老哥俱乐部

细胞简介：

肝脏是身体内以代谢功能为主的一个器官，并在身体里面起着去氧化
、储存肝糖
、分泌性蛋白质的合成等作用
。肝脏是尿素合成的主要器官，又是新陈代谢的重要器官
。肝脏对来自体内和体外的许多非营养性物质如各种、毒物以及体内某些代谢产物，具有生物转化作用。通过新陈代谢将它们分解或以原形排出体外
。在肝中及外围有部分结缔组织
，这些结缔组织是由成纤维细胞组成。

细胞特性
：

1）细胞来源于人正常肝脏组织。

2)细胞鉴定：Vimentin荧光染色为阳性
。

3)经鉴定细胞纯度高于90%
。

4)不含有 HIV-1、 HBV、HCV、支原体、、酵母和。

5)细胞生长方式：长梭状，不规则细胞
，贴壁培养。

推荐培养基

：

老哥俱乐部推荐使用 Delf原代成纤维细胞培养体系 作为体外培养的培养基。

实验报告：

一、分离与培养：

1、无菌条件下，取出1-3d 龄SD大鼠心房组织
，然后用PBS将此组织块清洗2次
，将组织剪成1mm3左右大小；

2、往组织块中加入4 mL酶消化液（0.1% 和0.1% I型胶原酶），混悬10s，置37℃条件下消化10min
，之后用滴管吹打制成单细胞悬液，自然沉淀并收集上清
，用含10% FBS培养基终止消化后4℃放置；

3
、剩下的组织再加入3～4mL酶消化液，混悬10s
，置37℃消化10 min后，按上述方法收集上清并终止消化后4℃放置，重复此步骤2-3次
，直至组织被消化；

4、用200目不锈钢筛网过滤细胞消化液
，1200r/min 离心10min，弃去上清，沉淀细胞用含有10％ FBS DMEM/F12培养基混悬，接种于25cm2培养瓶
，放置于37℃ ，5％CO2 培养箱中培养
；

5、差速贴壁1h后，吸出培养基
，按实验需要接种于6孔板中继续培养；二、免疫荧光鉴定：

1、待心房肌细胞生长至80%融合时，弃去培养基，用温育的PBS冲洗细胞2次，每次10min

，然后用4%多聚甲醛在室温条件下固定细胞15min
；

2、PBS冲洗细胞2次
，每次10min
，然后在4℃条件下，用0.1％Triton X-100透膜15min；

3
、PBS冲洗细胞2次，每次10min，然后在室温条件下

，用4% BSA封闭细胞30min；

4、按1: 100的比例稀释α-actin一抗
，然后将其放在4℃冰箱中孵育细胞过夜
；

5、PBS冲洗细胞3次
，每次10min
，按1：150的比例稀释抗α-actin的二抗
， 37℃条件下放置1h
；

6、用PBS冲洗3次，每次10min，在倒置荧光显微镜下观察图像并拍照。

注意事项
：

1. 收到细胞后首先观察细胞瓶是否完好，培养液是否有漏液、浑浊等现象
，若有上述现象发生请及时和老哥俱乐部联系
。

2. 仔细阅读细胞说明书，了解细胞相关信息，如细胞形态
、所用培养基
、血清比例
、所需细胞因子等，确保细胞培养条件一致，若由于培养条件不一致而导致细胞出现问题
，责任由客户自行承担。

3. 用75%酒精擦拭细胞瓶表面
，显微镜下观察细胞状态
。因运输问题
，部分细胞由于温度变化及剧烈碰亡破碎形成碎片
，是正常现象
。观察好细胞状态后，75%酒精消毒瓶壁将T25瓶置于37℃培养箱放置4-6h
。

4. 贴壁细胞可以消化，悬浮细胞直接混匀收集细胞，900 rpm-1000 rpm离心3 min，弃上清。加5 mL PBS重悬细胞，再900 rpm-1000 rpm离心3 min，，用新鲜的*培养基重悬细胞，并接种到新的培养瓶或培养皿中
，置于培养箱中进行培养
。

5. 请客户用相同条件的培养基用于细胞培养。

6. 建议客户收到细胞后前3天各拍几张细胞照片，记录细胞状态，便于和我司技术部沟通交流

。由于运输的原因
，个别敏感细胞会出现不稳定的情况，请及时和老哥俱乐部联系
，告知细胞的具体情况
，以便老哥俱乐部的技术人员跟踪回访直至问题解决。

7. 该细胞仅供科研使用。

8. 备注：运输用的培养基(灌液培养基)不能再用来培养细胞
，请换用按照说明书细胞培养条件新配制的*培养基来培养细胞
。收到细胞后次传代建议1
：2传代 
。

9.注意
： 1:2传代就是1个T25瓶传2个T25瓶或者2个6cm皿。不是1个T25瓶传2个10cm皿

。

公司正在出售的产品：

大鼠Ⅰ型前胶原羧基端肽(PⅠCP)检测试剂盒 
，英文名： PⅠCP ELISA Kit

Mouse erythropoietin receptor (EPOR) ELISA Kit 小鼠红细胞生成素受体(EPOR)检测试剂盒

Mousehydroxyproline,HypELISAKit 小鼠羟脯(Hyp)检测试剂盒 进口分装

CLIAKitforHumanSolubleprotein-100B,S-100BELISAKit人S100B蛋白

通用型乙酰酯酶活性比色法定量检测试剂盒50次

ELISAKitPGE1大鼠前列腺素E1

FKBP14重组人 FKBP14 蛋白 (His 标签) Protein

streptomycin/OVA 链偶联血蓝蛋白 5mgstreptomycin/OVA 链偶联血蓝蛋白

IL13RA1重组人 IL13RA1 蛋白 (His 标签) Protein

FGF16 Protein Human 重组人 / 食蟹猴 FGF16 / FGF-16 蛋白

HAVCR2 Protein Human 重组人 TIM-3 / HAVCR2 蛋白 (His & Fc 标签)

streptomycin/OVA 链偶联血蓝蛋白 5mgstreptomycin/OVA 链偶联血蓝蛋白

FGF16 Protein Human 重组人 / 食蟹猴 FGF16 / FGF-16 蛋白

FKBP14重组人 FKBP14 蛋白 (His 标签) Protein

HAVCR2 Protein Human 重组人 TIM-3 / HAVCR2 蛋白 (His & Fc 标签)

IL13RA1重组人 IL13RA1 蛋白 (His 标签) Protein

小鼠低氧诱导因子1α(HIF-1α)ELISA 试剂盒

Rat brain naiuretic peptide / brain naiuretic peptide (BNP) ELISA Kit 大鼠脑素/脑尿肽(BNP)检测试剂盒

HumanpapillomavirusIgM,HPV-IgMELISAKit 人状瘤病毒抗体IgM(HPV-IgM)检测试剂盒 进口分装

Humanasialoglycoproteieceptor,AGSPR检测试剂盒人去唾液酸糖蛋白受体(AGSPR)检测试剂盒

植物源性食品苦杏仁(apricotkernels)试剂盒20次

Humahymopein,TP-5ELISAKit人五肽(TP-5)检测试剂盒

人肝成纤维细胞无内毒素质粒大量提取试剂盒   5T

Endo-freePlasmidMaxiKit   10T

无内毒素质粒小量提取试剂盒   50T

Endo-freePlasmidMiniKit   100T