老哥俱乐部

细胞简介：

舌表皮细胞经常轻度教化脱落
，与唾液和食物碎屑混合而形成一层白色薄苔。表皮细胞的主要作用是保护，同时还兼有其他功能，如分泌角质层等
，具有很强的角质化特征
。

细胞特性：

1）组织来源于实验动物的正常舌组织。

2)细胞鉴定：广谱角蛋白(PCK)荧光染色为阳性
。

3)经鉴定细胞纯度高于90%
。

4)不含有 HIV-1、 HBV
、HCV
、支原体、、酵母和。

5)细胞生长方式：铺路石状细胞，不规则细胞，贴壁培养。

推荐培养基

：

老哥俱乐部推荐使用 delf 原代 角质形成 细胞 培养体系 作为体外培养的培养基
。

实验报告：

一
、分离与培养：

1、无菌条件下

，取出1-3d 龄SD大鼠心房组织，然后用PBS将此组织块清洗2次，将组织剪成1mm3左右大小；

2、往组织块中加入4 mL酶消化液（0.1% 和0.1% I型胶原酶），混悬10s
，置37℃条件下消化10min，之后用滴管吹打制成单细胞悬液
，自然沉淀并收集上清
，用含10% FBS培养基终止消化后4℃放置；

3、剩下的组织再加入3～4mL酶消化液
，混悬10s

，置37℃消化10 min后，按上述方法收集上清并终止消化后4℃放置，重复此步骤2-3次

，直至组织被消化
；

4
、用200目不锈钢筛网过滤细胞消化液，1200r/min 离心10min
，弃去上清
，沉淀细胞用含有10％ FBS DMEM/F12培养基混悬

，接种于25cm2培养瓶
，放置于37℃ ，5％CO2 培养箱中培养；

5
、差速贴壁1h后，吸出培养基，按实验需要接种于6孔板中继续培养；二、免疫荧光鉴定：

1、待心房肌细胞生长至80%融合时，弃去培养基，用温育的PBS冲洗细胞2次，每次10min，然后用4%多聚甲醛在室温条件下固定细胞15min；

2、PBS冲洗细胞2次，每次10min
，然后在4℃条件下，用0.1％Triton X-100透膜15min；

3

、PBS冲洗细胞2次
，每次10min，然后在室温条件下，用4% BSA封闭细胞30min；

4、按1: 100的比例稀释α-actin一抗，然后将其放在4℃冰箱中孵育细胞过夜
；

5
、PBS冲洗细胞3次，每次10min

，按1：150的比例稀释抗α-actin的二抗

， 37℃条件下放置1h；

6、用PBS冲洗3次，每次10min，在倒置荧光显微镜下观察图像并拍照。

注意事项：

1. 收到细胞后首先观察细胞瓶是否完好
，培养液是否有漏液、浑浊等现象，若有上述现象发生请及时和老哥俱乐部联系。

2. 仔细阅读细胞说明书
，了解细胞相关信息，如细胞形态
、所用培养基
、血清比例、所需细胞因子等
，确保细胞培养条件一致，若由于培养条件不一致而导致细胞出现问题
，责任由客户自行承担。

3. 用75%酒精擦拭细胞瓶表面，显微镜下观察细胞状态。因运输问题，部分细胞由于温度变化及剧烈碰亡破碎形成碎片，是正常现象。观察好细胞状态后
，75%酒精消毒瓶壁将T25瓶置于37℃培养箱放置4-6h
。

4. 贴壁细胞可以消化
，悬浮细胞直接混匀收集细胞，900 rpm-1000 rpm离心3 min
，弃上清
。加5 mL PBS重悬细胞
，再900 rpm-1000 rpm离心3 min
，，用新鲜的*培养基重悬细胞
，并接种到新的培养瓶或培养皿中，置于培养箱中进行培养。

5. 请客户用相同条件的培养基用于细胞培养
。

6. 建议客户收到细胞后前3天各拍几张细胞照片，记录细胞状态
，便于和我司技术部沟通交流
。由于运输的原因，个别敏感细胞会出现不稳定的情况，请及时和老哥俱乐部联系，告知细胞的具体情况
，以便老哥俱乐部的技术人员跟踪回访直至问题解决。

7. 该细胞仅供科研使用。

8. 备注
：运输用的培养基(灌液培养基)不能再用来培养细胞，请换用按照说明书细胞培养条件新配制的*培养基来培养细胞

。收到细胞后次传代建议1：2传代 
。

9.注意： 1:2传代就是1个T25瓶传2个T25瓶或者2个6cm皿。不是1个T25瓶传2个10cm皿
。

公司正在出售的产品：

MouseHepatitisCvirusantibodyIgGELISAKit

鱼组胺(HIS)elisa分析检测试剂盒

HIS ELISA Kit

人雌硫酸转移酶(SULT1E1)elisa分析检测试剂盒

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前列腺雄抑制信号蛋白1抗体

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蛋白酶调解因子6抗体  Anti-PSMD6

原钙粘蛋白11抗体  Anti-PCDHA11

线粒体辅酶还原酶核心蛋白2抗体  Anti-UQCRC2

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磷酸化信号转导和转录激活因子3抗体  Anti-phospho-STAT3 (Tyr705)

PE-Cy3标记的兔抗人IgM

Rabbit Anti-Human IgM / PE-Cy3

小鼠舌表皮细胞发育相关蛋白ERCC6L/乙醇致畸因子抗体