老哥俱乐部

细胞简介

：

肺癌是上常见的癌症，仅次于乳腺癌和前列腺癌的第三大常见癌症，但肺癌是发病率和死亡率增长快
，对人类健康和生命威胁大的恶性肿瘤之一
。对肺癌患者患者进行分期很重要，有助于选择和预后。

细胞特性
：

1）细胞来源于人肺癌组织。

2)不含有 HIV-1、 HBV、HCV、支原体、、酵母和。

3)细胞生长方式：长梭形
，不规则细胞
，贴壁培养。

推荐培养基
：

老哥俱乐部推荐使用 delf原代 肿瘤 细胞培养体系 作为该细胞的培养基
。

实验报告
：

一、分离与培养：

1、无菌条件下，取出1-3d 龄SD大鼠心房组织，然后用PBS将此组织块清洗2次，将组织剪成1mm3左右大小
；

2、往组织块中加入4 mL酶消化液（0.1% 和0.1% I型胶原酶）
，混悬10s，置37℃条件下消化10min
，之后用滴管吹打制成单细胞悬液
，自然沉淀并收集上清，用含10% FBS培养基终止消化后4℃放置；

3、剩下的组织再加入3～4mL酶消化液，混悬10s

，置37℃消化10 min后
，按上述方法收集上清并终止消化后4℃放置
，重复此步骤2-3次
，直至组织被消化；

4
、用200目不锈钢筛网过滤细胞消化液
，1200r/min 离心10min
，弃去上清，沉淀细胞用含有10％ FBS DMEM/F12培养基混悬，接种于25cm2培养瓶，放置于37℃ ，5％CO2 培养箱中培养；

5、差速贴壁1h后，吸出培养基，按实验需要接种于6孔板中继续培养
；二、免疫荧光鉴定：

1
、待心房肌细胞生长至80%融合时

，弃去培养基
，用温育的PBS冲洗细胞2次
，每次10min，然后用4%多聚甲醛在室温条件下固定细胞15min

；

2、PBS冲洗细胞2次
，每次10min，然后在4℃条件下，用0.1％Triton X-100透膜15min；

3
、PBS冲洗细胞2次，每次10min，然后在室温条件下，用4% BSA封闭细胞30min
；

4、按1: 100的比例稀释α-actin一抗
，然后将其放在4℃冰箱中孵育细胞过夜；

5、PBS冲洗细胞3次
，每次10min，按1：150的比例稀释抗α-actin的二抗， 37℃条件下放置1h
；

6、用PBS冲洗3次，每次10min

，在倒置荧光显微镜下观察图像并拍照。

公司正在出售的产品：

人乙型肝病毒核心抗原(HBcAg) 检测试剂盒

Human tissue polypeptide aigen (TPA) ELISA Kit 人组织多肽抗原(TPA)检测试剂盒

HumanangiotensionIreceptorAibody,ANG-ⅠRaibodyELISAKit 人血管紧张素Ⅰ受体抗体(ANG-ⅠR)检测试剂盒 96T/48T 进口分装

HumanIerleukin3,IL-3检测试剂盒人白介素3(IL-3)检测试剂盒规格：96T/48T

组织(lithium)酶连续循环反应比色法定量检测试剂盒20次

humanIerleukin27

，IL-27ELISAKit人白介素27(IL-27)检测试剂盒规格
：96T/48T

FCGRT & B2M重组食蟹猴 FCGRT & B2M Heterodimer 蛋白 Protein

MMP-13 (Matrix metalloproteinase 13 0.5mgMMP-13 (Matrix metalloproteinase 13) 基质金属蛋白酶13抗原

CLIC4重组人 CLIC4 蛋白 Protein

JAM3 Protein Human 重组人 JAM3 / JAM-C 蛋白

SEMA5A Protein Mouse 重组小鼠 Semaphorin 5A / SEMA5A 蛋白

MMP-13 (Matrix metalloproteinase 13 0.5mgMMP-13 (Matrix metalloproteinase 13) 基质金属蛋白酶13抗原

JAM3 Protein Human 重组人 JAM3 / JAM-C 蛋白

FCGRT & B2M重组食蟹猴 FCGRT & B2M Heterodimer 蛋白 Protein

SEMA5A Protein Mouse 重组小鼠 Semaphorin 5A / SEMA5A 蛋白

CLIC4重组人 CLIC4 蛋白 Protein

豚鼠白介素10(IL10)检测试剂盒 
，英文名： IL10 ELISA Kit

Human mannose receptor (MR) ELISA Kit 人甘露糖受体(MR)检测试剂盒

RabbitGlucosedependeinsulieleasingpolypeptide,GIPELISAKit 兔子葡萄糖依赖性胰岛素释放多肽(GIP)检测试剂盒 96T/48T 进口分装

CLIAKitforATGA/TGABELISAKit大鼠抗甲状腺球蛋白抗体

线粒体复合物IV蛋白免疫共沉淀分析试剂盒5次

Rabbitamyloidbetapeptide1-40,Aβ1-40ELISAKit兔β淀粉样蛋白1-40(Aβ1-40)检测试剂盒规格：96T/48T

人肺癌细胞人孕激素/孕(PROG)ELISAKit   ELISA.   96T/48T

人超敏游离雌三醇(uE3)ELISAKit   ELISA.   96T/48T

人去甲上腺素(NA)ELISAKIT   ELISA.   96T/48T

人前列腺素F(PGF)ELISAKit   ELISA.   96T/48T

注意事项：

1. 收到细胞后首先观察细胞瓶是否完好
，培养液是否有漏液、浑浊等现象，若有上述现象发生请及时和老哥俱乐部联系。

2. 仔细阅读细胞说明书
，了解细胞相关信息，如细胞形态、所用培养基
、血清比例

、所需细胞因子等，确保细胞培养条件一致，若由于培养条件不一致而导致细胞出现问题


，责任由客户自行承担

。

3. 用75%酒精擦拭细胞瓶表面，显微镜下观察细胞状态。因运输问题，部分细胞由于温度变化及剧烈碰亡破碎形成碎片，是正常现象。观察好细胞状态后，75%酒精消毒瓶壁将T25瓶置于37℃培养箱放置4-6h。

4. 贴壁细胞可以消化，悬浮细胞直接混匀收集细胞，900 rpm-1000 rpm离心3 min，弃上清。加5 mL PBS重悬细胞，再900 rpm-1000 rpm离心3 min
，
，用新鲜的*培养基重悬细胞，并接种到新的培养瓶或培养皿中
，置于培养箱中进行培养。

5. 请客户用相同条件的培养基用于细胞培养
。

6. 建议客户收到细胞后前3天各拍几张细胞照片
，记录细胞状态，便于和我司技术部沟通交流。由于运输的原因，个别敏感细胞会出现不稳定的情况
，请及时和老哥俱乐部联系，告知细胞的具体情况
，以便老哥俱乐部的技术人员跟踪回访直至问题解决。

7. 该细胞仅供科研使用
。

8. 备注
：运输用的培养基(灌液培养基)不能再用来培养细胞，请换用按照说明书细胞培养条件新配制的*培养基来培养细胞

。收到细胞后次传代建议1：2传代 。

9.注意： 1:2传代就是1个T25瓶传2个T25瓶或者2个6cm皿。不是1个T25瓶传2个10cm皿
。