老哥俱乐部

细胞简介：

睾丸表面有一层坚厚的纤维膜，称为白膜
。具有保护睾丸的作用。沿睾丸后缘白膜增厚
，凸入睾丸内形成睾丸纵隔。从纵隔发出许多结缔组织小隔，将睾丸实质分成许多睾丸小叶。其中结缔组织主要是由成纤维细胞构成

。

细胞特性：

1）组织来源于人的正常睾丸组织

。

2)细胞鉴定：波形蛋白（Vimentin）荧光染色为阳性

。

3)经鉴定细胞纯度高于90%。

4)不含有 HIV-1、 HBV、HCV、支原体、、酵母和
。

5)细胞生长方式：长梭形，不规则细胞，贴壁培养
。

推荐培养基：

老哥俱乐部推荐使用 Delf原代成纤维细胞培养体系 作为体外培养的培养基。

实验报告

：

一、分离与培养：

1、无菌条件下，取出1-3d 龄SD大鼠心房组织，然后用PBS将此组织块清洗2次，将组织剪成1mm3左右大小；

2
、往组织块中加入4 mL酶消化液（0.1% 和0.1% I型胶原酶），混悬10s
，置37℃条件下消化10min，之后用滴管吹打制成单细胞悬液，自然沉淀并收集上清
，用含10% FBS培养基终止消化后4℃放置；

3、剩下的组织再加入3～4mL酶消化液
，混悬10s
，置37℃消化10 min后
，按上述方法收集上清并终止消化后4℃放置，重复此步骤2-3次，直至组织被消化
；

4、用200目不锈钢筛网过滤细胞消化液
，1200r/min 离心10min
，弃去上清
，沉淀细胞用含有10％ FBS DMEM/F12培养基混悬，接种于25cm2培养瓶，放置于37℃ 
，5％CO2 培养箱中培养；

5
、差速贴壁1h后，吸出培养基，按实验需要接种于6孔板中继续培养；二、免疫荧光鉴定：

1
、待心房肌细胞生长至80%融合时，弃去培养基，用温育的PBS冲洗细胞2次，每次10min，然后用4%多聚甲醛在室温条件下固定细胞15min；

2

、PBS冲洗细胞2次，每次10min
，然后在4℃条件下，用0.1％Triton X-100透膜15min；

3、PBS冲洗细胞2次
，每次10min
，然后在室温条件下，用4% BSA封闭细胞30min；

4、按1: 100的比例稀释α-actin一抗，然后将其放在4℃冰箱中孵育细胞过夜；

5
、PBS冲洗细胞3次，每次10min，按1：150的比例稀释抗α-actin的二抗
， 37℃条件下放置1h；

6、用PBS冲洗3次，每次10min，在倒置荧光显微镜下观察图像并拍照。

注意事项：

1. 收到细胞后首先观察细胞瓶是否完好
，培养液是否有漏液、浑浊等现象，若有上述现象发生请及时和老哥俱乐部联系。

2. 仔细阅读细胞说明书

，了解细胞相关信息
，如细胞形态、所用培养基、血清比例
、所需细胞因子等，确保细胞培养条件一致，若由于培养条件不一致而导致细胞出现问题，责任由客户自行承担。

3. 用75%酒精擦拭细胞瓶表面，显微镜下观察细胞状态
。因运输问题，部分细胞由于温度变化及剧烈碰亡破碎形成碎片
，是正常现象。观察好细胞状态后，75%酒精消毒瓶壁将T25瓶置于37℃培养箱放置4-6h。

4. 贴壁细胞可以消化，悬浮细胞直接混匀收集细胞，900 rpm-1000 rpm离心3 min
，弃上清。加5 mL PBS重悬细胞，再900 rpm-1000 rpm离心3 min，，用新鲜的*培养基重悬细胞，并接种到新的培养瓶或培养皿中，置于培养箱中进行培养。

5. 请客户用相同条件的培养基用于细胞培养

。

6. 建议客户收到细胞后前3天各拍几张细胞照片，记录细胞状态，便于和我司技术部沟通交流
。由于运输的原因
，个别敏感细胞会出现不稳定的情况
，请及时和老哥俱乐部联系
，告知细胞的具体情况，以便老哥俱乐部的技术人员跟踪回访直至问题解决。

7. 该细胞仅供科研使用。

8. 备注
：运输用的培养基(灌液培养基)不能再用来培养细胞，请换用按照说明书细胞培养条件新配制的*培养基来培养细胞
。收到细胞后次传代建议1
：2传代 
。

9.注意
： 1:2传代就是1个T25瓶传2个T25瓶或者2个6cm皿
。不是1个T25瓶传2个10cm皿
。

公司正在出售的产品：

组织蛋白磷酸酶2A （PP2A）活性酶连续循环比色法定量检测试剂盒

大鼠αACTIN基因甲基化检测试剂盒

绵羊花生四烯酸(AA)elisa分析检测试剂盒

小鼠己糖激酶(HK)elisa检测试剂盒

突触结合蛋白4抗体  Anti-Synaptotagmin-4

环指蛋白190抗体  Anti-RNF190

痛觉调节肽NPFF抗体  Anti-NPFF/FMRFamide

P53应答基因蛋白5抗体  Anti-WFDC5

膜相关环指蛋白7抗体 7-Mar

脑特定蛋白Brn3B抗体 BRN3B

FITC标记人CD279 (PD-1)单克隆抗体 human CD279 (PD-1)/FITC

FLJ39378蛋白抗体 FLJ39378

血小板p47蛋白抗体 p47/Pleckstrin

液泡蛋白分选蛋白33B抗体 VPS33B

低密度脂蛋白受体结构域蛋白2抗体 LDLRAD2

端粒调控因子抗体 Tankyrase

糖皮质调节元件结合蛋白2抗体 GMEB2

头发角蛋白32抗体 KRT32

RAS癌基因相关蛋白RAB7重组兔单克隆抗体 RAB7A

RNA聚合酶II相关因子PAF1抗体 PAF1

40S核糖体蛋白S9抗体 RPS9

7号染色体开放阅读框63抗体 C7orf63

碱性富含脯的泪蛋白抗体 PROL1

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