老哥俱乐部

细胞简介
：

调节性 T细胞（Treg）是具有调节活性的T细胞亚群
，在维持机体的耐受以及调控应答过程中发挥重要作用。

Treg细胞通过其表面表达一致性分子，分泌抑炎性细胞因子
，直接发挥细胞毒作用以及改变抗原呈递细胞的抗原提呈功能而发挥调节作用。CD4+CD25+Foxp3+Treg细胞属于CD4+T细胞亚群，占正常人外周血及脾脏组织中的CD4+T细胞的5%-10%
。

细胞特性：

1）细胞来源于外周血。

2）细胞鉴定：CD4和CD25荧光染色为阳性


。

3）经鉴定细胞纯度高于90%。

4）不含有 HIV-1、 HBV
、HCV、支原体、、酵母和。

5）细胞生长方式：悬浮培养

。

推荐培养基
：

老哥俱乐部推荐使用 delf 原代 T细胞培养体系 作为体外培养的培养基。

实验报告
：

一、分离与培养：

1、无菌条件下

，取出1-3d 龄SD大鼠心房组织
，然后用PBS将此组织块清洗2次，将组织剪成1mm3左右大小；

2、往组织块中加入4 mL酶消化液（0.1% 和0.1% I型胶原酶），混悬10s
，置37℃条件下消化10min，之后用滴管吹打制成单细胞悬液
，自然沉淀并收集上清
，用含10% FBS培养基终止消化后4℃放置
；

3、剩下的组织再加入3～4mL酶消化液
，混悬10s，置37℃消化10 min后，按上述方法收集上清并终止消化后4℃放置
，重复此步骤2-3次
，直至组织被消化；

4、用200目不锈钢筛网过滤细胞消化液

，1200r/min 离心10min，弃去上清，沉淀细胞用含有10％ FBS DMEM/F12培养基混悬
，接种于25cm2培养瓶，放置于37℃ ，5％CO2 培养箱中培养；

5
、差速贴壁1h后，吸出培养基
，按实验需要接种于6孔板中继续培养
；二
、免疫荧光鉴定：

1、待心房肌细胞生长至80%融合时
，弃去培养基，用温育的PBS冲洗细胞2次，每次10min，然后用4%多聚甲醛在室温条件下固定细胞15min；

2、PBS冲洗细胞2次，每次10min，然后在4℃条件下，用0.1％Triton X-100透膜15min；

3
、PBS冲洗细胞2次
，每次10min
，然后在室温条件下
，用4% BSA封闭细胞30min；

4、按1: 100的比例稀释α-actin一抗，然后将其放在4℃冰箱中孵育细胞过夜；

5
、PBS冲洗细胞3次，每次10min，按1：150的比例稀释抗α-actin的二抗， 37℃条件下放置1h；

6、用PBS冲洗3次，每次10min
，在倒置荧光显微镜下观察图像并拍照。

公司正在出售的产品：

大鼠白介素20(IL-20)检测试剂盒 
，英文名
： IL-20 ELISA Kit

Mouse cystatin / cystatin C (Cys-C) ELISA Kit 小鼠半胱蛋白酶抑制剂/胱抑素C(Cys-C)检测试剂盒

ELISA 小鼠白介素-2(mouse IL-2)  进口分装

CLIAKitforIL-7(MouseIerleukin-7)ELISAkit小鼠白介素7

通用型肌酐(CREATININE)化学比色法定量检测试剂盒50次

ELISAKitAmylin大鼠胰淀素

EPHB4重组人 EphB4 / HTK 蛋白 Protein

热休克蛋白β2(HSPβ2)重组蛋白 Recombinant Heat Shock Protein Beta 2 (HSPb2)

PKLR重组人 PKLR / PKRL 蛋白 Protein

FLRT3 Protein Human 重组人 FLRT3 蛋白

NA Protein H3N2 重组甲型流感 H3N2 神经酸酶 (Neuraminidase / NA) (N294S mutation) (高活性)

热休克蛋白β2(HSPβ2)重组蛋白 Recombinant Heat Shock Protein Beta 2 (HSPb2)

FLRT3 Protein Human 重组人 FLRT3 蛋白

EPHB4重组人 EphB4 / HTK 蛋白 Protein

NA Protein H3N2 重组甲型流感 H3N2 神经酸酶 (Neuraminidase / NA) (N294S mutation) (高活性)

PKLR重组人 PKLR / PKRL 蛋白 Protein

小鼠促肾上皮质激素释放激素(CRH)ELISA 试剂盒 96T/48T

Human glycoprotein 130 (gp130) ELISA Kit 人糖蛋白130(gp130)检测试剂盒

HumanhighsensitivityC-ReactiveProtein,hs-CRPELISAKit 人超敏C反应蛋白(hs-CRP)检测试剂盒 96T/48T 进口分装

HumanB-CellLinkerProtein,BLNK检测试剂盒人B细胞连接蛋白(BLNK)检测试剂盒规格
：96T/48T

植物种子高质化叶绿体分离试剂盒10次

Huma-cellspecificGTPase,TgtpELISAKit人T细胞特异性鸟苷三0酸酶(Tgtp)检测试剂盒规格：96T/48T

人Treg细胞豚鼠钩端IgG(Lebtospira)检测试剂盒   96T/48T   试剂盒   组装/原装

豚鼠肝细胞生长因子(HGF)检测试剂盒   96T/48T   试剂盒   组装/原装

豚鼠端粒酶(TE)检测试剂盒   96T/48T   试剂盒   组装/原装

豚鼠单核细胞趋化蛋白4(MCP-4/CCL13)检测试剂盒   96T/48T   试剂盒   组装/原装

注意事项：

1. 收到细胞后首先观察细胞瓶是否完好，培养液是否有漏液
、浑浊等现象
，若有上述现象发生请及时和老哥俱乐部联系。

2. 仔细阅读细胞说明书，了解细胞相关信息，如细胞形态
、所用培养基、血清比例、所需细胞因子等
，确保细胞培养条件一致
，若由于培养条件不一致而导致细胞出现问题，责任由客户自行承担。

3. 用75%酒精擦拭细胞瓶表面
，显微镜下观察细胞状态。因运输问题
，部分细胞由于温度变化及剧烈碰亡破碎形成碎片
，是正常现象。观察好细胞状态后
，75%酒精消毒瓶壁将T25瓶置于37℃培养箱放置4-6h。

4. 贴壁细胞可以消化，悬浮细胞直接混匀收集细胞，900 rpm-1000 rpm离心3 min
，弃上清。加5 mL PBS重悬细胞
，再900 rpm-1000 rpm离心3 min，
，用新鲜的*培养基重悬细胞，并接种到新的培养瓶或培养皿中，置于培养箱中进行培养。

5. 请客户用相同条件的培养基用于细胞培养。

6. 建议客户收到细胞后前3天各拍几张细胞照片，记录细胞状态，便于和我司技术部沟通交流
。由于运输的原因

，个别敏感细胞会出现不稳定的情况，请及时和老哥俱乐部联系，告知细胞的具体情况，以便老哥俱乐部的技术人员跟踪回访直至问题解决
。

7. 该细胞仅供科研使用
。

8. 备注
：运输用的培养基(灌液培养基)不能再用来培养细胞

，请换用按照说明书细胞培养条件新配制的*培养基来培养细胞。收到细胞后次传代建议1：2传代
。

9.注意
： 1:2传代就是1个T25瓶传2个T25瓶或者2个6cm皿。不是1个T25瓶传2个10cm皿。