細胞簡介 ：

膀胱壁由三層組織組成 ，由內外為粘膜層、肌層和外膜 。其中 ，粘膜層為極薄的一層移行上皮組織 ，和輸尿管及尿道黏膜彼此連貫 。體外培養膀胱上皮細胞不僅為組織工程膀胱 ，尿道提供種植細胞的必要手段 ，也是研究移行上皮細胞腫瘤發生和的基礎與前提 。

細胞特性 ：

1）組織來源於實驗動物的正常膀胱組織 。

2)細胞鑒定 ：廣譜角蛋白(PCK)熒光染色為陽性 。

3)經鑒定細胞純度高於90% 。

4)不含有 HIV-1 、 HBV 、HCV 、支原體 、 、酵母和。

5)細胞生長方式 ：鋪路石狀細胞 ，不規則細胞 ，貼壁培養 。

推薦培養基 ：

老哥俱樂部推薦使用 Delf 原代上皮 細胞 培養體係 作為體外培養的培養基 。

實驗報告 ：

一 、分離與培養 ：

1 、無菌條件下 ，取出1-3d 齡SD大鼠心房組織 ，然後用PBS將此組織塊清洗2次 ，將組織剪成1mm3左右大小 ；

2 、往組織塊中加入4 mL酶消化液（0.1% 和0.1% I型膠原酶） ，混懸10s ，置37℃條件下消化10min ，之後用滴管吹打製成單細胞懸液 ，自然沉澱並收集上清 ，用含10% FBS培養基終止消化後4℃放置 ；

3 、剩下的組織再加入3～4mL酶消化液 ，混懸10s ，置37℃消化10 min後 ，按上述方法收集上清並終止消化後4℃放置 ，重複此步驟2-3次 ，直至組織被消化 ；

4 、用200目不鏽鋼篩網過濾細胞消化液 ，1200r/min 離心10min ，棄去上清 ，沉澱細胞用含有10％ FBS DMEM/F12培養基混懸 ，接種於25cm2培養瓶 ，放置於37℃  ，5％CO2 培養箱中培養；

5 、差速貼壁1h後 ，吸出培養基 ，按實驗需要接種於6孔板中繼續培養 ；二 、免疫熒光鑒定 ：

1 、待心房肌細胞生長至80%融合時 ，棄去培養基 ，用溫育的PBS衝洗細胞2次 ，每次10min ，然後用4%多聚甲醛在室溫條件下固定細胞15min ；

2 、PBS衝洗細胞2次 ，每次10min ，然後在4℃條件下 ，用0.1％Triton X-100透膜15min ；

3 、PBS衝洗細胞2次 ，每次10min ，然後在室溫條件下 ，用4% BSA封閉細胞30min ；

4 、按1: 100的比例稀釋α-actin一抗 ，然後將其放在4℃冰箱中孵育細胞過夜 ；

5 、PBS衝洗細胞3次 ，每次10min ，按1 ：150的比例稀釋抗α-actin的二抗 ， 37℃條件下放置1h ；

6 、用PBS衝洗3次 ，每次10min ，在倒置熒光顯微鏡下觀察圖像並拍照 。

公司正在出售的產品 ：

12-HETEELISAKit

GSK3β相互作用蛋白抗體

HSPC210/GSK3beta interaction protein

乳腺癌相關蛋白2抗體

BCAS2

非位素HRP－DAB顯色法DNA南方雜交試劑盒

多酚氧化酶(PPO）試劑盒

植物亮（leucine）含量比色法定量檢測試劑盒

小鼠半乳凝素3(GAL-3)elisa檢測試劑盒

轉化相關基因MED11抗體

MED11

源轉錄因子DLX5抗體

Dlx5

酶(因子II)輕鏈抗體  Anti-Thrombin light chain

梅克爾憩室綜合征相關蛋白5抗體  Anti-RPGRIP1L

核受體蛋白NR2E1抗體  Anti-NR2E1/Tailless

Wnt信號抑製因子1抗體  Anti-WIF1

骨骼肌慢肌肌鈣蛋白T抗體

TNNT1

線粒體核糖體蛋白L24抗體

MRPL24

胚胎幹細胞抑製蛋白Suz12抗體  Anti-SUZ12/CHET9

氧化低密度脂蛋白抗體  Anti-ox-LDL

磷酸化絲/蘇蛋白激酶Plk1抗體  Anti-Phospho-PLK1(Ser482+Ser486+Ser490)

血管生成素受體2抗體  Anti-TIE2/CD202b

Cy5.5標記大鼠IgG（型對照)

人類狀瘤病毒HPV116 gp2抗體

HPV116 gp2

三號染色體開放閱讀框抗體

大鼠膀胱上皮細胞APRG1

注意事項 ：

1. 收到細胞後首先觀察細胞瓶是否完好 ，培養液是否有漏液 、渾濁等現象 ，若有上述現象發生請及時和老哥俱樂部聯係 。

2. 仔細閱讀細胞說明書 ，了解細胞相關信息 ，如細胞形態 、所用培養基 、血清比例 、所需細胞因子等 ，確保細胞培養條件一致 ，若由於培養條件不一致而導致細胞出現問題 ，責任由客戶自行承擔 。

3. 用75%酒精擦拭細胞瓶表麵 ，顯微鏡下觀察細胞狀態 。因運輸問題 ，部分細胞由於溫度變化及劇烈碰亡破碎形成碎片 ，是正常現象 。觀察好細胞狀態後 ，75%酒精消毒瓶壁將T25瓶置於37℃培養箱放置4-6h 。

4. 貼壁細胞可以消化，懸浮細胞直接混勻收集細胞 ，900 rpm-1000 rpm離心3 min ，棄上清 。加5 mL PBS重懸細胞 ，再900 rpm-1000 rpm離心3 min ， ，用新鮮的*培養基重懸細胞 ，並接種到新的培養瓶或培養皿中 ，置於培養箱中進行培養 。

5. 請客戶用相同條件的培養基用於細胞培養 。

6. 建議客戶收到細胞後前3天各拍幾張細胞照片 ，記錄細胞狀態 ，便於和我司技術部溝通交流 。由於運輸的原因 ，個別敏感細胞會出現不穩定的情況 ，請及時和老哥俱樂部聯係 ，告知細胞的具體情況 ，以便老哥俱樂部的技術人員跟蹤回訪直至問題解決 。

7. 該細胞僅供科研使用 。

8. 備注 ：運輸用的培養基(灌液培養基)不能再用來培養細胞 ，請換用按照說明書細胞培養條件新配製的*培養基來培養細胞 。收到細胞後次傳代建議1 ：2傳代  。

9.注意 ： 1:2傳代就是1個T25瓶傳2個T25瓶或者2個6cm皿 。不是1個T25瓶傳2個10cm皿 。