老哥俱乐部

细胞简介：

横纹肌
：骨骼肌和心肌的肌纤维都有明暗相间的横纹
，故称横纹肌，又称骨骼肌 (skeletal muscle)
，由多核而成束状排列的横纹肌纤维组成

，它是构成每块骨骼肌的主要成分
。因主要附着于骨骼上
，而在显微镜下观察又呈现明暗相间的横纹而得名
。除受神经支配外，还受意识控制，完体的各种随意运动，故又称随意肌。

细胞特性：

1）细胞来源于人的正常肌肉组织
。

2)细胞鉴定：肌动蛋白（α-actin）荧光染色为阳性
。

3)经鉴定细胞纯度高于90%
。

4)不含有 HIV-1
、 HBV、HCV、支原体、
、酵母和。

5)细胞生长方式：长梭状细胞，贴壁培养。

推荐培养基
：

老哥俱乐部推荐使用 DELF原代骨骼肌细胞培养体系 作为体外培养的培养基。

实验报告：

一
、分离与培养
：

1、无菌条件下
，取出1-3d 龄SD大鼠心房组织
，然后用PBS将此组织块清洗2次，将组织剪成1mm3左右大小；

2、往组织块中加入4 mL酶消化液（0.1% 和0.1% I型胶原酶），混悬10s，置37℃条件下消化10min

，之后用滴管吹打制成单细胞悬液
，自然沉淀并收集上清，用含10% FBS培养基终止消化后4℃放置
；

3

、剩下的组织再加入3～4mL酶消化液，混悬10s，置37℃消化10 min后，按上述方法收集上清并终止消化后4℃放置
，重复此步骤2-3次，直至组织被消化；

4
、用200目不锈钢筛网过滤细胞消化液，1200r/min 离心10min，弃去上清
，沉淀细胞用含有10％ FBS DMEM/F12培养基混悬，接种于25cm2培养瓶
，放置于37℃
，5％CO2 培养箱中培养；

5、差速贴壁1h后，吸出培养基，按实验需要接种于6孔板中继续培养；二

、免疫荧光鉴定：

1

、待心房肌细胞生长至80%融合时
，弃去培养基，用温育的PBS冲洗细胞2次
，每次10min
，然后用4%多聚甲醛在室温条件下固定细胞15min；

2、PBS冲洗细胞2次，每次10min
，然后在4℃条件下，用0.1％Triton X-100透膜15min
；

3、PBS冲洗细胞2次
，每次10min
，然后在室温条件下，用4% BSA封闭细胞30min；

4
、按1: 100的比例稀释α-actin一抗，然后将其放在4℃冰箱中孵育细胞过夜；

5
、PBS冲洗细胞3次
，每次10min，按1：150的比例稀释抗α-actin的二抗
， 37℃条件下放置1h
；

6、用PBS冲洗3次，每次10min
，在倒置荧光显微镜下观察图像并拍照。

公司正在出售的产品：

大鼠分泌型卷曲相关蛋白5(SFRP5)检测试剂盒 
，英文名： SFRP5 ELISA Kit

Rat beta hydroxybyric acid (beta OHB) ELISA Kit 大鼠β羟(βOHB)检测试剂盒

RatVascuolarcelladhesionmolecule1,VCAM-1ELISAkit 大鼠血管内皮细胞粘附分子1(VCAM-1/CD106)检测试剂盒 进口分装

CLIAKitforDPYSL2(humandihydropyrimidinase-like2)ELISAKit人二氢酶样2

细胞葡萄糖-6-0酸脱氢酶(G6PD)活性酶动力比色法定量检测试剂盒50次

Rathepatocytegrowthfactor,HGFELISAKit大鼠肝细胞生长因子(HGF)检测试剂盒

BMPR1A重组小鼠 ALK-3 / BMPR1A 蛋白 (His & Fc 标签) Protein

ChRM1(muscarinic acetylcholine receptor 0.5mgChRM1(muscarinic acetylcholine receptor) 毒蕈碱型乙酰受体M1抗原

