老哥俱乐部

细胞简介：

巨噬细胞源自单核细胞，属于细胞，有多种功能，属不繁殖细胞群，难以长期培养
。巨噬细胞在吞噬和异物和衰老死亡细胞
、分泌生物活性物质
，调节血细胞生成与参与应答等方面发挥着广泛的生物学作用，是一类在体内发挥重要效应的细胞，为体内的稳态维持和组织防御提供保障。

细胞特性：

1）细胞来源于人的正常骨髓组织。

2)细胞鉴定：CD68或MAC387荧光染色为阳性。

3)经鉴定细胞纯度高于90%。

4)不含有 HIV-1、 HBV、HCV、支原体、、酵母和
。

5)细胞生长方式：圆形

，不规则细胞
，贴壁培养。

推荐培养基
：

老哥俱乐部推荐使用 delf 原代巨噬细胞培养体系 作为体外培养的培养基

。

实验报告

：

一
、分离与培养

：

1、无菌条件下，取出1-3d 龄SD大鼠心房组织，然后用PBS将此组织块清洗2次，将组织剪成1mm3左右大小；

2、往组织块中加入4 mL酶消化液（0.1% 和0.1% I型胶原酶），混悬10s，置37℃条件下消化10min，之后用滴管吹打制成单细胞悬液，自然沉淀并收集上清，用含10% FBS培养基终止消化后4℃放置
；

3、剩下的组织再加入3～4mL酶消化液，混悬10s，置37℃消化10 min后，按上述方法收集上清并终止消化后4℃放置，重复此步骤2-3次，直至组织被消化
；

4、用200目不锈钢筛网过滤细胞消化液，1200r/min 离心10min
，弃去上清
，沉淀细胞用含有10％ FBS DMEM/F12培养基混悬，接种于25cm2培养瓶
，放置于37℃
，5％CO2 培养箱中培养
；

5
、差速贴壁1h后
，吸出培养基，按实验需要接种于6孔板中继续培养；二
、免疫荧光鉴定
：

1、待心房肌细胞生长至80%融合时，弃去培养基

，用温育的PBS冲洗细胞2次
，每次10min，然后用4%多聚甲醛在室温条件下固定细胞15min；

2、PBS冲洗细胞2次，每次10min
，然后在4℃条件下，用0.1％Triton X-100透膜15min；

3、PBS冲洗细胞2次，每次10min，然后在室温条件下，用4% BSA封闭细胞30min
；

4

、按1: 100的比例稀释α-actin一抗，然后将其放在4℃冰箱中孵育细胞过夜
；

5
、PBS冲洗细胞3次
，每次10min
，按1：150的比例稀释抗α-actin的二抗， 37℃条件下放置1h；

6、用PBS冲洗3次
，每次10min
，在倒置荧光显微镜下观察图像并拍照。

注意事项：

1. 收到细胞后首先观察细胞瓶是否完好，培养液是否有漏液、浑浊等现象

，若有上述现象发生请及时和老哥俱乐部联系。

2. 仔细阅读细胞说明书，了解细胞相关信息，如细胞形态
、所用培养基
、血清比例、所需细胞因子等
，确保细胞培养条件一致，若由于培养条件不一致而导致细胞出现问题
，责任由客户自行承担。

3. 用75%酒精擦拭细胞瓶表面，显微镜下观察细胞状态。因运输问题，部分细胞由于温度变化及剧烈碰亡破碎形成碎片
，是正常现象
。观察好细胞状态后，75%酒精消毒瓶壁将T25瓶置于37℃培养箱放置4-6h。

4. 贴壁细胞可以消化，悬浮细胞直接混匀收集细胞
，900 rpm-1000 rpm离心3 min，弃上清

。加5 mL PBS重悬细胞
，再900 rpm-1000 rpm离心3 min

，
，用新鲜的*培养基重悬细胞，并接种到新的培养瓶或培养皿中，置于培养箱中进行培养
。

5. 请客户用相同条件的培养基用于细胞培养。

6. 建议客户收到细胞后前3天各拍几张细胞照片，记录细胞状态，便于和我司技术部沟通交流。由于运输的原因，个别敏感细胞会出现不稳定的情况
，请及时和老哥俱乐部联系，告知细胞的具体情况
，以便老哥俱乐部的技术人员跟踪回访直至问题解决。

7. 该细胞仅供科研使用
。

8. 备注
：运输用的培养基(灌液培养基)不能再用来培养细胞，请换用按照说明书细胞培养条件新配制的*培养基来培养细胞
。收到细胞后次传代建议1
：2传代 。

9.注意
： 1:2传代就是1个T25瓶传2个T25瓶或者2个6cm皿
。不是1个T25瓶传2个10cm皿

。

公司正在出售的产品：

含

，不含丙酮酸钠，不含酚红
，含HEPES 500ml

大鼠脑多巴胺神经营养因子(CDNF)elisa检测试剂盒

猪肠脂肪酸结合蛋白(iFABP)elisa分析检测试剂盒

人甲状旁腺1受体(PTH1R)elisa分析检测试剂盒

通用型支链淀粉比色法定量检测试剂盒

SLFNL1抗体  Anti-SLFNL1

环指蛋白23抗体  Anti-RNF23

核酪蛋白激酶和细胞周期蛋白依赖性激酶底物1抗体  Anti-NUCKS1

WEE1蛋白抗体  Anti-WEE1 protein

膜相关环指蛋白8抗体 8-Mar

脑特异性POU结构域源盒基因3C抗体 POU4F3

FITC标记人CD27单克隆抗体 human CD27/FITC

FLJ40288蛋白抗体 FLJ40288

血小板白细胞C激酶底物2抗体 PLEK2

液泡蛋白分选蛋白35抗体 VPS35

低密度脂蛋白受体结构域蛋白3抗体 LDLRAD3

短粗矮胖19蛋白样1抗体 DPY19L1

糖皮质诱导亮拉链蛋白抗体 GilZ

头发角蛋白KRT33B抗体 KRT33B

Ras蛋白脑组织源类似物RHEB蛋白抗体 RHEB

RNA聚合酶II相关因子PAF49抗体 PAF49

4号染色体开放阅读款 C4orf45

7号染色体开放阅读框64抗体 C7orf64

6抗体 KLK6

间变性瘤激酶核相互作用伴侣蛋白抗体 NIPA

肾素化学发光法定量检测试剂盒

E3泛素蛋白连接酶144B/环指蛋白144B抗体

IBRDC2

桥连整合因子蛋白抗体

人骨髓巨噬细胞BIN1