老哥俱乐部

细胞简介
：

结膜为一层薄而透明的粘膜组织，覆盖在眼睑后面和眼球前面
，分睑结膜、球结膜、穹窿部结膜。由结膜形成的囊状间隙分为结膜囊
。

细胞特性
：

1） 组织来源于实验动物的眼球。

2) 细胞鉴定
：结蛋白（Desmin）或波形蛋白（Vimentin）荧光染色为阳性。

。

3) 经鉴定细胞纯度高于90%。

4) 不含有 HIV-1

、 HBV
、HCV
、支原体、、酵母和。

5) 细胞生长方式
：长梭形细胞，不规则细胞，贴壁培养
。

推荐培养基
：

老哥俱乐部推荐使用 delf原代 成纤维 细胞培养体系 作为该细胞的培养试剂
。

实验报告
：

一、分离与培养：

1、无菌条件下，取出1-3d 龄SD大鼠心房组织，然后用PBS将此组织块清洗2次，将组织剪成1mm3左右大小；

2、往组织块中加入4 mL酶消化液（0.1% 和0.1% I型胶原酶），混悬10s
，置37℃条件下消化10min，之后用滴管吹打制成单细胞悬液，自然沉淀并收集上清，用含10% FBS培养基终止消化后4℃放置
；

3
、剩下的组织再加入3～4mL酶消化液，混悬10s
，置37℃消化10 min后，按上述方法收集上清并终止消化后4℃放置
，重复此步骤2-3次
，直至组织被消化
；

4
、用200目不锈钢筛网过滤细胞消化液，1200r/min 离心10min，弃去上清
，沉淀细胞用含有10％ FBS DMEM/F12培养基混悬，接种于25cm2培养瓶
，放置于37℃ ，5％CO2 培养箱中培养；

5、差速贴壁1h后，吸出培养基
，按实验需要接种于6孔板中继续培养；二、免疫荧光鉴定：

1、待心房肌细胞生长至80%融合时，弃去培养基，用温育的PBS冲洗细胞2次
，每次10min，然后用4%多聚甲醛在室温条件下固定细胞15min；

2
、PBS冲洗细胞2次，每次10min
，然后在4℃条件下
，用0.1％Triton X-100透膜15min
；

3

、PBS冲洗细胞2次，每次10min
，然后在室温条件下
，用4% BSA封闭细胞30min；

4、按1: 100的比例稀释α-actin一抗
，然后将其放在4℃冰箱中孵育细胞过夜；

5、PBS冲洗细胞3次，每次10min，按1
：150的比例稀释抗α-actin的二抗， 37℃条件下放置1h
；

6、用PBS冲洗3次，每次10min，在倒置荧光显微镜下观察图像并拍照。

公司正在出售的产品：

大鼠白介素28A(IL-28A)检测试剂盒 ，英文名
： IL-28A ELISA Kit

Mouse ierleukin 9 (IL-9) ELISA Kit 小鼠白介素9(IL-9)检测试剂盒

ELISA 小鼠IgA(mouse IgA)  进口分装

CLIAKitforILK-1(Humaniegrin-linkedkinase1)ELISAKit人整合素连接激酶1

通用型胱(cystine)含量高效液相色谱法定量检测试剂盒20次

ELISAKitOSM大鼠抑瘤素M

EPCAM重组食蟹猴 / 恒河猴 EpCAM / TROP-1 / TACSTD1 蛋白 (Fc 标签) Protein

IL-1 Beta(Interleukin-1 Beta 0.5mgIL-1 Beta(Interleukin-1 Beta) 白介素1β(白细胞介素-1β)(多肽抗原)

CSNK1A1重组人 CSNK1A1 / CKI-alpha / CK1 蛋白 (GST 标签) Protein

EPHA3 Protein Human 重组人 EphA3 蛋白

CD84 Protein Mouse 重组小鼠 CD84 蛋白

IL-1 Beta(Interleukin-1 Beta 0.5mgIL-1 Beta(Interleukin-1 Beta) 白介素1β(白细胞介素-1β)(多肽抗原)

EPHA3 Protein Human 重组人 EphA3 蛋白

EPCAM重组食蟹猴 / 恒河猴 EpCAM / TROP-1 / TACSTD1 蛋白 (Fc 标签) Protein

CD84 Protein Mouse 重组小鼠 CD84 蛋白

CSNK1A1重组人 CSNK1A1 / CKI-alpha / CK1 蛋白 (GST 标签) Protein

小鼠基质金属蛋白酶抑制因子4(TIMP-4)ELISA 试剂盒 96T/48T

Human epithelial neuophil activating peptide 78 (ENA-78/CXCL5) ELISA Kit 人上皮中性粒细胞活化肽78(ENA-78/CXCL5)检测试剂盒

HumanleukocyteaigenA,HLA-AELISAKit 人类白细胞抗原A(HLA-A)检测试剂盒 96T/48T 进口分装

Humanai-hepatitisAvirusIgGaibody,ai-HAV检测试剂盒人抗甲型肝病毒IgG抗体(ai-HAV)检测试剂盒规格
：96T/48T

植物0酸葡萄糖变位酶(phosphoglucomase;PGM)活性光谱法定量检测试剂盒20次

Humanvimein,VIMELISAKit人波形蛋白(VIM)检测试剂盒规格
：96T/48T

大鼠结膜囊成纤维细胞小鼠表皮生长因子(mouse EGF)   作用：   ELISA   规格
：      进口分装

小鼠表皮生长因子受体(mouse EGF R)   作用：   ELISA   规格：      进口分装

小鼠内皮素-1(mouse Endothelin-1)   作用
：   ELISA   规格
：      进口分装

小鼠噬酸性粒细胞趋化因子(mouse Eotaxin)   作用
：   ELISA   规格
：      进口分装

注意事项：

1. 收到细胞后首先观察细胞瓶是否完好
，培养液是否有漏液、浑浊等现象，若有上述现象发生请及时和老哥俱乐部联系。

2. 仔细阅读细胞说明书
，了解细胞相关信息，如细胞形态、所用培养基
、血清比例
、所需细胞因子等，确保细胞培养条件一致
，若由于培养条件不一致而导致细胞出现问题，责任由客户自行承担
。

3. 用75%酒精擦拭细胞瓶表面，显微镜下观察细胞状态
。因运输问题
，部分细胞由于温度变化及剧烈碰亡破碎形成碎片，是正常现象
。观察好细胞状态后，75%酒精消毒瓶壁将T25瓶置于37℃培养箱放置4-6h。

4. 贴壁细胞可以消化，悬浮细胞直接混匀收集细胞，900 rpm-1000 rpm离心3 min，弃上清。加5 mL PBS重悬细胞，再900 rpm-1000 rpm离心3 min，，用新鲜的*培养基重悬细胞
，并接种到新的培养瓶或培养皿中
，置于培养箱中进行培养。

5. 请客户用相同条件的培养基用于细胞培养
。

6. 建议客户收到细胞后前3天各拍几张细胞照片，记录细胞状态，便于和我司技术部沟通交流
。由于运输的原因
，个别敏感细胞会出现不稳定的情况，请及时和老哥俱乐部联系
，告知细胞的具体情况，以便老哥俱乐部的技术人员跟踪回访直至问题解决。

7. 该细胞仅供科研使用
。

8. 备注
：运输用的培养基(灌液培养基)不能再用来培养细胞，请换用按照说明书细胞培养条件新配制的*培养基来培养细胞。收到细胞后次传代建议1：2传代 
。

9.注意： 1:2传代就是1个T25瓶传2个T25瓶或者2个6cm皿。不是1个T25瓶传2个10cm皿
。