ATF2重组人 ATF2 蛋白 (His & GST 标签) Protein

ACLY Protein Human 重组人 ACLY / acly / ATP citrate lyase 蛋白 (His 标签)

PLAUR Protein Mouse 重组小鼠 PLAUR / CD87 / uPAR 蛋白 (His & Fc 标签)

ChRM1(muscarinic acetylcholine receptor 0.5mgChRM1(muscarinic acetylcholine receptor) 毒蕈碱型乙酰受体M1抗原

ACLY Protein Human 重组人 ACLY / acly / ATP citrate lyase 蛋白 (His 标签)

BMPR1A重组小鼠 ALK-3 / BMPR1A 蛋白 (His & Fc 标签) Protein

PLAUR Protein Mouse 重组小鼠 PLAUR / CD87 / uPAR 蛋白 (His & Fc 标签)

ATF2重组人 ATF2 蛋白 (His & GST 标签) Protein

植物草酸氧化酶(OxO)ELISA 试剂盒

Human ai actin aibody (AAA) ELISA Kit 人抗肌动蛋白抗体(AAA)检测试剂盒

swinemajorhistocompatibilitycomplexⅢ,MHCⅢ/SLAⅢELISAKit 猪主要组织相容性复合体Ⅲ类(MHCⅢ/SLAⅢ)检测试剂盒 进口分装

ADVIgMIII腺病毒IgMⅢ型(间接法二步法)

血液合成酶总活性比色法定量检测试剂盒20次

Mousesolubleplateletendothelialcelladhesionmolecule1,sPECAM-1ELISAKit小鼠可溶性血小板内皮细胞粘附分子1(sPECAM-1/sCD31)检测试剂盒

人横纹肌细胞载脂蛋白D   英文名称：   Human Apolipoprotein D   规格：      英文缩写
：   ApoD

载脂蛋白M   英文名称：   Human Apolipoprotein M   规格
：      英文缩写：   ApoM

Human Aquaporin 1   英文名称：   Human Aquaporin 1   规格：      英文缩写：   AQP-1

细胞外基质蛋白   英文名称：   Human Asporin1   规格：      英文缩写：   ASPN1

注意事项：

1. 收到细胞后首先观察细胞瓶是否完好，培养液是否有漏液
、浑浊等现象
，若有上述现象发生请及时和老哥俱乐部联系。

2. 仔细阅读细胞说明书，了解细胞相关信息，如细胞形态、所用培养基、血清比例、所需细胞因子等
，确保细胞培养条件一致
，若由于培养条件不一致而导致细胞出现问题

，责任由客户自行承担。

3. 用75%酒精擦拭细胞瓶表面，显微镜下观察细胞状态。因运输问题
，部分细胞由于温度变化及剧烈碰亡破碎形成碎片，是正常现象
。观察好细胞状态后，75%酒精消毒瓶壁将T25瓶置于37℃培养箱放置4-6h
。

4. 贴壁细胞可以消化，悬浮细胞直接混匀收集细胞
，900 rpm-1000 rpm离心3 min
，弃上清
。加5 mL PBS重悬细胞
，再900 rpm-1000 rpm离心3 min，，用新鲜的*培养基重悬细胞，并接种到新的培养瓶或培养皿中，置于培养箱中进行培养

。

5. 请客户用相同条件的培养基用于细胞培养。

6. 建议客户收到细胞后前3天各拍几张细胞照片，记录细胞状态
，便于和我司技术部沟通交流。由于运输的原因
，个别敏感细胞会出现不稳定的情况
，请及时和老哥俱乐部联系，告知细胞的具体情况，以便老哥俱乐部的技术人员跟踪回访直至问题解决
。

7. 该细胞仅供科研使用。

8. 备注：运输用的培养基(灌液培养基)不能再用来培养细胞
，请换用按照说明书细胞培养条件新配制的*培养基来培养细胞。收到细胞后次传代建议1：2传代 。

9.注意： 1:2传代就是1个T25瓶传2个T25瓶或者2个6cm皿。不是1个T25瓶传2个10cm皿。