細胞簡介 ：

肌腱細胞是肌腱組織的基本功能單位 ，主要合成和分泌膠原蛋白 、彈性蛋白和糖蛋白基質 ，維持肌腱組織的新陳代謝 。

肌腱損傷後的方式包括內源性和外源性 ，而理想的方式是控製外源性 ，促進內源性 。內源性的機製是肌腱細胞通過細胞自身的增殖從而促進肌腱 ，但目前肌腱細胞在體外經過多次傳代培養後會喪失分裂增殖能力 。

目前已知多種因素影響肌腱過程，其中與肌腱關係密切的有著重要調控作用的細胞因子主要有 ：堿性成纖維生長因子 ，轉化生長因子 β ，骨形態發生蛋白-12 ，血管內皮生長因子，胰島素樣生長因子-1 ，血小板源性生長因子等 。

細胞特性 ：

1） 組織來源於實驗動物的肌腱組織 。

2) 細胞鑒定 ：Ⅰ型膠原熒光染色為陽性 。

3) 經鑒定細胞純度高於90% 。

4) 不含有 HIV-1 、 HBV 、HCV 、支原體 、 、酵母和 。

5) 細胞生長方式 ：梭形細胞 ，不規則細胞 ，貼壁培養 。

推薦培養基 ：

老哥俱樂部推薦使用 Delf 原代肌腱 細胞 培養體係 作為體外培養的培養基 。

實驗報告 ：

一 、分離與培養 ：

1 、無菌條件下 ，取出1-3d 齡SD大鼠心房組織 ，然後用PBS將此組織塊清洗2次 ，將組織剪成1mm3左右大小 ；

2 、往組織塊中加入4 mL酶消化液（0.1% 和0.1% I型膠原酶） ，混懸10s ，置37℃條件下消化10min ，之後用滴管吹打製成單細胞懸液 ，自然沉澱並收集上清 ，用含10% FBS培養基終止消化後4℃放置 ；

3 、剩下的組織再加入3～4mL酶消化液 ，混懸10s ，置37℃消化10 min後 ，按上述方法收集上清並終止消化後4℃放置 ，重複此步驟2-3次 ，直至組織被消化 ；

4 、用200目不鏽鋼篩網過濾細胞消化液 ，1200r/min 離心10min ，棄去上清 ，沉澱細胞用含有10％ FBS DMEM/F12培養基混懸 ，接種於25cm2培養瓶 ，放置於37℃  ，5％CO2 培養箱中培養 ；

5 、差速貼壁1h後 ，吸出培養基 ，按實驗需要接種於6孔板中繼續培養 ；二 、免疫熒光鑒定 ：

1 、待心房肌細胞生長至80%融合時 ，棄去培養基 ，用溫育的PBS衝洗細胞2次 ，每次10min ，然後用4%多聚甲醛在室溫條件下固定細胞15min ；

2 、PBS衝洗細胞2次 ，每次10min ，然後在4℃條件下 ，用0.1％Triton X-100透膜15min ；

3 、PBS衝洗細胞2次 ，每次10min ，然後在室溫條件下 ，用4% BSA封閉細胞30min；

4 、按1: 100的比例稀釋α-actin一抗 ，然後將其放在4℃冰箱中孵育細胞過夜 ；

5 、PBS衝洗細胞3次 ，每次10min ，按1 ：150的比例稀釋抗α-actin的二抗 ， 37℃條件下放置1h ；

6 、用PBS衝洗3次 ，每次10min ，在倒置熒光顯微鏡下觀察圖像並拍照 。

注意事項 ：

1. 收到細胞後首先觀察細胞瓶是否完好 ，培養液是否有漏液 、渾濁等現象 ，若有上述現象發生請及時和老哥俱樂部聯係 。

2. 仔細閱讀細胞說明書 ，了解細胞相關信息 ，如細胞形態 、所用培養基 、血清比例 、所需細胞因子等 ，確保細胞培養條件一致 ，若由於培養條件不一致而導致細胞出現問題 ，責任由客戶自行承擔 。

3. 用75%酒精擦拭細胞瓶表麵 ，顯微鏡下觀察細胞狀態 。因運輸問題 ，部分細胞由於溫度變化及劇烈碰亡破碎形成碎片 ，是正常現象 。觀察好細胞狀態後 ，75%酒精消毒瓶壁將T25瓶置於37℃培養箱放置4-6h 。

