老哥俱乐部

细胞简介：

肌腱细胞是肌腱组织的基本功能单位，主要合成和分泌胶原蛋白、弹性蛋白和糖蛋白基质，维持肌腱组织的新陈代谢
。

肌腱损伤后的方式包括内源性和外源性，而理想的方式是控制外源性，促进内源性。内源性的机制是肌腱细胞通过细胞自身的增殖从而促进肌腱
，但目前肌腱细胞在体外经过多次传代培养后会丧失分裂增殖能力。

目前已知多种因素影响肌腱过程
，其中与肌腱关系密切的有着重要调控作用的细胞因子主要有
：碱性成纤维生长因子，转化生长因子 β，骨形态发生蛋白-12
，血管内皮生长因子，胰岛素样生长因子-1
，血小板源性生长因子等
。

细胞特性：

1）组织来源于术后的人肌腱组织
。

2)细胞鉴定：Ⅰ型胶原荧光染色为阳性
。

3)经鉴定细胞纯度高于90%。

4)不含有 HIV-1、 HBV
、HCV、支原体、、酵母和。

5)细胞生长方式：梭形细胞，不规则细胞
，贴壁培养

。

推荐培养基
：

老哥俱乐部推荐使用 delf原代 肌腱 细胞培养体系 作为该细胞的培养基

。

实验报告：

一、分离与培养
：

1、无菌条件下，取出1-3d 龄SD大鼠心房组织，然后用PBS将此组织块清洗2次，将组织剪成1mm3左右大小
；

2、往组织块中加入4 mL酶消化液（0.1% 和0.1% I型胶原酶），混悬10s，置37℃条件下消化10min
，之后用滴管吹打制成单细胞悬液，自然沉淀并收集上清，用含10% FBS培养基终止消化后4℃放置；

3
、剩下的组织再加入3～4mL酶消化液，混悬10s，置37℃消化10 min后，按上述方法收集上清并终止消化后4℃放置，重复此步骤2-3次，直至组织被消化；

4
、用200目不锈钢筛网过滤细胞消化液，1200r/min 离心10min，弃去上清
，沉淀细胞用含有10％ FBS DMEM/F12培养基混悬
，接种于25cm2培养瓶，放置于37℃ ，5％CO2 培养箱中培养；

5
、差速贴壁1h后
，吸出培养基
，按实验需要接种于6孔板中继续培养
；二、免疫荧光鉴定：

1
、待心房肌细胞生长至80%融合时，弃去培养基

，用温育的PBS冲洗细胞2次，每次10min
，然后用4%多聚甲醛在室温条件下固定细胞15min；

2
、PBS冲洗细胞2次，每次10min
，然后在4℃条件下
，用0.1％Triton X-100透膜15min；

3、PBS冲洗细胞2次，每次10min

，然后在室温条件下，用4% BSA封闭细胞30min
；

4、按1: 100的比例稀释α-actin一抗
，然后将其放在4℃冰箱中孵育细胞过夜；

5、PBS冲洗细胞3次，每次10min，按1
：150的比例稀释抗α-actin的二抗， 37℃条件下放置1h；

6、用PBS冲洗3次
，每次10min
，在倒置荧光显微镜下观察图像并拍照。

注意事项
：

1. 收到细胞后首先观察细胞瓶是否完好，培养液是否有漏液
、浑浊等现象，若有上述现象发生请及时和老哥俱乐部联系。

2. 仔细阅读细胞说明书，了解细胞相关信息，如细胞形态
、所用培养基、血清比例、所需细胞因子等
，确保细胞培养条件一致，若由于培养条件不一致而导致细胞出现问题，责任由客户自行承担。

3. 用75%酒精擦拭细胞瓶表面，显微镜下观察细胞状态
。因运输问题，部分细胞由于温度变化及剧烈碰亡破碎形成碎片，是正常现象
。观察好细胞状态后，75%酒精消毒瓶壁将T25瓶置于37℃培养箱放置4-6h。

