勻漿器 ，或超聲破碎儀將標本勻漿 ，以2000-3000
rmp離心20 分鍾 ，收集上清進行檢測 。
7. 樣品中不能含有NaN3 ，因NaN3 抑製辣根過氧化物酶的（HRP）活性。
8. 保存 ：如果樣品不能立即檢測 ，應將其分裝 ，-70 ℃保存 ，避免反複冷凍 。保存過程中如出現沉澱 ，應再次離心 。血液標本盡可能的不要使用溶血或高血脂血 。如果血清中含大量顆粒 ，檢測前先離心或過濾 。不要在37℃或更高的溫度加熱解凍 。應在室溫下解凍並確保樣品均勻地充分解凍 。
操作步驟：
1. 取出試劑盒 ，室溫（20-25℃）放置 30 分鍾 。
2. 分組 ：取出 96 孔板 ，根據待測樣品數量加上標準品的數量決定所需的板條數 ，把剩餘的板條繼續冷藏處理 。分別設標準
品組（6 個濃度） 、空白孔 、待測樣品組 。
注 ：為減少實驗誤差 ，保證準確性 ，建議設置複孔 。
3. 加樣 ：依照標準品的順序分別加入 50ul 的標準品溶液於空白微孔中 ；空白對照孔加入 50ul 的蒸餾水 ；其餘微孔中加入 50ul
的待測樣本 。
4. 加酶標溶液 ：標準品組 、待測樣本組各孔中加入 100ul 的酶標溶液（空白對照孔除外） 。
5. 溫育 ：酶標板用封板紙密封後 ，放入濕盒內於 37℃恒溫孵育 1 小時 。
6. 洗板 ：用稀釋後的洗滌液注滿每孔 ，靜置 15-30s ，充分清洗酶標板 5 次 ，用吸水紙*拍幹 。
7. 顯色 ：各孔加入顯色劑 A 液 50ul 後 ，再加入顯色劑 B 液 50ul 。
8. 終止 ：25-37℃下避光反應 10-15 分鍾 ，加入 50ul 終止液 。
9. 讀板 ：在 450nm 波長讀取各孔的 OD 值 。
注 ：讀板時必須拭幹板底殘留的液體和手指痕跡 ，讀板時間控製在終止反應後的 30 分鍾內 ，以免影響準確性 。
注意事項 ：
1. 實驗操作中必須使用一次性吸頭 ，避免交叉汙染 。
2. 加樣 ：加樣時 ，要控製加樣速度 ，避免*孔與後一孔間的時間間隔過大 ，否則將會導致不同的預孵育時間 ，從而影響實驗的準確性以及重複性 。
3. 孵育 ：嚴格按照說明書上規定的孵育時間和溫度進行 。
4. 反應時間的控製 ：加入底物後請定時觀察反應孔的顏色變化 ，如果顏色較深 ，請提前加入終止液終止反應 。
5. 建議實驗前預測樣品含量 ，如樣品濃度過高 ，應對樣品進行稀釋 ，計算結果時乘以相應的稀釋倍數 。
6. 建議使用本試劑盒時先做預實驗（即先做標準曲線 ，試用幾個標本） ，如果對本試劑盒有任何疑問 ，可和所購經銷商溝通 ，如果因運輸過程導致試劑盒失效 ，可要求調換 ，但概不承擔產品本身以外的任何損失。
安全性
1． 避免人體直接接觸顯色劑A 、B和終止液 。一旦接觸到這些液體 ，請盡快用水衝洗 。
2． 實驗中不要進食、抽煙或使用化妝品 。
3． 不要用嘴吸取試劑盒裏的任何成份 。
保存條件及有效期 ：
1.試劑盒保存 ：2-8℃
2.有效期 ：6個
原理:
采用雙抗體夾心法測定人雄激素結合蛋白（ABP）水平 。用純化的人雄激素結合蛋白（ABP）抗體包被微孔板 ，製成固相載體 ，實驗時依次在微孔板中加入樣本及標準品 ，並加入 HRP 標記的 ABP 抗體 ，形成抗體-抗原-酶標抗體複合物 ，反複洗滌後加底物 TMB 顯色 。TMB 在過氧化物酶的催化下轉化為藍色 ，再用硫酸終止反應 ，轉變成黃色 。顏色的深淺和樣品中的 ABP含量呈正相關 。采用酶標儀在 450nm 波長測定吸光度（OD 值） ，根據標準曲線 ，計算測試樣品中 ABP 濃度 。