細胞簡介 ：

骨的微循環係統是骨微環境的重要組成部分 ，是骨內物質交換 ，向骨及骨內其它細胞運送養料和排除廢物的主要場所 。通常 ，微循環血流能滿足骨內各種組織代謝需要 ，使骨內各種細胞功能得以正常進行 。

骨微血管內皮細胞構成了骨內微血管的內襯 ，其不僅僅是血管與周圍組織之間的屏障 ，也與其它器官微血管內皮細胞一樣 ，對局部骨組織代謝具有重要的調控作用 ，參與了許多骨的病理生理過程 ，再骨吸收 、新骨的形成 、血管再生 、營養物質轉運 、骨內代謝產物輸出及維持骨內微環境平衡方麵具有重要作用 。

細胞特性 ：

1）細胞來源於人正常骨組織 。

2）細胞鑒定 ：血管假性血友病因子（vWF）熒光染色為陽性 。

3）經鑒定細胞純度高於90% 。

4）不含有 HIV-1 、 HBV 、HCV 、支原體 、、酵母和 。

5）細胞生長方式 ：上皮樣 ，多角形細胞 ，貼壁培養 。

推薦培養基 ：

老哥俱樂部推薦使用 delf原代 內皮 細胞培養體係 作為該細胞的培養基 。

實驗報告 ：

一 、分離與培養 ：

1 、無菌條件下 ，取出1-3d 齡SD大鼠心房組織 ，然後用PBS將此組織塊清洗2次 ，將組織剪成1mm3左右大小 ；

2、往組織塊中加入4 mL酶消化液（0.1% 和0.1% I型膠原酶） ，混懸10s ，置37℃條件下消化10min ，之後用滴管吹打製成單細胞懸液 ，自然沉澱並收集上清 ，用含10% FBS培養基終止消化後4℃放置 ；

3 、剩下的組織再加入3～4mL酶消化液 ，混懸10s ，置37℃消化10 min後 ，按上述方法收集上清並終止消化後4℃放置 ，重複此步驟2-3次 ，直至組織被消化 ；

4 、用200目不鏽鋼篩網過濾細胞消化液 ，1200r/min 離心10min ，棄去上清 ，沉澱細胞用含有10％ FBS DMEM/F12培養基混懸 ，接種於25cm2培養瓶 ，放置於37℃  ，5％CO2 培養箱中培養 ；

5 、差速貼壁1h後 ，吸出培養基 ，按實驗需要接種於6孔板中繼續培養 ；二 、免疫熒光鑒定 ：

1 、待心房肌細胞生長至80%融合時 ，棄去培養基，用溫育的PBS衝洗細胞2次 ，每次10min ，然後用4%多聚甲醛在室溫條件下固定細胞15min ；

2 、PBS衝洗細胞2次 ，每次10min ，然後在4℃條件下 ，用0.1％Triton X-100透膜15min ；

3 、PBS衝洗細胞2次 ，每次10min ，然後在室溫條件下 ，用4% BSA封閉細胞30min ；

4 、按1: 100的比例稀釋α-actin一抗，然後將其放在4℃冰箱中孵育細胞過夜 ；

5 、PBS衝洗細胞3次 ，每次10min ，按1 ：150的比例稀釋抗α-actin的二抗 ， 37℃條件下放置1h ；

6 、用PBS衝洗3次 ，每次10min ，在倒置熒光顯微鏡下觀察圖像並拍照 。

公司正在出售的產品 ：

大鼠分泌型卷曲相關蛋白4(SFRP4)檢測試劑盒  ，英文名 ： SFRP4 ELISA Kit

Rat betacellulin (BTC) ELISA Kit 大鼠β細胞素(BTC)檢測試劑盒

Ratansforminggrowthfactorα,TGF-αELISAKit 大鼠轉化生長因子α(TGF-α)檢測試劑盒 進口分裝

CLIAKitforDPPIVELISAKit大鼠二肽基肽酶Ⅳ

細胞葡萄糖激酶(glucosekinase)比色法定量檢測試劑盒20次

Rathepaticlipase,HLELISAKit大鼠肝脂酶(HL)檢測試劑盒

IL1A重組人 IL-1 alpha / IL1A / IL1F1 蛋白 Protein

鬆弛肽(RLN)重組蛋白 Recombinant Relaxin (RLN)

