老哥俱乐部

细胞简介：

附睾是一个多数曲折、细小的管子构成的器官，一面连接着输精管
，一面连接着睾丸的曲细精管。当精子离开睾丸时


，就跑到附睾里，继续生长成熟。附睾管除贮存精子外还能分泌附睾液，其中含有某些
、酶和特异的营养物质，它们有助于精子的成熟
。附睾管由黏膜
、肌层和外膜组成

。其中
，肌层主要是由平滑肌细胞构成
。

细胞特性：

1）组织来源于人的正常附睾组织。

2)细胞鉴定：α-SMA荧光染色为阳性。

3)经鉴定细胞纯度高于90%。

4)不含有 HIV-1、 HBV、HCV、支原体

、、酵母和。

5)细胞生长方式
：长梭形，不规则细胞

，贴壁培养。

推荐培养基
：

老哥俱乐部推荐使用 Delf原代平滑肌细胞培养体系 作为体外培养的培养基

。

实验报告
：

一
、分离与培养：

1、无菌条件下
，取出1-3d 龄SD大鼠心房组织，然后用PBS将此组织块清洗2次，将组织剪成1mm3左右大小；

2
、往组织块中加入4 mL酶消化液（0.1% 和0.1% I型胶原酶），混悬10s，置37℃条件下消化10min，之后用滴管吹打制成单细胞悬液，自然沉淀并收集上清，用含10% FBS培养基终止消化后4℃放置；

3、剩下的组织再加入3～4mL酶消化液，混悬10s
，置37℃消化10 min后
，按上述方法收集上清并终止消化后4℃放置，重复此步骤2-3次
，直至组织被消化
；

4
、用200目不锈钢筛网过滤细胞消化液，1200r/min 离心10min，弃去上清
，沉淀细胞用含有10％ FBS DMEM/F12培养基混悬
，接种于25cm2培养瓶
，放置于37℃ ，5％CO2 培养箱中培养；

5、差速贴壁1h后，吸出培养基，按实验需要接种于6孔板中继续培养；二、免疫荧光鉴定
：

1
、待心房肌细胞生长至80%融合时，弃去培养基，用温育的PBS冲洗细胞2次
，每次10min，然后用4%多聚甲醛在室温条件下固定细胞15min
；

2
、PBS冲洗细胞2次，每次10min，然后在4℃条件下
，用0.1％Triton X-100透膜15min；

3、PBS冲洗细胞2次，每次10min
，然后在室温条件下，用4% BSA封闭细胞30min；

4
、按1: 100的比例稀释α-actin一抗，然后将其放在4℃冰箱中孵育细胞过夜；

5
、PBS冲洗细胞3次，每次10min，按1：150的比例稀释抗α-actin的二抗， 37℃条件下放置1h
；

6、用PBS冲洗3次，每次10min，在倒置荧光显微镜下观察图像并拍照。

注意事项
：

1. 收到细胞后首先观察细胞瓶是否完好，培养液是否有漏液

、浑浊等现象，若有上述现象发生请及时和老哥俱乐部联系。

2. 仔细阅读细胞说明书，了解细胞相关信息，如细胞形态、所用培养基、血清比例
、所需细胞因子等，确保细胞培养条件一致，若由于培养条件不一致而导致细胞出现问题

，责任由客户自行承担。

3. 用75%酒精擦拭细胞瓶表面
，显微镜下观察细胞状态。因运输问题，部分细胞由于温度变化及剧烈碰亡破碎形成碎片，是正常现象。观察好细胞状态后
，75%酒精消毒瓶壁将T25瓶置于37℃培养箱放置4-6h
。

4. 贴壁细胞可以消化

，悬浮细胞直接混匀收集细胞，900 rpm-1000 rpm离心3 min
，弃上清。加5 mL PBS重悬细胞，再900 rpm-1000 rpm离心3 min
，，用新鲜的*培养基重悬细胞，并接种到新的培养瓶或培养皿中，置于培养箱中进行培养。

5. 请客户用相同条件的培养基用于细胞培养。

6. 建议客户收到细胞后前3天各拍几张细胞照片
，记录细胞状态，便于和我司技术部沟通交流。由于运输的原因，个别敏感细胞会出现不稳定的情况，请及时和老哥俱乐部联系，告知细胞的具体情况，以便老哥俱乐部的技术人员跟踪回访直至问题解决。

7. 该细胞仅供科研使用
。

8. 备注：运输用的培养基(灌液培养基)不能再用来培养细胞，请换用按照说明书细胞培养条件新配制的*培养基来培养细胞

。收到细胞后次传代建议1：2传代 。

9.注意： 1:2传代就是1个T25瓶传2个T25瓶或者2个6cm皿。不是1个T25瓶传2个10cm皿。

公司正在出售的产品
：

大鼠谷半胱连接酶(GCLM)elisa检测试剂盒

组蛋白H3-K18（mono）甲基化检测试剂盒

小鼠甘油三酯(TG)elisa检测试剂盒

鸡甘油醛-3-磷酸脱氢酶(GAPDH)elisa分析检测试剂盒

体液总脂蛋白（Total L-Cholesterol）酶连续循环比色法定量检测试剂盒

SEL1L抗体  Anti-SEL1L

环指蛋白166抗体  Anti-RNF166

间变性瘤激酶核相互作用伴侣蛋白抗体  Anti-NIPA

糖类应答元件结合蛋白ChREBP抗体  Anti-WBSCR14/ChREBP

钠钾ATP酶通道蛋白抗体 ATPase Na+/ K+ beta 2

内皮细胞纤溶酶原激活抑制蛋白1抗体 PAI1

FITC标记人TCR α/β单克隆抗体 human TCR α/β/FITC

FUT4单克隆抗体 FUT4

亚硫酸盐氧化酶抗体 Sulfite oxidase

胰岛素样生长因子ⅡmRNA结合蛋白2抗体 IGF2BP2

电压门控性钾通道Kv2.2抗体 Kv2.2

多聚腺苷酸结合蛋白4抗体 PABPC4

通用转录因子2H亚基2C抗体 GTF2H2C

突触融合蛋白结合蛋白5抗体 Tomosyn/STXBP5

RecQ解旋酶样蛋白5抗体 RECQL5

S100钙结合蛋白A11抗体 S100A11

5-羟色胺受体3A抗体 5HT3A Receptor

9号染色体开放阅读框173抗体 C9orf173

甲基化CpG结合蛋白MBD6抗体 MBD6

腈水解酶1抗体 NIT1

顶体形态豌豆凝集素荧光标记（PSA-FITC）染色试剂盒

大鼠CDCP1 elisa生化检测试剂盒

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人高密度脂蛋白3(HDL3)elisa生化检测试剂盒

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