老哥俱乐部

细胞简介：

扁桃体是一对扁卵圆形的器官，位于扁桃体窝内
。按其位置分别称为腭扁桃体、咽扁桃体和舌扁桃体。其中，腭扁桃体大，通常所说的扁桃体即为腭扁桃体
。

腭扁桃体我为多源性血供器官，主要的营养动脉分别为腭升动脉、面动脉和咽升动脉
。动脉内皮组成了动脉内壁，并持续受到血流剪切力的影响。内皮细胞在切应力的作用下，分泌不同的内皮因子并进而影响血管收缩和生长。

细胞特性：

1）细胞来源于人正常扁桃体组织。

2)细胞鉴定
：vWF荧光染色为阳性。

3)经鉴定细胞纯度高于90%。

4)不含有 HIV-1
、 HBV、HCV、支原体、、酵母和。

5)细胞生长方式
：上皮样
，多角形细胞
，贴壁培养。

推荐培养基：

老哥俱乐部推荐使用 delf原代内皮细胞培养体系 作为体外培养的培养基。

实验报告：

一、分离与培养
：

1
、无菌条件下，取出1-3d 龄SD大鼠心房组织
，然后用PBS将此组织块清洗2次
，将组织剪成1mm3左右大小
；

2、往组织块中加入4 mL酶消化液（0.1% 和0.1% I型胶原酶）
，混悬10s，置37℃条件下消化10min，之后用滴管吹打制成单细胞悬液，自然沉淀并收集上清
，用含10% FBS培养基终止消化后4℃放置
；

3、剩下的组织再加入3～4mL酶消化液，混悬10s
，置37℃消化10 min后，按上述方法收集上清并终止消化后4℃放置，重复此步骤2-3次，直至组织被消化
；

4
、用200目不锈钢筛网过滤细胞消化液，1200r/min 离心10min
，弃去上清，沉淀细胞用含有10％ FBS DMEM/F12培养基混悬，接种于25cm2培养瓶
，放置于37℃ 
，5％CO2 培养箱中培养；

5、差速贴壁1h后，吸出培养基，按实验需要接种于6孔板中继续培养；二
、免疫荧光鉴定：

1
、待心房肌细胞生长至80%融合时
，弃去培养基，用温育的PBS冲洗细胞2次
，每次10min，然后用4%多聚甲醛在室温条件下固定细胞15min
；

2、PBS冲洗细胞2次
，每次10min，然后在4℃条件下，用0.1％Triton X-100透膜15min
；

3、PBS冲洗细胞2次
，每次10min，然后在室温条件下，用4% BSA封闭细胞30min
；

4、按1: 100的比例稀释α-actin一抗，然后将其放在4℃冰箱中孵育细胞过夜；

5
、PBS冲洗细胞3次，每次10min
，按1：150的比例稀释抗α-actin的二抗， 37℃条件下放置1h
；

6、用PBS冲洗3次
，每次10min
，在倒置荧光显微镜下观察图像并拍照。

注意事项：

1. 收到细胞后首先观察细胞瓶是否完好，培养液是否有漏液、浑浊等现象，若有上述现象发生请及时和老哥俱乐部联系。

2. 仔细阅读细胞说明书，了解细胞相关信息，如细胞形态、所用培养基
、血清比例、所需细胞因子等，确保细胞培养条件一致，若由于培养条件不一致而导致细胞出现问题，责任由客户自行承担。

3. 用75%酒精擦拭细胞瓶表面，显微镜下观察细胞状态。因运输问题
，部分细胞由于温度变化及剧烈碰亡破碎形成碎片，是正常现象。观察好细胞状态后，75%酒精消毒瓶壁将T25瓶置于37℃培养箱放置4-6h
。

4. 贴壁细胞可以消化，悬浮细胞直接混匀收集细胞，900 rpm-1000 rpm离心3 min
，弃上清

。加5 mL PBS重悬细胞
，再900 rpm-1000 rpm离心3 min，
，用新鲜的*培养基重悬细胞，并接种到新的培养瓶或培养皿中，置于培养箱中进行培养。

5. 请客户用相同条件的培养基用于细胞培养。

6. 建议客户收到细胞后前3天各拍几张细胞照片

，记录细胞状态，便于和我司技术部沟通交流。由于运输的原因，个别敏感细胞会出现不稳定的情况
，请及时和老哥俱乐部联系
，告知细胞的具体情况，以便老哥俱乐部的技术人员跟踪回访直至问题解决
。

7. 该细胞仅供科研使用

。

8. 备注：运输用的培养基(灌液培养基)不能再用来培养细胞
，请换用按照说明书细胞培养条件新配制的*培养基来培养细胞。收到细胞后次传代建议1：2传代 。

9.注意
： 1:2传代就是1个T25瓶传2个T25瓶或者2个6cm皿。不是1个T25瓶传2个10cm皿。

公司正在出售的产品
：

人基质金属蛋白酶-3（MMP-3）elisa检测试剂盒

整合素和生长因子样蛋白1抗体

LIMS1

信号转导蛋白9复合体7b抗体

CSN7b

磷酸化D激酶衰减蛋白1抗体  Anti-phospho-DOK1 (Ser450)

核糖体S6激酶RSK2抗体  Anti-Rsk2/MAPKAP Kinase 1b

9号染色体开放阅读框156抗体  Anti-C9orf156

锌指蛋白Zdhhc12抗体  Anti-ZDHHC-12

诺里病NDP蛋白/早产儿视网膜病蛋白抗体

NORRIN

通用转录因子2H亚基4/TFIIH p52抗体

GTF2H4

酪蛋白硫酸转移酶2抗体  Anti-TPST2

磷酸化磷酯酶Cβ3抗体  Anti-Phospho-PLC beta3 (Ser1105)

蛋白磷酸酶2C亚型α抗体  Anti-PP2CA/PPM1A

单链DNA结合蛋白相互作用蛋白1  Anti-SOSSC/C9orf80

磷酸化Ephrin B抗体

phospho-Ephrin B (Tyr329)

嗅觉受体5AU17抗体

OR5B17

信号传导抑制蛋白WD重复蛋白2抗体  Anti-WSB2/WD SOCS box protein 2

核孔蛋白NUP160抗体  Anti-NUP160

肾素结合蛋白抗体  Anti-RENBP

磷酸钠协转运蛋白抗体  Anti-SLC34A2

大鼠β淀粉样蛋白1-40(Aβ1-40)elisa分析检测试剂盒

钾通道四聚体结构域蛋白11抗体

KCTD11

芳香基硫酸酯酶F抗体

人扁桃体动脉内皮细胞ARSF