4. 貼壁細胞可以消化 ，懸浮細胞直接混勻收集細胞 ，900 rpm-1000 rpm離心3 min ，棄上清 。加5 mL PBS重懸細胞 ，再900 rpm-1000 rpm離心3 min ， ，用新鮮的*培養基重懸細胞 ，並接種到新的培養瓶或培養皿中 ，置於培養箱中進行培養 。

5. 請客戶用相同條件的培養基用於細胞培養 。

6. 建議客戶收到細胞後前3天各拍幾張細胞照片 ，記錄細胞狀態，便於和我司技術部溝通交流 。由於運輸的原因 ，個別敏感細胞會出現不穩定的情況 ，請及時和老哥俱樂部聯係 ，告知細胞的具體情況，以便老哥俱樂部的技術人員跟蹤回訪直至問題解決 。

7. 該細胞僅供科研使用 。

8. 備注 ：運輸用的培養基(灌液培養基)不能再用來培養細胞 ，請換用按照說明書細胞培養條件新配製的*培養基來培養細胞 。收到細胞後次傳代建議1 ：2傳代  。

9.注意 ： 1:2傳代就是1個T25瓶傳2個T25瓶或者2個6cm皿 。不是1個T25瓶傳2個10cm皿 。

公司正在出售的產品 ：

大鼠B細胞κ輕肽基因增強子核因子抑製因子α(NFKBIA)檢測試劑盒  ，英文名 ： NFKBIA ELISA Kit

Mouse glamic acid decarboxylase aoaibody (GAD-Ab) ELISA Kit 小鼠穀脫羧酶自身抗體(GAD-Ab)檢測試劑盒

MouseNeuroglobin,NGBELISAKit 小鼠腦紅蛋白(NGB)檢測試劑盒 96T/48T 進口分裝

CLIAKitforHumaissuefactor,IFELISAKit人組織因子

通用型血液凝集分子纖維蛋白檢測法(Fibrometer)分析試劑盒50次

ELISAKitLDH大鼠乳酸脫氫酶

CD28重組小鼠 CD28 蛋白 Protein

ADH/AVP peptide 抗利尿激素/血管升壓素抗原(和肽素 1mgADH/AVP peptide 抗利尿激素/血管升壓素抗原(和肽素)

ENTPD2重組人 NTPDase 2 / ENTPD2 蛋白 (aa 29-460, His 標簽) Protein

FCGR2A Protein Human 重組人 CD32a / FCGR2A 蛋白 (167 His, His & AVI 標簽), Biotinylated

TNFSF9 Protein Rat 重組大鼠 4-1BBL / CD137L / TNFSF9 蛋白 (Fc 標簽)

ADH/AVP peptide 抗利尿激素/血管升壓素抗原(和肽素 1mgADH/AVP peptide 抗利尿激素/血管升壓素抗原(和肽素)

FCGR2A Protein Human 重組人 CD32a / FCGR2A 蛋白 (167 His, His & AVI 標簽), Biotinylated

CD28重組小鼠 CD28 蛋白 Protein

TNFSF9 Protein Rat 重組大鼠 4-1BBL / CD137L / TNFSF9 蛋白 (Fc 標簽)

ENTPD2重組人 NTPDase 2 / ENTPD2 蛋白 (aa 29-460, His 標簽) Protein

小鼠肝脂酶(HL)ELISA 試劑盒 96T/48T

Human eosinophil chemotactic factor (ECF) ELISA Kit 人鼠嗜酸粒細胞趨化因子(ECF)檢測試劑盒

Humanferritin,FEELISAKit 人鐵蛋白(FE)檢測試劑盒 96T/48T 進口分裝

HumanAi-tissueanGSlaminaseIgA,tTG-IgA檢測試劑盒人抗組織轉酶抗體IgA(tTG-IgA)檢測試劑盒規格 ：96T/48T

植物氧化型(GSSG)濃度高效液相色譜定量檢測試劑盒50次

HumanansformingGrowthfactorβ1 ，TGF-β1ELISAKit人轉化生長因子β1(TGF-β1)檢測試劑盒規格 ：96T/48T

大鼠肌腱細胞小鼠6--前列腺素F1a(mouse 6-k-PGF1a)   作用 ：   ELISA   規格 ：      進口分裝

小鼠前列腺素E2(mouse PGE2)   作用 ：   ELISA   規格 ：      進口分裝

小鼠0脂酶A2(mouse sPLA2)   作用 ：   ELISA   規格 ：      進口分裝

小鼠Pleioophin（mouse Pleioophin）   作用 ：   ELISA   規格 ：      進口分裝