老哥俱乐部

细胞简介
：

胆囊，是位于右方肋骨下肝脏后方的梨形囊袋构造，有浓缩和储存胆汁之作用
。胆囊壁由粘膜、肌层和外膜三层组成
。微血管作为分布广的血管。它是连接微动脉和微静脉的血管。它们分支并互相吻合成网。管壁薄

，通透性强
。其功能是利于血液与组织之间进行物质交换
。微血管管壁主要由一层内皮细胞和基膜组成
。细的横切面由一个内皮细胞围成
。

细胞特性：

1）细胞来源于人正常胆囊组织
。

2)细胞鉴定

：vWF荧光染色为阳性。

3)经鉴定细胞纯度高于90%。

4)不含有 HIV-1
、 HBV、HCV

、支原体、、酵母和。

5)细胞生长方式：上皮样，多角形细胞，贴壁培养。

推荐培养基

：

老哥俱乐部推荐使用 Delf原代内皮细胞培养体系 作为体外培养的培养基。

实验报告：

一
、分离与培养：

1、无菌条件下，取出1-3d 龄SD大鼠心房组织，然后用PBS将此组织块清洗2次，将组织剪成1mm3左右大小
；

2、往组织块中加入4 mL酶消化液（0.1% 和0.1% I型胶原酶）
，混悬10s
，置37℃条件下消化10min，之后用滴管吹打制成单细胞悬液，自然沉淀并收集上清
，用含10% FBS培养基终止消化后4℃放置；

3、剩下的组织再加入3～4mL酶消化液，混悬10s，置37℃消化10 min后，按上述方法收集上清并终止消化后4℃放置，重复此步骤2-3次，直至组织被消化；

4
、用200目不锈钢筛网过滤细胞消化液
，1200r/min 离心10min，弃去上清，沉淀细胞用含有10％ FBS DMEM/F12培养基混悬，接种于25cm2培养瓶


，放置于37℃ 

，5％CO2 培养箱中培养

；

5、差速贴壁1h后，吸出培养基，按实验需要接种于6孔板中继续培养；二
、免疫荧光鉴定：

1
、待心房肌细胞生长至80%融合时，弃去培养基，用温育的PBS冲洗细胞2次，每次10min，然后用4%多聚甲醛在室温条件下固定细胞15min；

2、PBS冲洗细胞2次，每次10min，然后在4℃条件下
，用0.1％Triton X-100透膜15min；

3
、PBS冲洗细胞2次，每次10min，然后在室温条件下，用4% BSA封闭细胞30min；

4、按1: 100的比例稀释α-actin一抗，然后将其放在4℃冰箱中孵育细胞过夜
；

5、PBS冲洗细胞3次，每次10min，按1
：150的比例稀释抗α-actin的二抗， 37℃条件下放置1h
；

6、用PBS冲洗3次，每次10min，在倒置荧光显微镜下观察图像并拍照。

注意事项：

1. 收到细胞后首先观察细胞瓶是否完好，培养液是否有漏液
、浑浊等现象，若有上述现象发生请及时和老哥俱乐部联系
。

2. 仔细阅读细胞说明书，了解细胞相关信息，如细胞形态
、所用培养基、血清比例、所需细胞因子等，确保细胞培养条件一致，若由于培养条件不一致而导致细胞出现问题，责任由客户自行承担
。

3. 用75%酒精擦拭细胞瓶表面，显微镜下观察细胞状态
。因运输问题，部分细胞由于温度变化及剧烈碰亡破碎形成碎片，是正常现象。观察好细胞状态后，75%酒精消毒瓶壁将T25瓶置于37℃培养箱放置4-6h。

