老哥俱乐部

细胞简介：

在严重创伤应激急性期，边缘系统为应激应答敏感区，其功能和应激联系密切
，杏仁核是边缘系统中重要的皮质下核团

，在创伤后应激障碍发病中起重要作用。

海马是由于海马神经元凋亡
，致体积减小，杏仁核和海马的功能密切相关
，海马的部分功能可由杏仁核的调节而实现
。

神经元是构成神经系统结构和功能的基本单位。神经元具有长突起，由细胞体和细胞突起构成。

细胞特性：

1） 组织来源于实验动物的正常脑组织

。 本细胞为终末分化细胞，增殖能力很弱
，建议客户收到细胞后直接用于后续实验，不要进行扩增培养。

2） 细胞鉴定

：β-tubulin荧光染色为阳性。

3） 经鉴定细胞纯度高于90%。

4） 不含有 HIV-1、 HBV、HCV、支原体、
、酵母和。

5） 细胞生长方式：不规则细胞，贴壁培养
。

推荐培养基
：

老哥俱乐部推荐使用 原代神经元细胞培养体系 作为体外培养原代杏仁核神经元细胞的培养基。

实验报告：

一、分离与培养：

1
、无菌条件下，取出1-3d 龄SD大鼠心房组织

，然后用PBS将此组织块清洗2次，将组织剪成1mm3左右大小；

2、往组织块中加入4 mL酶消化液（0.1% 和0.1% I型胶原酶）
，混悬10s，置37℃条件下消化10min，之后用滴管吹打制成单细胞悬液，自然沉淀并收集上清，用含10% FBS培养基终止消化后4℃放置
；

3
、剩下的组织再加入3～4mL酶消化液，混悬10s，置37℃消化10 min后，按上述方法收集上清并终止消化后4℃放置，重复此步骤2-3次，直至组织被消化；

4
、用200目不锈钢筛网过滤细胞消化液
，1200r/min 离心10min
，弃去上清，沉淀细胞用含有10％ FBS DMEM/F12培养基混悬，接种于25cm2培养瓶，放置于37℃ ，5％CO2 培养箱中培养
；

5、差速贴壁1h后，吸出培养基，按实验需要接种于6孔板中继续培养
；二
、免疫荧光鉴定：

1
、待心房肌细胞生长至80%融合时，弃去培养基，用温育的PBS冲洗细胞2次，每次10min
，然后用4%多聚甲醛在室温条件下固定细胞15min

；

2、PBS冲洗细胞2次，每次10min

，然后在4℃条件下，用0.1％Triton X-100透膜15min；

3、PBS冲洗细胞2次，每次10min
，然后在室温条件下
，用4% BSA封闭细胞30min；

4、按1: 100的比例稀释α-actin一抗
，然后将其放在4℃冰箱中孵育细胞过夜
；

5
、PBS冲洗细胞3次
，每次10min，按1：150的比例稀释抗α-actin的二抗

， 37℃条件下放置1h
；

6
、用PBS冲洗3次，每次10min
，在倒置荧光显微镜下观察图像并拍照
。

公司正在出售的产品：

大鼠白介素5(IL-5)检测试剂盒 ，英文名： IL-5 ELISA Kit

Mouse ierleukin 1 soluble receptor II (IL-1sR II) ELISA Kit 小鼠白介素1可溶性受体Ⅱ(IL-1sRⅡ)检测试剂盒

ELISA 小鼠糖化血红蛋白(mouse HbA1c)  进口分装

CLIAKitforiNOS(Mouseinducibleniicoxidesyhase)ELISAKit小鼠诱导型合成酶

通用型副氏菌B(SalmonellaParatyphiB)定性试剂盒20次

ELISAKitapo-A1大鼠载脂蛋白A1

TSLP重组小鼠 TSLP 蛋白 Protein

Toll样受体4(TLR4)重组蛋白 Recombinant Toll Like Receptor 4 (TLR4)

