老哥俱乐部

细胞简介：

脾是重要的器官，有造血、滤血、衰老血细胞及参与反应等功能
。也是细胞迁移和接受抗原刺激后发生应到、产生效应分子的重要场所。

内皮祖细胞具有游走特性

，能进一步增殖分化的幼稚内皮细胞，缺乏成熟内皮细胞的特征性表型
，不能形成管腔样结构
。其功能主要为参与了出生后缺血组织的血管发生和血管损伤后的修复。

细胞特性：

1）组织来源于实验动物小鼠的正常脾脏组织。

2)细胞鉴定
：CD31或CD34荧光染色为阳性。

3)经鉴定细胞纯度高于90%

。

4)不含有 HIV-1、 HBV
、HCV
、支原体、
、酵母和
。

5)细胞生长方式：不规则细胞，贴壁培养
。

推荐培养基：

老哥俱乐部推荐使用 DELF原代 内皮祖 细胞培养体系 作为该细胞的培养基。

实验报告：

一、分离与培养：

1

、无菌条件下

，取出1-3d 龄SD大鼠心房组织
，然后用PBS将此组织块清洗2次，将组织剪成1mm3左右大小
；

2、往组织块中加入4 mL酶消化液（0.1% 和0.1% I型胶原酶），混悬10s
，置37℃条件下消化10min，之后用滴管吹打制成单细胞悬液，自然沉淀并收集上清
，用含10% FBS培养基终止消化后4℃放置；

3、剩下的组织再加入3～4mL酶消化液，混悬10s
，置37℃消化10 min后，按上述方法收集上清并终止消化后4℃放置，重复此步骤2-3次，直至组织被消化；

4、用200目不锈钢筛网过滤细胞消化液
，1200r/min 离心10min
，弃去上清，沉淀细胞用含有10％ FBS DMEM/F12培养基混悬，接种于25cm2培养瓶，放置于37℃ 
，5％CO2 培养箱中培养；

5
、差速贴壁1h后
，吸出培养基


，按实验需要接种于6孔板中继续培养；二、免疫荧光鉴定：

1
、待心房肌细胞生长至80%融合时，弃去培养基，用温育的PBS冲洗细胞2次，每次10min
，然后用4%多聚甲醛在室温条件下固定细胞15min
；

2
、PBS冲洗细胞2次

，每次10min，然后在4℃条件下，用0.1％Triton X-100透膜15min；

3、PBS冲洗细胞2次，每次10min，然后在室温条件下

，用4% BSA封闭细胞30min；

4、按1: 100的比例稀释α-actin一抗，然后将其放在4℃冰箱中孵育细胞过夜；

5、PBS冲洗细胞3次，每次10min，按1：150的比例稀释抗α-actin的二抗， 37℃条件下放置1h

；

6

、用PBS冲洗3次
，每次10min
，在倒置荧光显微镜下观察图像并拍照。

注意事项
：

1. 收到细胞后首先观察细胞瓶是否完好，培养液是否有漏液、浑浊等现象，若有上述现象发生请及时和老哥俱乐部联系。

2. 仔细阅读细胞说明书
，了解细胞相关信息，如细胞形态
、所用培养基、血清比例、所需细胞因子等
，确保细胞培养条件一致
，若由于培养条件不一致而导致细胞出现问题
，责任由客户自行承担

。

3. 用75%酒精擦拭细胞瓶表面
，显微镜下观察细胞状态
。因运输问题
，部分细胞由于温度变化及剧烈碰亡破碎形成碎片
，是正常现象。观察好细胞状态后
，75%酒精消毒瓶壁将T25瓶置于37℃培养箱放置4-6h。

4. 贴壁细胞可以消化，悬浮细胞直接混匀收集细胞，900 rpm-1000 rpm离心3 min，弃上清
。加5 mL PBS重悬细胞，再900 rpm-1000 rpm离心3 min
，
，用新鲜的*培养基重悬细胞，并接种到新的培养瓶或培养皿中，置于培养箱中进行培养

。

5. 请客户用相同条件的培养基用于细胞培养
。

6. 建议客户收到细胞后前3天各拍几张细胞照片，记录细胞状态

，便于和我司技术部沟通交流。由于运输的原因
，个别敏感细胞会出现不稳定的情况，请及时和老哥俱乐部联系，告知细胞的具体情况

，以便老哥俱乐部的技术人员跟踪回访直至问题解决。

7. 该细胞仅供科研使用。

8. 备注：运输用的培养基(灌液培养基)不能再用来培养细胞，请换用按照说明书细胞培养条件新配制的*培养基来培养细胞。收到细胞后次传代建议1
：2传代 
。

9.注意： 1:2传代就是1个T25瓶传2个T25瓶或者2个6cm皿
。不是1个T25瓶传2个10cm皿

。

公司正在出售的产品
：

大鼠葡萄糖激酶(GK)elisa检测试剂盒

大鼠白介素5（IL－5）elisa检测试剂盒

小鼠Ⅷ(F8)elisa检测试剂盒

人CD19分子(CD19)elisa分析检测试剂盒

细胞基质金属（MMP-2）琥珀酰明胶法比色定量检测试剂盒

大鼠型纤溶酶原激活因子 uPA elisa检测试剂盒

人体血小板粗提分离试剂盒

土壤羟胺还原酶（HR）测试盒

通用型密执岁棍状杆菌棋盘亚种Clavibacter michiganensis subsp. Tessellarius


；CMT）基因检测试剂盒

锌指蛋白537抗体 ZNF537

锌指蛋白835抗体 ZNF835

层粘连蛋白B2γ1抗体 Laminin B2 gamma 1

核糖基转移酶1单克隆抗体 HPRT1

DPM1蛋白抗体 DPM1

ELAVL1抗体 ELAVL1

磷酸化激酶C-SRC抗体 phospho-CSK (Ser364)

磷酸化丝裂原活化蛋白激酶激酶1/2重组兔单克隆抗体 Phospho-MEK1/2 (Ser218 + Ser222)

组蛋白H3K9甲基转移酶4抗体 SETDB1/KMT1E

12号染色体开放阅读框24抗体 C12ORF24

黑色素瘤蛋白多糖4抗体 NG2

环指蛋白156抗体 RNF156

PDLIM2蛋白抗体 PDLIM2

PerCP-Cy5.5标记人HLA-DR单克隆抗体 human HLA-DR/PerCP-Cy5.5

神经细胞特异性转录因子LDB1抗体 LDB1

双甲基精水解酶2抗体 DDAH2

冰冻切片制片预处理脱水液

鞘氨醇激酶2抗体  Anti-SPHK2

PE标记的兔抗人IgM

Rabbit Anti-Human IgM / PE

小鼠脾源性内皮祖细胞DNA切除修复蛋白1抗体