產品名稱:血管內皮鈣黏蛋白ELISA檢測試劑盒
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產品型號 :48T/96T
更新日期 :2021-04-29
訪問次數 :359
48T/96T血管內皮鈣黏蛋白ELISA檢測試劑盒的詳細資料 :
產品名稱
:血管內皮鈣黏蛋白ELISA檢測試劑盒
英文名稱
:Cadherin
產品貨號
:EY-E98966
產品規格
:48T/96T
產品保存
:2-8℃
,有效期6個月
主要組成成分
:試劑
性狀
:液體
產品規格
:96T/48T
96T指可以做94個標本
,2個標準對照
48T指可以做47個標本
,1個標準對照
96T-84個樣本
48T-42個樣本
待檢樣本
:體液
,血清
,血漿
,細胞培養上清液
,尿液
,組織勻漿,心房水標本等等
。
樣品收集
、處理及保存方法
1)血清-----操作過程中避免任何細胞刺激
。使用不含熱原和內毒素的試管
。收集血液後
,1000×g離心10分鍾將血清和紅細胞迅速小心地分離
。
2)血漿-----EDTA
、檸檬酸鹽
、肝素血漿可用於檢測
。1000×g離心30分鍾去除顆粒
。
3)細胞上清液---1000×g離心10分鍾去除顆粒和聚合物
。
4)組織勻漿-----將組織加入適量鹽水搗碎
。1000×g離心10分鍾
,取上清液
5)保存------如果樣品不立即使用
,應將其分成小部分-70 ℃保存
,避免反複冷凍
。盡可能的不要使用溶血或高血脂血
。如果血清中大量顆粒,檢測前先離心或過濾
。不要在37℃或更高的溫度加熱解凍
。應在室溫下解凍並確保樣品均勻地充分解凍
。
注意事項
1)試劑應按標簽說明書儲存
,使用前恢複到室溫
。稀稀過後的標準品應丟棄
,不可保存
。
2)實驗中不用的板條應立即放回包裝袋中
,密封保存
,以免變質
。
3)不用的其它試劑應包裝好或蓋好
。不同批號的試劑不要混用
。保質前使用
。
4)使用一次性的吸頭以免交叉汙染
,吸取終止液和底物A
、B液時
,避免使用帶金屬部分的加樣器
。
5)使用幹淨的塑料容器配置洗滌液
。使用前充分混勻試劑盒裏的各種成份及樣品
。
6)洗滌酶標板時應充分拍幹
,不要將吸水紙直接放入酶標反應孔中吸水
。
7)底物A應揮發
,避免長時間打開蓋子
。底物B對光敏感
,避免長時間暴露於光下
。避免用手接觸
,有毒
。實驗完成後應立即讀取OD值
。
8)加入試劑的順序應一致
,以保證所有反應板孔溫育的時間一樣。
9)按照說明書中標明的時間
、加液的量及順序進行溫育操作
。
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ELISA 試驗時
,注意事項如下
:
1. 正式試驗時
,應分別以陽性對照與陰性對照控製試驗條件
,待檢樣品應作一式二份
,以保證實驗結果的準確性
。有時本底較高
,說明有非特異性反應
,可采用羊血清
、兔血清或BSA等封閉
。
2. 在ELISA中
,進行各項實驗條件的選擇是很重要的
,其中包括:
(1) 固相載體的選擇
:許多物質可作為固相載體
,如聚氯乙烯
、聚苯乙烯
、聚丙酰胺和纖維素等
。其形式可以是凹孔平板
、試管
、珠粒等
。目前常用的是40孔聚苯乙烯凹孔板
。不管何種載體
,在使用前均可進行篩選
:用等量抗原包被
,在同一實驗條件下進行反應
,觀察其顯色反應是否均一性
,據此判明其吸附性能是否良好
。
(2) 包被抗體(或抗原)的選擇
:將抗體(或抗原)吸附在固相載體表麵時
,要求純度要好,吸附時一般要求PH在9.0~9.6之間
。吸附溫度
,時間及其蛋白量也有一定影響,一般多采用4℃18~24小時
。蛋白質包被的適濃度需進行滴定
:即用不同的蛋白質濃度(0.1
、1.0和10μg/ml等)進行包被後
,在其它試驗條件相同時
,觀察陽性標本的OD值
。選擇OD值大而蛋白量少的濃度
。對於多數蛋白質來說通常為1~10μg/ml
。
(3) 酶標記抗體工作濃度的選擇
:首先用直接ELISA法進行初步效價的滴定(見酶標記抗體部份)
。然後再固定其它條件或采取“方陣法”(包被物
、待檢樣品的參考品及酶標記抗體分別為不同的稀釋度)在正式實驗係統裏準確地滴定其工作濃度
。
(4) 酶的底物及供氫體的選擇
:對供氫體的選擇要求是價廉
、安全
、有明顯地顯色反應,而本身無色
。有些供氫體(如OPD等)有潛在的致癌作用
,應注意防護
。有條件者應使用不致癌
、靈敏度高的供氫體
,如TMB和ABTS是目前較為滿意的供氫體
。底物作用一段時間後
,應加入強酸或強堿以終止反應
。通常底物作用時間
,以10-30分鍾為宜
。底物使用液必須新鮮配製
,尤其是H2O2在臨用前加入
。
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