老哥俱乐部

细胞简介

：

肾是脊椎动物的一种器官，属于泌尿系统的一部分
，负责过滤血液中的杂质、维持体液和电解质的平衡，后产生尿液经尿道排出体外；同时也具备的功能以调节血压。用显微镜观察
，可见到每一个肾脏主要由约 100万个具有相同结构与机能的肾单位和少量结缔组织所组成，其间有大量血管和神经纤维
。

细胞特性：

1） 细胞来源于动物正常肾组织。

2) 广谱角蛋白（PCK）或细胞角蛋白-19（CK-19）荧光染色为阳性。

3) 经鉴定细胞纯度高于90%。

4) 不含有 HIV-1、 HBV、HCV
、支原体
、
、酵母和
。

5) 细胞生长方式：圆形
，多角形细胞，贴壁培养。

推荐培养基

：

老哥俱乐部推荐使用 delf原代 上皮 细胞培养体系 作为该细胞的培养试剂

。

实验报告

：

一、分离与培养
：

1
、无菌条件下，取出1-3d 龄SD大鼠心房组织，然后用PBS将此组织块清洗2次，将组织剪成1mm3左右大小；

2、往组织块中加入4 mL酶消化液（0.1% 和0.1% I型胶原酶），混悬10s，置37℃条件下消化10min，之后用滴管吹打制成单细胞悬液
，自然沉淀并收集上清，用含10% FBS培养基终止消化后4℃放置；

3
、剩下的组织再加入3～4mL酶消化液
，混悬10s
，置37℃消化10 min后，按上述方法收集上清并终止消化后4℃放置
，重复此步骤2-3次，直至组织被消化
；

4、用200目不锈钢筛网过滤细胞消化液，1200r/min 离心10min，弃去上清
，沉淀细胞用含有10％ FBS DMEM/F12培养基混悬，接种于25cm2培养瓶
，放置于37℃
，5％CO2 培养箱中培养
；

5
、差速贴壁1h后
，吸出培养基
，按实验需要接种于6孔板中继续培养；二、免疫荧光鉴定：

1、待心房肌细胞生长至80%融合时，弃去培养基，用温育的PBS冲洗细胞2次，每次10min
，然后用4%多聚甲醛在室温条件下固定细胞15min；

2、PBS冲洗细胞2次，每次10min，然后在4℃条件下
，用0.1％Triton X-100透膜15min；

3、PBS冲洗细胞2次，每次10min
，然后在室温条件下，用4% BSA封闭细胞30min；

4、按1: 100的比例稀释α-actin一抗

，然后将其放在4℃冰箱中孵育细胞过夜；

5、PBS冲洗细胞3次
，每次10min，按1：150的比例稀释抗α-actin的二抗， 37℃条件下放置1h；

6
、用PBS冲洗3次，每次10min，在倒置荧光显微镜下观察图像并拍照。

注意事项

：

1. 收到细胞后首先观察细胞瓶是否完好
，培养液是否有漏液、浑浊等现象
，若有上述现象发生请及时和老哥俱乐部联系
。

2. 仔细阅读细胞说明书，了解细胞相关信息
，如细胞形态
、所用培养基
、血清比例、所需细胞因子等
，确保细胞培养条件一致，若由于培养条件不一致而导致细胞出现问题，责任由客户自行承担。

3. 用75%酒精擦拭细胞瓶表面，显微镜下观察细胞状态
。因运输问题
，部分细胞由于温度变化及剧烈碰亡破碎形成碎片，是正常现象
。观察好细胞状态后，75%酒精消毒瓶壁将T25瓶置于37℃培养箱放置4-6h

。

4. 贴壁细胞可以消化

，悬浮细胞直接混匀收集细胞，900 rpm-1000 rpm离心3 min

，弃上清。加5 mL PBS重悬细胞
，再900 rpm-1000 rpm离心3 min
，
，用新鲜的*培养基重悬细胞，并接种到新的培养瓶或培养皿中，置于培养箱中进行培养。

5. 请客户用相同条件的培养基用于细胞培养
。

6. 建议客户收到细胞后前3天各拍几张细胞照片，记录细胞状态，便于和我司技术部沟通交流
。由于运输的原因，个别敏感细胞会出现不稳定的情况，请及时和老哥俱乐部联系，告知细胞的具体情况，以便老哥俱乐部的技术人员跟踪回访直至问题解决
。

7. 该细胞仅供科研使用。

8. 备注：运输用的培养基(灌液培养基)不能再用来培养细胞，请换用按照说明书细胞培养条件新配制的*培养基来培养细胞。收到细胞后次传代建议1：2传代 。

9.注意： 1:2传代就是1个T25瓶传2个T25瓶或者2个6cm皿
。不是1个T25瓶传2个10cm皿
。

公司正在出售的产品：

大鼠白介素4(IL-4)检测试剂盒 
，英文名
： IL-4 ELISA Kit

Mouse ierleukin 2 (IL-2) ELISA Kit 小鼠白介素2(IL-2)检测试剂盒

ELISA 小鼠热休克蛋白70(mouse HSP70)  进口分装

CLIAKitforiNOSELISAKIT大鼠诱导型合成酶

通用型甘油三酯(iglyceride)含量酶连续循环反应比色法定量检测试剂盒20次

ELISAKitPGR大鼠孕同受体

OLR1重组食蟹猴 OLR1 / LOX1 蛋白 Protein

Maspin (mammary serine protease inhibitor 0.5mgMaspin (mammary serine protease inhibitor) 抑癌基因抗原

STK4重组人 STK4 / MST1 蛋白 Protein

EPHB2 Protein Human 重组人 EphB2 / Hek5 蛋白

TEK Protein Mouse 重组小鼠 Tie2 / TEK 蛋白

Maspin (mammary serine protease inhibitor 0.5mgMaspin (mammary serine protease inhibitor) 抑癌基因抗原

EPHB2 Protein Human 重组人 EphB2 / Hek5 蛋白

OLR1重组食蟹猴 OLR1 / LOX1 蛋白 Protein

TEK Protein Mouse 重组小鼠 Tie2 / TEK 蛋白

STK4重组人 STK4 / MST1 蛋白 Protein

小鼠基质金属蛋白酶2/明胶酶A(MMP-2/Gelatinase A)ELISA 试剂盒 96T/48T

Rat soluble vascular cell adhesion molecule 1 (sVCAM-1) ELISA Kit 大鼠可溶性血管细胞粘附分子1(sVCAM-1)检测试剂盒

Humanconnectivetissue-activatingpeptideⅢ,CTAPⅢELISAKit 人结缔组织活化肽Ⅲ(CTAPⅢ)检测试剂盒 96T/48T 进口分装

Humanai-immunodeficiencyvirusaibody,HIV检测试剂盒人抗人类免疫缺陷病毒抗体(HIV)检测试剂盒规格：96T/48T

植物硫酸酶(rhodanase)活性比色法定量检测试剂盒20次

HumanVascularEndothelialcellGrowthFactor，VEGFELISAKit人血管内皮细胞生长因子(VEGF)检测试剂盒规格：96T/48T

大鼠肾上皮细胞小鼠白介素-9   英文名称：    ierleukin-9   规格：      英文缩写

：   IL-9

小鼠白介素-10   英文名称：    ierleukin-10   规格

：      英文缩写
：   IL-10

小鼠白介素-12   英文名称
：    ierleukin-12   规格：      英文缩写：   IL-12

小鼠白介素-13   英文名称：    ierleukin-13   规格
：      英文缩写：   IL-13