老哥俱乐部

细胞简介：

甲状腺是人体大的腺。棕红色
，分左右两叶，中间相连，呈 H形。甲状腺滤泡是甲状腺的基本结构单位
。此外，甲状腺中以及外围还有部分结缔组织，这些结缔组织是由成纤维细胞组成，对滤泡起到保护作用
。

细胞特性：

1）组织来源于实验动物的正常甲状腺组织。

2)细胞鉴定
：纤维连接蛋白（Fibronectin）或波形蛋白（Vimentin）荧光染色为阳性。

3)经鉴定细胞纯度高于90%。

4)不含有 HIV-1

、 HBV

、HCV

、支原体
、
、酵母和
。

5)细胞生长方式
：长梭形细胞
，不规则细胞
，贴壁培养。

推荐培养基
：

老哥俱乐部推荐使用 Delf 原代成纤维 细胞 培养体系 作为体外培养的培养基

。

实验报告：

一
、分离与培养
：

1、无菌条件下
，取出1-3d 龄SD大鼠心房组织
，然后用PBS将此组织块清洗2次，将组织剪成1mm3左右大小

；

2
、往组织块中加入4 mL酶消化液（0.1% 和0.1% I型胶原酶），混悬10s，置37℃条件下消化10min
，之后用滴管吹打制成单细胞悬液，自然沉淀并收集上清，用含10% FBS培养基终止消化后4℃放置
；

3

、剩下的组织再加入3～4mL酶消化液
，混悬10s
，置37℃消化10 min后，按上述方法收集上清并终止消化后4℃放置，重复此步骤2-3次，直至组织被消化；

4
、用200目不锈钢筛网过滤细胞消化液，1200r/min 离心10min，弃去上清，沉淀细胞用含有10％ FBS DMEM/F12培养基混悬，接种于25cm2培养瓶，放置于37℃ ，5％CO2 培养箱中培养；

5、差速贴壁1h后，吸出培养基，按实验需要接种于6孔板中继续培养；二、免疫荧光鉴定：

1、待心房肌细胞生长至80%融合时，弃去培养基，用温育的PBS冲洗细胞2次，每次10min，然后用4%多聚甲醛在室温条件下固定细胞15min；

2
、PBS冲洗细胞2次
，每次10min
，然后在4℃条件下，用0.1％Triton X-100透膜15min

；

3
、PBS冲洗细胞2次，每次10min
，然后在室温条件下，用4% BSA封闭细胞30min；

4、按1: 100的比例稀释α-actin一抗
，然后将其放在4℃冰箱中孵育细胞过夜

；

5、PBS冲洗细胞3次
，每次10min，按1：150的比例稀释抗α-actin的二抗， 37℃条件下放置1h
；

6
、用PBS冲洗3次，每次10min，在倒置荧光显微镜下观察图像并拍照
。

公司正在出售的产品：

植物硝态氮测试盒

人N(ε)羧乙基赖(CEL)elisa分析检测试剂盒

血液3－羟－3－甲戊二酰（HMG－COA）还原酶活性间接比色法

小鼠可溶性血小板内皮细胞粘附分子1(sPECAM-1/sCD31)elisa检测试剂盒

大鼠肺表面活性物质相关蛋白A(SP-A)elisa分析检测试剂盒

大鼠网膜素(omentin)elisa检测试剂盒

单宁含量试剂盒

人谷脱羧酶65(GAD65)elisa分析检测试剂盒

pYES＋目的基因

AF680标记的衰变加速因子CD55抗体 CD55, Alexa Fluor 680 conjugated

AF750标记的组织相容性复合体蛋白1抗体 HLA-C, Alexa Fluor 750 conjugated

紧密连接蛋白7抗体 CLDN7

卷曲螺旋结构域蛋白138抗体 CCDC138

S-tag（标签）单克隆抗体 S-tag

TRIM50C蛋白抗体 TRIM50C

突触相关蛋白25重组鼠单克隆抗体 SNAP25

微粒体S转移酶1抗体 MGST1

G蛋白偶联受体结合蛋白O亚基A2抗体 GNAO1

HS6ST2蛋白抗体 HS6ST2

2重链抗体 Factor XIIa heavy chain

前列腺癌激活蛋白抗体 PDZK3

分泌载体膜蛋白4抗体 SCAMP4

富含脯的激酶2抗体 PYK2

乙型肝炎病毒X蛋白HBX抗体 Hepatitis B virus pre-X protein

载脂蛋白A5抗体 Apolipoprotein A V

大鼠CD30分子(CD30)elisa检测试剂盒

大鼠复制蛋白A 70kDaDNA结合亚基(RPA1)elisa分析检测试剂盒

RPA1 ELISA kit

豚鼠白介素1β(IL1B)elisa分析检测试剂盒

大鼠甲状腺成纤维细胞IL1BELISAkit

注意事项
：

1. 收到细胞后首先观察细胞瓶是否完好，培养液是否有漏液

、浑浊等现象，若有上述现象发生请及时和老哥俱乐部联系
。

2. 仔细阅读细胞说明书，了解细胞相关信息，如细胞形态、所用培养基、血清比例、所需细胞因子等

，确保细胞培养条件一致，若由于培养条件不一致而导致细胞出现问题，责任由客户自行承担。

3. 用75%酒精擦拭细胞瓶表面

，显微镜下观察细胞状态
。因运输问题，部分细胞由于温度变化及剧烈碰亡破碎形成碎片
，是正常现象。观察好细胞状态后，75%酒精消毒瓶壁将T25瓶置于37℃培养箱放置4-6h
。

4. 贴壁细胞可以消化，悬浮细胞直接混匀收集细胞
，900 rpm-1000 rpm离心3 min，弃上清。加5 mL PBS重悬细胞
，再900 rpm-1000 rpm离心3 min，
，用新鲜的*培养基重悬细胞，并接种到新的培养瓶或培养皿中，置于培养箱中进行培养。

5. 请客户用相同条件的培养基用于细胞培养
。

6. 建议客户收到细胞后前3天各拍几张细胞照片
，记录细胞状态，便于和我司技术部沟通交流。由于运输的原因，个别敏感细胞会出现不稳定的情况，请及时和老哥俱乐部联系，告知细胞的具体情况
，以便老哥俱乐部的技术人员跟踪回访直至问题解决
。

7. 该细胞仅供科研使用
。

8. 备注
：运输用的培养基(灌液培养基)不能再用来培养细胞，请换用按照说明书细胞培养条件新配制的*培养基来培养细胞。收到细胞后次传代建议1
：2传代 。

9.注意
： 1:2传代就是1个T25瓶传2个T25瓶或者2个6cm皿。不是1个T25瓶传2个10cm皿

。