老哥俱乐部

细胞简介：

结膜松弛症（ conjunctivochalasis
，CCh）是由于球结膜过度松弛和（或）下睑缘张力高，造成松弛球结膜堆积在眼球与下睑缘、内外眦部之间
，形成皱褶，引起眼表泪液分布异常，并伴有眼部不适如流泪、干涩
、异物感等症状的眼病
。有研究表明结膜松弛症中结膜成纤维细胞的改变，影响细胞外基质成分的平衡状态和稳定性
，可能是结膜松弛症发生的原因。

细胞特性
：

1）组织来源于实验动物的眼球。

2)细胞鉴定
：结蛋白（Desmin）或波形蛋白（Vimentin）荧光染色为阳性。

3)经鉴定细胞纯度高于90%。

4)不含有 HIV-1
、 HBV、HCV、支原体、
、酵母和。

5)细胞生长方式
：长梭形细胞
，不规则细胞，贴壁培养


。

推荐培养基
：

老哥俱乐部推荐使用 Delf原代 成纤维 细胞培养体系 作为体外培养的培养基
。

实验报告：

一、分离与培养：

1、无菌条件下
，取出1-3d 龄SD大鼠心房组织，然后用PBS将此组织块清洗2次，将组织剪成1mm3左右大小
；

2

、往组织块中加入4 mL酶消化液（0.1% 和0.1% I型胶原酶）
，混悬10s，置37℃条件下消化10min，之后用滴管吹打制成单细胞悬液

，自然沉淀并收集上清
，用含10% FBS培养基终止消化后4℃放置
；

3
、剩下的组织再加入3～4mL酶消化液
，混悬10s，置37℃消化10 min后
，按上述方法收集上清并终止消化后4℃放置，重复此步骤2-3次
，直至组织被消化；

4
、用200目不锈钢筛网过滤细胞消化液
，1200r/min 离心10min，弃去上清

，沉淀细胞用含有10％ FBS DMEM/F12培养基混悬，接种于25cm2培养瓶，放置于37℃ ，5％CO2 培养箱中培养
；

5、差速贴壁1h后，吸出培养基，按实验需要接种于6孔板中继续培养；二、免疫荧光鉴定
：

1
、待心房肌细胞生长至80%融合时，弃去培养基，用温育的PBS冲洗细胞2次，每次10min，然后用4%多聚甲醛在室温条件下固定细胞15min；

2、PBS冲洗细胞2次，每次10min，然后在4℃条件下
，用0.1％Triton X-100透膜15min；

3
、PBS冲洗细胞2次
，每次10min，然后在室温条件下，用4% BSA封闭细胞30min
；

4
、按1: 100的比例稀释α-actin一抗
，然后将其放在4℃冰箱中孵育细胞过夜
；

5、PBS冲洗细胞3次，每次10min，按1：150的比例稀释抗α-actin的二抗
， 37℃条件下放置1h
；

6

、用PBS冲洗3次，每次10min，在倒置荧光显微镜下观察图像并拍照。

注意事项
：

1. 收到细胞后首先观察细胞瓶是否完好
，培养液是否有漏液
、浑浊等现象
，若有上述现象发生请及时和老哥俱乐部联系。

2. 仔细阅读细胞说明书
，了解细胞相关信息
，如细胞形态
、所用培养基
、血清比例、所需细胞因子等，确保细胞培养条件一致，若由于培养条件不一致而导致细胞出现问题，责任由客户自行承担。

3. 用75%酒精擦拭细胞瓶表面
，显微镜下观察细胞状态

。因运输问题
，部分细胞由于温度变化及剧烈碰亡破碎形成碎片，是正常现象
。观察好细胞状态后，75%酒精消毒瓶壁将T25瓶置于37℃培养箱放置4-6h。

4. 贴壁细胞可以消化
，悬浮细胞直接混匀收集细胞
，900 rpm-1000 rpm离心3 min，弃上清。加5 mL PBS重悬细胞，再900 rpm-1000 rpm离心3 min，，用新鲜的*培养基重悬细胞
，并接种到新的培养瓶或培养皿中
，置于培养箱中进行培养

。

5. 请客户用相同条件的培养基用于细胞培养。

6. 建议客户收到细胞后前3天各拍几张细胞照片
，记录细胞状态，便于和我司技术部沟通交流。由于运输的原因
，个别敏感细胞会出现不稳定的情况，请及时和老哥俱乐部联系

，告知细胞的具体情况，以便老哥俱乐部的技术人员跟踪回访直至问题解决。

7. 该细胞仅供科研使用。

8. 备注
：运输用的培养基(灌液培养基)不能再用来培养细胞
，请换用按照说明书细胞培养条件新配制的*培养基来培养细胞
。收到细胞后次传代建议1：2传代 
。

9.注意： 1:2传代就是1个T25瓶传2个T25瓶或者2个6cm皿
。不是1个T25瓶传2个10cm皿。

公司正在出售的产品
：

C5aELISAKit

植物L-抗坏血酸过氧化物酶3,过氧化物酶病(APX3)elisa分析检测试剂盒

peroxisomal(APX3)ELISA kit

人促甲状腺素(TSH)elisa分析检测试剂盒

TSHELISAKit

小鼠X-射线修复交叉互补蛋白6(XRCC6)elisa检测试剂盒

蛋白稳定剂1ml

冰冻切片组织EGFR 蛋白表达荧光显微镜检测试剂盒

绵羊白介素1β(IL-1β)elisa分析检测试剂盒

KIAA1543蛋白抗体

KIAA1543

染色质解旋酶DNA结合蛋白抗体

CHD1L

小鼠3-O-(3-OMD)elisa检测试剂盒

5-ROX蛋白标记试剂盒

细胞茜素红（ALIZARIN RED S）钙染色试剂盒

鸡H5型病毒(H5N1)抗体(IgG)elisa检测试剂盒免费代测

ras癌基因蛋白1抗体

RSU1

头发角蛋白KRT33B抗体

KRT33B

磷酸化神经突触前膜胞内蛋白抗体  Anti-phospho-STXBP1(Ser515)

神经母细胞瘤蛋白PHOX2B抗体  Anti-PHOX2B

凋亡相关蛋白10抗体  Anti-PDCD10

神经细胞胞浆蛋白9.5抗体（蛋白基因产物9.5）  Anti-UCHL1/PGP9.5

小鼠抗牛IgG H&L

KIAA1841蛋白抗体

KIAA1841

染色质修饰蛋白1B抗体

大鼠结膜成纤维细胞CHMP1B