NCAM2重組人 NCAM2 / Neural cell adhesion molecule 2 蛋白 (His 標簽) Protein

ACBD6 Protein Human 重組人 ACBD6 蛋白 (His 標簽)

HA Protein H5N1 重組甲型流感 H5N1 (A/Cambodia/R0405050/2007) 血凝素HA1 (Hemagglutinin) 蛋白 (His 標簽)

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植物(ETH)ELISA 試劑盒

Human ai parainfluenza virus IgM aibody (ai-PIV IgM) ELISA Kit 人抗副流感病毒IgM抗體(ai-PIV IgM)檢測試劑盒

PorcineImmunoglobulinG,IgGELISAKit 豬免疫球蛋白G(IgG)檢測試劑盒 進口分裝

CLIAKitforAFUELISAKit大鼠αL岩藻糖苷酶

血液唾液酸(SA)比色法定量檢測試劑盒50次

MouseThyroid-Peroxidase,TPOELISAKit小鼠甲狀腺過氧化物酶(TPO)檢測試劑盒

人骨微血管內皮細胞勻漿製作或抽提   Homogenate production or exaction

（皮膚骨骼肌腸肌肉等難勻特殊樣品）   (the skin and skeletal muscle and other hard uniform special sample)

超氧化物歧化酶（SOD）檢測   Superoxide dismase (SOD) detection

二（MDA）檢測   Malondialdehyde (MDA) detection

注意事項 ：

1. 收到細胞後首先觀察細胞瓶是否完好 ，培養液是否有漏液 、渾濁等現象 ，若有上述現象發生請及時和老哥俱樂部聯係 。

2. 仔細閱讀細胞說明書 ，了解細胞相關信息 ，如細胞形態 、所用培養基 、血清比例 、所需細胞因子等 ，確保細胞培養條件一致，若由於培養條件不一致而導致細胞出現問題 ，責任由客戶自行承擔 。

3. 用75%酒精擦拭細胞瓶表麵 ，顯微鏡下觀察細胞狀態 。因運輸問題 ，部分細胞由於溫度變化及劇烈碰亡破碎形成碎片 ，是正常現象 。觀察好細胞狀態後 ，75%酒精消毒瓶壁將T25瓶置於37℃培養箱放置4-6h 。

4. 貼壁細胞可以消化 ，懸浮細胞直接混勻收集細胞 ，900 rpm-1000 rpm離心3 min ，棄上清 。加5 mL PBS重懸細胞 ，再900 rpm-1000 rpm離心3 min ， ，用新鮮的*培養基重懸細胞 ，並接種到新的培養瓶或培養皿中 ，置於培養箱中進行培養 。

5. 請客戶用相同條件的培養基用於細胞培養 。

6. 建議客戶收到細胞後前3天各拍幾張細胞照片 ，記錄細胞狀態 ，便於和我司技術部溝通交流 。由於運輸的原因 ，個別敏感細胞會出現不穩定的情況 ，請及時和老哥俱樂部聯係 ，告知細胞的具體情況 ，以便老哥俱樂部的技術人員跟蹤回訪直至問題解決 。

7. 該細胞僅供科研使用 。

8. 備注 ：運輸用的培養基(灌液培養基)不能再用來培養細胞 ，請換用按照說明書細胞培養條件新配製的*培養基來培養細胞 。收到細胞後次傳代建議1 ：2傳代  。

9.注意 ： 1:2傳代就是1個T25瓶傳2個T25瓶或者2個6cm皿 。不是1個T25瓶傳2個10cm皿 。