4. 贴壁细胞可以消化，悬浮细胞直接混匀收集细胞

，900 rpm-1000 rpm离心3 min，弃上清。加5 mL PBS重悬细胞，再900 rpm-1000 rpm离心3 min，

，用新鲜的*培养基重悬细胞，并接种到新的培养瓶或培养皿中，置于培养箱中进行培养
。

5. 请客户用相同条件的培养基用于细胞培养
。

6. 建议客户收到细胞后前3天各拍几张细胞照片，记录细胞状态，便于和我司技术部沟通交流
。由于运输的原因
，个别敏感细胞会出现不稳定的情况，请及时和老哥俱乐部联系，告知细胞的具体情况
，以便老哥俱乐部的技术人员跟踪回访直至问题解决。

7. 该细胞仅供科研使用。

8. 备注：运输用的培养基(灌液培养基)不能再用来培养细胞，请换用按照说明书细胞培养条件新配制的*培养基来培养细胞。收到细胞后次传代建议1
：2传代 
。

9.注意： 1:2传代就是1个T25瓶传2个T25瓶或者2个6cm皿。不是1个T25瓶传2个10cm皿。

公司正在出售的产品：

大鼠能受体β1(ADRβ1)检测试剂盒
，英文名： ADRβ1 ELISA Kit

Mouse iercellular adhesion molecule 1 (ICAM-1/CD54) ELISA Kit 小鼠细胞间粘附分子1(ICAM-1/CD54)检测试剂盒

RatTissue-typePlasiminogenActilyse,t-PAELISAKit 大鼠组织型纤溶酶原激活剂(t-PA)检测试剂盒 96T/48T 进口分装

CLIAKitforHBsAg(立可读)乙型肝表面抗原

细胞β-半乳糖苷酶活性原位染色试剂盒100次

Sophorajaponicaagglinin,SJAELISAKit槐凝集素(SJA)检测试剂盒规格
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TNFRSF14重组食蟹猴 HVEM / TNFRSF14 蛋白 (Fc 标签) Protein

MADCAM-1 黏膜选址素(抗原 0.5mgMADCAM-1 黏膜选址素(抗原)

FCGR2A重组人 CD32a / FCGR2A 蛋白 (167 His, His 标签) Protein

ERH Protein Human 重组人 ERH / DROER 蛋白

MAPK1 Protein Mouse 重组小鼠 ERK2 / MAPK1 / MAPK2 蛋白 (His & GST 标签)

MADCAM-1 黏膜选址素(抗原 0.5mgMADCAM-1 黏膜选址素(抗原)

ERH Protein Human 重组人 ERH / DROER 蛋白

TNFRSF14重组食蟹猴 HVEM / TNFRSF14 蛋白 (Fc 标签) Protein

MAPK1 Protein Mouse 重组小鼠 ERK2 / MAPK1 / MAPK2 蛋白 (His & GST 标签)

FCGR2A重组人 CD32a / FCGR2A 蛋白 (167 His, His 标签) Protein

小鼠坏死因子样弱凋亡因子(TWEAK)检测试剂盒 96T/48T

Ai human small nuclear ribonucleoprotein /Sm aibody (sNP/Sm) ELISA Kit 人抗小核糖核蛋白/Sm抗体(sNP/Sm)检测试剂盒

HumanE2/ubiquitin-conjugatingenzyme,E2/UBCEELISAKit 人泛素结合酶(E2/UBCE)检测试剂盒 96T/48T 进口分装

CLIAKitforACA-IgAELISAKit大鼠抗心0脂抗体IgA

一步法PCR反应液20次

Mouseosteoclastdiffereiationfactor,ODFELISAKit小鼠破骨细胞分化因子(ODF)检测试剂盒规格
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人胆囊微血管内皮细胞小鼠白介素1(IL-1)ELISAKit   ELISA.   96T/48T

小鼠白介素1β(IL-1β)ELISAKit   ELISA.   96T/48T

小鼠肌红蛋白(MYO/MB)ELISAKit   ELISA.   96T/48T

小鼠血栓素B2(TXB2)ELISAKit   ELISA.   96T/48T