老哥俱乐部

细胞简介：

喉为气管前段的膨大部分，既是呼吸的通道，也是发音器官
。喉由软骨、韧带
、肌肉与粘膜构成，其中粘膜上皮是粘膜层的重要组成部分
。

细胞特性：

1）细胞来源于术后的喉黏膜组织。

2)细胞鉴定：广谱角蛋白（PCK）荧光染色为阳性
。

3)经鉴定细胞纯度高于90%

。

4)不含有 HIV-1、 HBV、HCV
、支原体
、、酵母和
。

5)细胞生长方式：上皮样，多角形细胞，贴壁培养
。

推荐培养基
：

老哥俱乐部推荐使用 delf 原代上皮细胞培养体系 作为体外培养的培养基。

实验报告
：

一
、分离与培养：

1、无菌条件下，取出1-3d 龄SD大鼠心房组织
，然后用PBS将此组织块清洗2次，将组织剪成1mm3左右大小；

2、往组织块中加入4 mL酶消化液（0.1% 和0.1% I型胶原酶），混悬10s
，置37℃条件下消化10min，之后用滴管吹打制成单细胞悬液，自然沉淀并收集上清，用含10% FBS培养基终止消化后4℃放置

；

3、剩下的组织再加入3～4mL酶消化液，混悬10s

，置37℃消化10 min后，按上述方法收集上清并终止消化后4℃放置，重复此步骤2-3次，直至组织被消化；

4
、用200目不锈钢筛网过滤细胞消化液，1200r/min 离心10min，弃去上清
，沉淀细胞用含有10％ FBS DMEM/F12培养基混悬
，接种于25cm2培养瓶
，放置于37℃ 
，5％CO2 培养箱中培养
；

5、差速贴壁1h后，吸出培养基
，按实验需要接种于6孔板中继续培养
；二、免疫荧光鉴定：

1、待心房肌细胞生长至80%融合时，弃去培养基
，用温育的PBS冲洗细胞2次，每次10min，然后用4%多聚甲醛在室温条件下固定细胞15min；

2、PBS冲洗细胞2次，每次10min，然后在4℃条件下

，用0.1％Triton X-100透膜15min
；

3
、PBS冲洗细胞2次，每次10min，然后在室温条件下，用4% BSA封闭细胞30min；

4、按1: 100的比例稀释α-actin一抗
，然后将其放在4℃冰箱中孵育细胞过夜；

5
、PBS冲洗细胞3次
，每次10min
，按1：150的比例稀释抗α-actin的二抗
， 37℃条件下放置1h；

6、用PBS冲洗3次，每次10min，在倒置荧光显微镜下观察图像并拍照。

公司正在出售的产品：

大鼠封闭蛋白3(CLDN3)检测试剂盒
，英文名
： CLDN3 ELISA Kit

Rat beta endorphin (beta -EP) ELISA Kit 大鼠β内啡肽(β-EP)检测试剂盒

Ratsolublereceptoractivatorofnuclearfactor-kBligand,sRANKLELISAKit 大鼠可溶性核因子κB受体活化因子配基(sRANKL)检测试剂盒 进口分装

CLIAKitforDR-70TM(HumaumormarkerDR-70forlungcancer)ELISAKit人肺癌标志物DR-70

细胞皮尔斯(PERLS-DAB)非血红素铁(三价)强化染色试剂盒

RatHighdensitylipoprotein,HDLELISAKit大鼠高密度脂蛋白(HDL)检测试剂盒

ASAH2重组小鼠 ASAH2 蛋白 (His 标签) Protein

Cholesterol 胆 100gCholesterol 胆

PAK3重组人 PAK3 蛋白 (His 标签) Protein

ACO1 Protein Human 重组人 ACO1 / irp1 蛋白 (His 标签)

KIRREL Protein Mouse 重组小鼠 KIRREL1 / NEPH1 蛋白 (His 标签)

Cholesterol 胆 100gCholesterol 胆

ACO1 Protein Human 重组人 ACO1 / irp1 蛋白 (His 标签)

ASAH2重组小鼠 ASAH2 蛋白 (His 标签) Protein

KIRREL Protein Mouse 重组小鼠 KIRREL1 / NEPH1 蛋白 (His 标签)

PAK3重组人 PAK3 蛋白 (His 标签) Protein

植物赤(GA)ELISA 试剂盒

Human ai cyclic ciullinated peptide aibody (CCP) ELISA Kit 人抗环胍肽抗体(CCP)检测试剂盒

PorcineCompleme3,C3ELISAKit 猪补体蛋白3(C3)检测试剂盒 进口分装

ADVIgMVII腺病毒IgMⅦ型(间接法二步法)

血液(NO)活性荧光定量检测试剂盒50次

MouseSolubleprotein-100,S-100ELISAKit小鼠S100蛋白(S-100)检测试剂盒

人喉黏膜上皮细胞载脂蛋白E   英文名称：   apolipoprotein/apoprotein E   规格：      英文缩写
：   APOE

载脂蛋白P   英文名称
：   Apolipoprotein P   规格：      英文缩写
：   ApoP

血管生成素相关生长因子   英文名称
：   Angiopoietin Growth Factors   规格：      英文缩写：   AGF

血管生成素-2   英文名称
：   Angiopoietin-2   规格
：      英文缩写
：   ANG2

注意事项：

1. 收到细胞后首先观察细胞瓶是否完好，培养液是否有漏液
、浑浊等现象

，若有上述现象发生请及时和老哥俱乐部联系
。

2. 仔细阅读细胞说明书，了解细胞相关信息，如细胞形态
、所用培养基、血清比例、所需细胞因子等，确保细胞培养条件一致，若由于培养条件不一致而导致细胞出现问题，责任由客户自行承担
。

3. 用75%酒精擦拭细胞瓶表面，显微镜下观察细胞状态
。因运输问题
，部分细胞由于温度变化及剧烈碰亡破碎形成碎片，是正常现象
。观察好细胞状态后
，75%酒精消毒瓶壁将T25瓶置于37℃培养箱放置4-6h

。

4. 贴壁细胞可以消化
，悬浮细胞直接混匀收集细胞，900 rpm-1000 rpm离心3 min，弃上清。加5 mL PBS重悬细胞，再900 rpm-1000 rpm离心3 min
，
，用新鲜的*培养基重悬细胞
，并接种到新的培养瓶或培养皿中

，置于培养箱中进行培养。

5. 请客户用相同条件的培养基用于细胞培养。

6. 建议客户收到细胞后前3天各拍几张细胞照片
，记录细胞状态，便于和我司技术部沟通交流
。由于运输的原因
，个别敏感细胞会出现不稳定的情况
，请及时和老哥俱乐部联系
，告知细胞的具体情况，以便老哥俱乐部的技术人员跟踪回访直至问题解决。

7. 该细胞仅供科研使用。

8. 备注
：运输用的培养基(灌液培养基)不能再用来培养细胞，请换用按照说明书细胞培养条件新配制的*培养基来培养细胞
。收到细胞后次传代建议1
：2传代 。

9.注意： 1:2传代就是1个T25瓶传2个T25瓶或者2个6cm皿。不是1个T25瓶传2个10cm皿
。