4. 贴壁细胞可以消化，悬浮细胞直接混匀收集细胞，900 rpm-1000 rpm离心3 min，弃上清。加5 mL PBS重悬细胞，再900 rpm-1000 rpm离心3 min，，用新鲜的*培养基重悬细胞
，并接种到新的培养瓶或培养皿中
，置于培养箱中进行培养。

5. 请客户用相同条件的培养基用于细胞培养
。

6. 建议客户收到细胞后前3天各拍几张细胞照片
，记录细胞状态，便于和我司技术部沟通交流。由于运输的原因，个别敏感细胞会出现不稳定的情况，请及时和老哥俱乐部联系，告知细胞的具体情况，以便老哥俱乐部的技术人员跟踪回访直至问题解决
。

7. 该细胞仅供科研使用

。

8. 备注：运输用的培养基(灌液培养基)不能再用来培养细胞
，请换用按照说明书细胞培养条件新配制的*培养基来培养细胞。收到细胞后次传代建议1：2传代 
。

9.注意： 1:2传代就是1个T25瓶传2个T25瓶或者2个6cm皿。不是1个T25瓶传2个10cm皿
。

公司正在出售的产品：

大鼠钙/钙调蛋白依赖性蛋白激酶Ⅱα(CAMK2α)检测试剂盒 
，英文名： CAMK2α ELISA Kit

Rat beta amyloid (A beta 1-40 1-40) ELISA Kit 大鼠β淀粉样蛋白1-40(Aβ1-40)检测试剂盒

RatTumornecrosisfactorα,TNF-αELISAKIT 大鼠肿瘤坏死因子α(TNF-α)检测试剂盒 进口分装

CLIAKitforDSIP(Humandeltasleep-inducingpeptide)ELISAKit人促睡眠肽

细胞培养液抗坏血酸比色法定量检测试剂盒20次

RatHistoneDeacetylase,HDELISAKit大鼠组织蛋白去乙酰化酶(HD)检测试剂盒

ICOSLG重组小鼠 ICOS Ligand / B7-H2 / ICOSLG 蛋白 (His & Fc 标签) Protein

chloramphenicol/OVA 氯偶联鸡卵白蛋白蛋白 2mgchloramphenicol/OVA 氯偶联鸡卵白蛋白蛋白

GAPDH重组人 GAPDH 蛋白 (His 标签) Protein

ACOX1 Protein Human 重组人 ACOX1 / aox 蛋白 (His 标签)

LDLR Protein Mouse 重组小鼠 LDLR / LDL Receptor 蛋白 (His 标签)

chloramphenicol/OVA 氯偶联鸡卵白蛋白蛋白 2mgchloramphenicol/OVA 氯偶联鸡卵白蛋白蛋白

ACOX1 Protein Human 重组人 ACOX1 / aox 蛋白 (His 标签)

ICOSLG重组小鼠 ICOS Ligand / B7-H2 / ICOSLG 蛋白 (His & Fc 标签) Protein

LDLR Protein Mouse 重组小鼠 LDLR / LDL Receptor 蛋白 (His 标签)

GAPDH重组人 GAPDH 蛋白 (His 标签) Protein

植物钙调素(CAM)ELISA 试剂盒

Human ai nuclear factor aibody (ANF) ELISA Kit 人抗核因子抗体(ANF)检测试剂盒

Porcineadiponectin,ADPELISAKit 猪脂联素(ADP)检测试剂盒 进口分装

CLIAKitforADV-IgM(HumanAdenovirusIgM)ELISAKit人腺病毒IgM

血液氧化应激活性氧(ROS)鲁米诺化学发光法定量检测试剂盒50次

MouseStemcellfactor/mastcellgrowthfactor,SCF/MGFELISAKit小鼠干细胞因子/肥大细胞生长因子(SCF/MGF)检测试剂盒

人肌腱细胞蔗糖测定试剂盒（紫外比色法）

γ-谷酰半胱酸合成酶（γ-GCS）测定试剂盒（速率法）

超微量ATP酶测试盒（Na+K+

、Ca2+Mg2+、T－ATP酶）

总巯基（-SH）测定试剂盒