老哥俱乐部

细胞简介
：

脾是重要的器官，有造血、滤血、衰老血细胞及参与反应等功能
。也是细胞迁移和接受抗原刺激后发生应到
、产生效应分子的重要场所。脾基质细胞是脾脏中结缔组织细胞，起到为脾脏中实质细胞提供支持和营养的作用
。

细胞特性：

1）组织来源于实验动物的正常脾脏组织。

2)细胞鉴定：波形蛋白（Vimentin）荧光染色为阳性。

3)经鉴定细胞纯度高于90%
。

4)不含有 HIV-1、 HBV、HCV、支原体、、酵母和。

5)细胞生长方式：长梭形细胞，不规则细胞
，贴壁培养。

推荐培养基
：

老哥俱乐部推荐使用 DELF原代基质细胞培养体系 作为该细胞的培养基。

实验报告
：

一
、分离与培养：

1、无菌条件下，取出1-3d 龄SD大鼠心房组织，然后用PBS将此组织块清洗2次

，将组织剪成1mm3左右大小；

2
、往组织块中加入4 mL酶消化液（0.1% 和0.1% I型胶原酶），混悬10s
，置37℃条件下消化10min
，之后用滴管吹打制成单细胞悬液
，自然沉淀并收集上清，用含10% FBS培养基终止消化后4℃放置
；

3
、剩下的组织再加入3～4mL酶消化液，混悬10s，置37℃消化10 min后，按上述方法收集上清并终止消化后4℃放置，重复此步骤2-3次
，直至组织被消化；

4、用200目不锈钢筛网过滤细胞消化液，1200r/min 离心10min
，弃去上清
，沉淀细胞用含有10％ FBS DMEM/F12培养基混悬
，接种于25cm2培养瓶，放置于37℃ ，5％CO2 培养箱中培养
；

5、差速贴壁1h后，吸出培养基，按实验需要接种于6孔板中继续培养
；二
、免疫荧光鉴定：

1

、待心房肌细胞生长至80%融合时

，弃去培养基
，用温育的PBS冲洗细胞2次，每次10min，然后用4%多聚甲醛在室温条件下固定细胞15min
；

2、PBS冲洗细胞2次
，每次10min，然后在4℃条件下，用0.1％Triton X-100透膜15min；

3、PBS冲洗细胞2次，每次10min
，然后在室温条件下，用4% BSA封闭细胞30min；

4、按1: 100的比例稀释α-actin一抗
，然后将其放在4℃冰箱中孵育细胞过夜；

5
、PBS冲洗细胞3次，每次10min，按1：150的比例稀释抗α-actin的二抗， 37℃条件下放置1h；

6、用PBS冲洗3次

，每次10min，在倒置荧光显微镜下观察图像并拍照。

公司正在出售的产品：

小鼠蛋白Z(PROZ)elisa检测试剂盒

苏含量测试盒

大麦β-葡聚糖含量酶连续反应比色法定量检测试剂盒

猪低氧诱导因子1α(HIF-1α)elisa检测试剂盒

大鼠胸肾表达趋化因子(BRAK)elisa检测试剂盒

鸽子胃泌素(Gastrin)elisa检测试剂盒

人体FACTOR V RFLP基因分析试剂盒

小鼠成纤维细胞生长因子13(FGF13)elisa检测试剂盒

大鼠CD30配体(CD30L)elisa检测试剂盒

EIF2D蛋白抗体 EIF2D

FAM131A蛋白抗体 FAM131A

磷酸化丝/苏蛋白激酶MARK4抗体 phospho-MARK4 (Ser423)

磷酸化血小板源性生长因子受体α Phospho-PDGFRA (Tyr762)

垂体瘤转化蛋白2抗体 Securin 2

单羧酸转运蛋白-1抗体 MCT1

锌指蛋白297抗体 ZBTB22

锌指蛋白691抗体 ZNF691

PerCP-Cy5.5标记人CD127 (IL7R)单克隆抗体 human CD127 (IL7R)/PerCP-Cy5.5

PE标记小鼠CD102单克隆抗体 mouse CD102/PE

生长释放抗体 GHRH

双皮质素抗体 DCX/Doublecortin

环指蛋白113A抗体 RNF113A

肌醇加氧酶抗体 MIOX

自然杀伤细胞凝集素样受体3（Ly 49c）抗体 Klra3

10号染色体开放阅读框47抗体 C10orf47

大鼠巨噬细胞来源的趋化因子(MDC/CCL22)elisa检测试剂盒

2型猪链球菌溶血素抗体  Anti-SLY

PE-CY5标记的驴抗羊IgG H&L

Donkey Anti-Goat IgG H&L / PE-Cy5

小鼠脾基质细胞FRYL蛋白抗体

注意事项
：

1. 收到细胞后首先观察细胞瓶是否完好，培养液是否有漏液
、浑浊等现象
，若有上述现象发生请及时和老哥俱乐部联系。

2. 仔细阅读细胞说明书，了解细胞相关信息，如细胞形态、所用培养基、血清比例、所需细胞因子等，确保细胞培养条件一致
，若由于培养条件不一致而导致细胞出现问题，责任由客户自行承担。

3. 用75%酒精擦拭细胞瓶表面，显微镜下观察细胞状态。因运输问题，部分细胞由于温度变化及剧烈碰亡破碎形成碎片，是正常现象
。观察好细胞状态后
，75%酒精消毒瓶壁将T25瓶置于37℃培养箱放置4-6h。

4. 贴壁细胞可以消化，悬浮细胞直接混匀收集细胞，900 rpm-1000 rpm离心3 min，弃上清。加5 mL PBS重悬细胞，再900 rpm-1000 rpm离心3 min，，用新鲜的*培养基重悬细胞，并接种到新的培养瓶或培养皿中
，置于培养箱中进行培养
。

5. 请客户用相同条件的培养基用于细胞培养

。

6. 建议客户收到细胞后前3天各拍几张细胞照片，记录细胞状态，便于和我司技术部沟通交流。由于运输的原因
，个别敏感细胞会出现不稳定的情况，请及时和老哥俱乐部联系，告知细胞的具体情况，以便老哥俱乐部的技术人员跟踪回访直至问题解决。

7. 该细胞仅供科研使用。

8. 备注：运输用的培养基(灌液培养基)不能再用来培养细胞，请换用按照说明书细胞培养条件新配制的*培养基来培养细胞

。收到细胞后次传代建议1：2传代 。

9.注意： 1:2传代就是1个T25瓶传2个T25瓶或者2个6cm皿。不是1个T25瓶传2个10cm皿。