老哥俱乐部

细胞简介：

肺微血管周细胞分布于肺组织的微血管系统中，调节血管形成、稳定和功能的关键因素。周细胞典型的特征是有一个突出的核
，核周围胞浆较少
，有许多平行于微血管长轴的突起
，这些突起逐渐变细并包绕微血管腔，起到对管腔的支持作用。

同时，一个周细胞可以通过伸展的突起与微循环中的多个接触。此外，周细胞和内皮细胞间的相互作用在血管新生中具有极为重要的作用
。

细胞特性：

1）组织来源于术后人的肺组织。

2）细胞鉴定：平滑肌肌动蛋白（α-SMA）荧光染色为阳性
。

3）经鉴定细胞纯度高于90%。

4）不含有HIV-1、HBV
、HCV、支原体、、酵母和
。

5）细胞生长方式：长梭形细胞
，不规则细胞，贴壁培养。

推荐培养基：

老哥俱乐部推荐使用 delf原代 周 细胞培养体系 作为该细胞的培养基
。

实验报告
：

一、分离与培养：

1、无菌条件下，取出1-3d 龄SD大鼠心房组织
，然后用PBS将此组织块清洗2次，将组织剪成1mm3左右大小
；

2
、往组织块中加入4 mL酶消化液（0.1% 和0.1% I型胶原酶）
，混悬10s
，置37℃条件下消化10min，之后用滴管吹打制成单细胞悬液，自然沉淀并收集上清，用含10% FBS培养基终止消化后4℃放置；

3、剩下的组织再加入3～4mL酶消化液，混悬10s
，置37℃消化10 min后，按上述方法收集上清并终止消化后4℃放置，重复此步骤2-3次，直至组织被消化；

4、用200目不锈钢筛网过滤细胞消化液，1200r/min 离心10min

，弃去上清，沉淀细胞用含有10％ FBS DMEM/F12培养基混悬
，接种于25cm2培养瓶
，放置于37℃ ，5％CO2 培养箱中培养

；

5
、差速贴壁1h后

，吸出培养基，按实验需要接种于6孔板中继续培养；二、免疫荧光鉴定
：

1、待心房肌细胞生长至80%融合时，弃去培养基，用温育的PBS冲洗细胞2次，每次10min
，然后用4%多聚甲醛在室温条件下固定细胞15min；

2、PBS冲洗细胞2次，每次10min
，然后在4℃条件下
，用0.1％Triton X-100透膜15min
；

3
、PBS冲洗细胞2次，每次10min，然后在室温条件下，用4% BSA封闭细胞30min
；

4
、按1: 100的比例稀释α-actin一抗
，然后将其放在4℃冰箱中孵育细胞过夜；

5、PBS冲洗细胞3次，每次10min，按1：150的比例稀释抗α-actin的二抗， 37℃条件下放置1h
；

6
、用PBS冲洗3次，每次10min，在倒置荧光显微镜下观察图像并拍照
。

注意事项：

1. 收到细胞后首先观察细胞瓶是否完好，培养液是否有漏液、浑浊等现象，若有上述现象发生请及时和老哥俱乐部联系。

2. 仔细阅读细胞说明书，了解细胞相关信息

，如细胞形态、所用培养基、血清比例、所需细胞因子等
，确保细胞培养条件一致，若由于培养条件不一致而导致细胞出现问题
，责任由客户自行承担
。

3. 用75%酒精擦拭细胞瓶表面
，显微镜下观察细胞状态。因运输问题，部分细胞由于温度变化及剧烈碰亡破碎形成碎片，是正常现象。观察好细胞状态后，75%酒精消毒瓶壁将T25瓶置于37℃培养箱放置4-6h
。

4. 贴壁细胞可以消化，悬浮细胞直接混匀收集细胞，900 rpm-1000 rpm离心3 min
，弃上清。加5 mL PBS重悬细胞，再900 rpm-1000 rpm离心3 min

，
，用新鲜的*培养基重悬细胞，并接种到新的培养瓶或培养皿中，置于培养箱中进行培养。

5. 请客户用相同条件的培养基用于细胞培养
。

6. 建议客户收到细胞后前3天各拍几张细胞照片
，记录细胞状态
，便于和我司技术部沟通交流。由于运输的原因
，个别敏感细胞会出现不稳定的情况，请及时和老哥俱乐部联系
，告知细胞的具体情况
，以便老哥俱乐部的技术人员跟踪回访直至问题解决。

7. 该细胞仅供科研使用。

8. 备注
：运输用的培养基(灌液培养基)不能再用来培养细胞
，请换用按照说明书细胞培养条件新配制的*培养基来培养细胞
。收到细胞后次传代建议1
：2传代 。

9.注意
： 1:2传代就是1个T25瓶传2个T25瓶或者2个6cm皿。不是1个T25瓶传2个10cm皿。

公司正在出售的产品：

小鼠B6(VB6)ELISA 试剂盒

Rat bone morphogenetic protein 6 (BMP-6) ELISA Kit 大鼠骨形成蛋白6(BMP-6)检测试剂盒

HumanCCAAT/enhancerbindingproteinbeta,C/ELISAKit 人CCAAT增强子结合蛋白β(C/EBPβ)检测试剂盒 进口分装

ChickenLipopolysaccharides,LPS检测试剂盒鸡脂多糖/内毒素(LPS)检测试剂盒

载玻片细胞MAPK蛋白表达荧光显微镜检测试剂盒10/20次

MouseGasoiestinalcancerMarker-CA199ELISAKit小鼠胃肠癌标志物CA199检测试剂盒

EPOR重组人 EPOR / Erythropoietin Receptor 蛋白  Protein

软骨寡聚基质蛋白(COMP)重组蛋白 Recombinant Cartilage Oligomeric Matrix Protein (COMP)

PRNP重组人 PRNP / Prion 蛋白  Protein

AACS Protein Human 重组人 AACS / Acetoacetyl-CoA Synthetase 蛋白 (His 标签)

HA Protein Influenza B 重组乙型流感 (B/Florida/4/2006) 血凝素HA2 (Hemagglutinin) 蛋白

软骨寡聚基质蛋白(COMP)重组蛋白 Recombinant Cartilage Oligomeric Matrix Protein (COMP)

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EPOR重组人 EPOR / Erythropoietin Receptor 蛋白  Protein

HA Protein Influenza B 重组乙型流感 (B/Florida/4/2006) 血凝素HA2 (Hemagglutinin) 蛋白

PRNP重组人 PRNP / Prion 蛋白  Protein

鱼免疫球蛋白M(IgM)检测试剂盒

Human collagen aoaibody (CLA) ELISA Kit 人抗胶原蛋白抗体(CLA)检测试剂盒

PorcineAngiopoietin2,ANG-2ELISAKit 猪血管生成素2(ANG-2)检测试剂盒 进口分装

CLIAKitforADRA1A(Mouseadrenergicalpha-1Areceptor)ELISAKit小鼠能a1A受体

血液乙醇脱氢酶IV活性比色法定量检测试剂盒20次

MouseSolubleClusterofdiffereiation30ligand,sCD30LELISAKit小鼠可溶性CD30配体(sCD30L)检测试剂盒

人肺微血管周细胞鱼类释放激素   ELISA. 

鱼类状腺原酸(T3)ELISAKit   ELISA. 

鱼类(Coisol)ELISAKit   ELISA. 

鱼类超敏C反应蛋白(hs-CRP)ELISAKit   ELISA.