CPNE1重组人 CPNE1 / Copine I / CPN1 蛋白 (SUMO 标签) Protein

EPOR Protein Human 重组人 EPO Receptor / EPOR 蛋白

MET Protein Cynomolgus 重组食蟹猴 / 恒河猴 c-MET / HGFR 蛋白

Toll样受体4(TLR4)重组蛋白 Recombinant Toll Like Receptor 4 (TLR4)

EPOR Protein Human 重组人 EPO Receptor / EPOR 蛋白

TSLP重组小鼠 TSLP 蛋白 Protein

MET Protein Cynomolgus 重组食蟹猴 / 恒河猴 c-MET / HGFR 蛋白

CPNE1重组人 CPNE1 / Copine I / CPN1 蛋白 (SUMO 标签) Protein

小鼠肌红蛋白(MYO/MB)ELISA 试剂盒 96T/48T

Rat Granulocyte macrophage colony stimulating factor (GM-CSF) ELISA Kit 大鼠粒细胞巨噬细胞集落刺激因子(GM-CSF)检测试剂盒

HumanGTPaseactivatingprotein,GAPELISAKit 人GTP酶活化蛋白(GAP)检测试剂盒 96T/48T 进口分装

Humanai-lymphocyteglobulin,ALG检测试剂盒人抗淋巴细胞球蛋白(ALG)检测试剂盒规格：96T/48T

植物/ATP酶(Na+/K+-ATPase)活性比色法定量检测试剂盒20次

HumanVacuolatingcytotoxinA,VacAELISAKit人空泡毒素相关蛋白A(VacA)检测试剂盒规格：96T/48T

大鼠杏仁核神经元细胞小鼠白介素-2(mouse IL-2)   作用
：   ELISA   规格：      进口分装

小鼠可溶性白介素-2受体(mouse sIL-2R)   作用：   ELISA   规格
：      进口分装

小鼠白介素-3(mouse IL-3)   作用
：   ELISA   规格：      进口分装

小鼠白介素-4(mouse IL-4)   作用
：   ELISA   规格：      进口分装

注意事项：

1. 收到细胞后首先观察细胞瓶是否完好，培养液是否有漏液、浑浊等现象，若有上述现象发生请及时和老哥俱乐部联系
。

2. 仔细阅读细胞说明书，了解细胞相关信息，如细胞形态、所用培养基
、血清比例
、所需细胞因子等，确保细胞培养条件一致，若由于培养条件不一致而导致细胞出现问题，责任由客户自行承担。

3. 用75%酒精擦拭细胞瓶表面，显微镜下观察细胞状态。因运输问题，部分细胞由于温度变化及剧烈碰亡破碎形成碎片
，是正常现象。观察好细胞状态后
，75%酒精消毒瓶壁将T25瓶置于37℃培养箱放置4-6h
。

4. 贴壁细胞可以消化，悬浮细胞直接混匀收集细胞，900 rpm-1000 rpm离心3 min
，弃上清。加5 mL PBS重悬细胞，再900 rpm-1000 rpm离心3 min

，，用新鲜的*培养基重悬细胞，并接种到新的培养瓶或培养皿中，置于培养箱中进行培养
。

5. 请客户用相同条件的培养基用于细胞培养。

6. 建议客户收到细胞后前3天各拍几张细胞照片
，记录细胞状态，便于和我司技术部沟通交流。由于运输的原因
，个别敏感细胞会出现不稳定的情况

，请及时和老哥俱乐部联系

，告知细胞的具体情况，以便老哥俱乐部的技术人员跟踪回访直至问题解决。

7. 该细胞仅供科研使用

。

8. 备注：运输用的培养基(灌液培养基)不能再用来培养细胞
，请换用按照说明书细胞培养条件新配制的*培养基来培养细胞。收到细胞后次传代建议1：2传代 。

9.注意： 1:2传代就是1个T25瓶传2个T25瓶或者2个6cm皿
。不是1个T25瓶传2个10cm皿。