老哥俱乐部

细胞简介：

乳腺导管位于胸部的皮下组织中，是的主要构成组织之一
，也是乳汁的排泄管道
。乳腺管的主要功能是乳汁的排泄和储存

每个乳腺叶都有一个输乳管
，输乳管会在近处形成膨大的输入管窦，末端变细并开口于。 乳腺被结缔组织分隔为 15-25个 叶，每个叶又分为若干小叶，每个小叶是一个复管泡状腺。

腺泡上皮为单层立方或柱状，导管包括小叶内导管
、上间导管和总导管
。小叶内导管多为单层柱状或立方上皮，小叶间导管为复层柱状上皮，总导管又称输乳管
，开口于，管壁为复层扁平上皮，下表皮相续。

细胞特性：

1）细胞来源于实验动物正常乳腺组织。

2)细胞鉴定
：细胞角蛋白（PCK）荧光染色为阳性
。

3)经鉴定细胞纯度高于90%
。

4)不含有 HIV-1
、 HBV、HCV、支原体、
、酵母和。

5)细胞生长方式
：上皮样
，多角形细胞，贴壁培养

。

推荐培养基：

老哥俱乐部推荐使用 Delf 原代上皮 细胞 培养体系 作为体外培养的培养基。

实验报告：

一、分离与培养
：

1、无菌条件下，取出1-3d 龄SD大鼠心房组织，然后用PBS将此组织块清洗2次
，将组织剪成1mm3左右大小；

2、往组织块中加入4 mL酶消化液（0.1% 和0.1% I型胶原酶）
，混悬10s，置37℃条件下消化10min，之后用滴管吹打制成单细胞悬液，自然沉淀并收集上清，用含10% FBS培养基终止消化后4℃放置
；

3、剩下的组织再加入3～4mL酶消化液，混悬10s

，置37℃消化10 min后，按上述方法收集上清并终止消化后4℃放置，重复此步骤2-3次，直至组织被消化；

4


、用200目不锈钢筛网过滤细胞消化液
，1200r/min 离心10min
，弃去上清
，沉淀细胞用含有10％ FBS DMEM/F12培养基混悬，接种于25cm2培养瓶
，放置于37℃ 
，5％CO2 培养箱中培养；

5、差速贴壁1h后
，吸出培养基，按实验需要接种于6孔板中继续培养
；二、免疫荧光鉴定：

1、待心房肌细胞生长至80%融合时

，弃去培养基
，用温育的PBS冲洗细胞2次，每次10min，然后用4%多聚甲醛在室温条件下固定细胞15min
；

2
、PBS冲洗细胞2次
，每次10min，然后在4℃条件下
，用0.1％Triton X-100透膜15min
；

3、PBS冲洗细胞2次

，每次10min
，然后在室温条件下，用4% BSA封闭细胞30min；

4、按1: 100的比例稀释α-actin一抗

，然后将其放在4℃冰箱中孵育细胞过夜；

5
、PBS冲洗细胞3次，每次10min
，按1：150的比例稀释抗α-actin的二抗

， 37℃条件下放置1h；

6、用PBS冲洗3次，每次10min，在倒置荧光显微镜下观察图像并拍照。

注意事项：

1. 收到细胞后首先观察细胞瓶是否完好
，培养液是否有漏液
、浑浊等现象，若有上述现象发生请及时和老哥俱乐部联系。

2. 仔细阅读细胞说明书，了解细胞相关信息，如细胞形态
、所用培养基、血清比例、所需细胞因子等，确保细胞培养条件一致，若由于培养条件不一致而导致细胞出现问题，责任由客户自行承担
。

3. 用75%酒精擦拭细胞瓶表面，显微镜下观察细胞状态。因运输问题，部分细胞由于温度变化及剧烈碰亡破碎形成碎片
，是正常现象
。观察好细胞状态后
，75%酒精消毒瓶壁将T25瓶置于37℃培养箱放置4-6h
。

4. 贴壁细胞可以消化
，悬浮细胞直接混匀收集细胞
，900 rpm-1000 rpm离心3 min，弃上清。加5 mL PBS重悬细胞，再900 rpm-1000 rpm离心3 min，
，用新鲜的*培养基重悬细胞，并接种到新的培养瓶或培养皿中，置于培养箱中进行培养。

5. 请客户用相同条件的培养基用于细胞培养。

6. 建议客户收到细胞后前3天各拍几张细胞照片

，记录细胞状态，便于和我司技术部沟通交流

。由于运输的原因
，个别敏感细胞会出现不稳定的情况，请及时和老哥俱乐部联系，告知细胞的具体情况，以便老哥俱乐部的技术人员跟踪回访直至问题解决。

7. 该细胞仅供科研使用。

8. 备注
：运输用的培养基(灌液培养基)不能再用来培养细胞，请换用按照说明书细胞培养条件新配制的*培养基来培养细胞。收到细胞后次传代建议1
：2传代 。

9.注意
： 1:2传代就是1个T25瓶传2个T25瓶或者2个6cm皿。不是1个T25瓶传2个10cm皿。

公司正在出售的产品
：

小鼠8异前列腺素(8-iso-PG)elisa检测试剂盒

人蛋白酶3(PR3)elisa分析检测试剂盒

细胞磷酸甲羟戊酸激酶（phosphomevalsonate kinase）活性

小鼠B9(VB9)elisa检测试剂盒

大鼠巨噬细胞炎性蛋白3β(MIP-3β/ELC/CCL19)elisa检测试剂盒

小鼠P物质受体(SP-R)elisa检测试剂盒

防脱载玻片经APES处理 50片

细胞NF KAPPA B P65蛋白表达比色法定量检测试剂盒

马白介素6(IL-6)elisa分析检测试剂盒

味觉2型受体蛋白家族49抗体 TAS2R49

细胞骨架衔接蛋白BIN3抗体 BIN3

src原癌基因单克隆抗体 SRC

TRIM43B蛋白抗体 TRIM43B

AF680标记的上皮细胞粘附分子（CD326）抗体 EpCAM, Alexa Fluor 680 conjugated

AF750标记的造血干细胞抗原CD133抗体 CD133, Alexa Fluor 750 conjugated

紧密连接蛋白2单克隆抗体 Claudin 2

卷曲螺旋结构域蛋白126抗体 CCDC126

原钙粘蛋白γA1抗体 PCDHGA1

粘蛋白20抗体 MUC20

分泌型磷脂酶A2亚基5抗体 Secretory phospholipase A2 Type V

富含脯蛋白18抗体 PRR18

G蛋白偶联受体γ4抗体 G gamma4

HRP标记的人CD34单克隆抗体 CD34, HRP conjugated

酶原酶/维介素抗体 FGL2

大鼠促黄体 （LH）elisa检测试剂盒

大鼠毒蕈碱型乙酰受体(M-AChR)elisa分析检测试剂盒

M-AChR ELISA Kit

山羊超氧化物歧化酶1,可溶性(SOD1)elisa分析检测试剂盒

大鼠乳腺导管上皮细胞soluble(SOD1)ELISAkit