老哥俱乐部

细胞特性

：

人卵巢间质细胞1）细胞来源于手术切除的正常卵巢组织。

2)细胞鉴定
：侧链裂解酶（P450SCC）荧光染色为阳性。

3)经鉴定细胞纯度高于90%
。

4)不含有 HIV-1
、 HBV、HCV、支原体
、
、酵母和
。

5)细胞生长方式
：梭形细胞，不规则细胞，贴壁培养

。

推荐培养基
：

老哥俱乐部推荐使用 Delf原代间质细胞培养体系 作为体外培养的培养基。

实验报告
：

一、分离与培养
：

1、无菌条件下，取出1-3d 龄SD大鼠心房组织，然后用PBS将此组织块清洗2次
，将组织剪成1mm3左右大小
；

2、往组织块中加入4 mL酶消化液（0.1% 和0.1% I型胶原酶），混悬10s
，置37℃条件下消化10min，之后用滴管吹打制成单细胞悬液，自然沉淀并收集上清
，用含10% FBS培养基终止消化后4℃放置；

3
、剩下的组织再加入3～4mL酶消化液，混悬10s，置37℃消化10 min后
，按上述方法收集上清并终止消化后4℃放置，重复此步骤2-3次
，直至组织被消化

；

4、用200目不锈钢筛网过滤细胞消化液，1200r/min 离心10min，弃去上清，沉淀细胞用含有10％ FBS DMEM/F12培养基混悬
，接种于25cm2培养瓶
，放置于37℃ ，5％CO2 培养箱中培养；

5、差速贴壁1h后
，吸出培养基，按实验需要接种于6孔板中继续培养
；二
、免疫荧光鉴定：

1、待心房肌细胞生长至80%融合时，弃去培养基，用温育的PBS冲洗细胞2次，每次10min，然后用4%多聚甲醛在室温条件下固定细胞15min；

2、PBS冲洗细胞2次，每次10min，然后在4℃条件下

，用0.1％Triton X-100透膜15min；

3
、PBS冲洗细胞2次，每次10min
，然后在室温条件下，用4% BSA封闭细胞30min；

4、按1: 100的比例稀释α-actin一抗，然后将其放在4℃冰箱中孵育细胞过夜；

5、PBS冲洗细胞3次，每次10min，按1：150的比例稀释抗α-actin的二抗

， 37℃条件下放置1h；

6、用PBS冲洗3次，每次10min，在倒置荧光显微镜下观察图像并拍照。

公司正在出售的产品：

小鼠E-钙粘附分子(E-Cadherin/CDH1/CD324)elisa检测试剂盒

人碱性磷酸酶(ALP)elisa分析检测试剂盒

通用型人体鼻病毒（rhinovirus）定性检测试剂盒

羊elisa检测试剂盒

大鼠神经肽Y(NPY)elisa检测试剂盒

精浆（seminal plasma）氧化应激活性氧（ROS）WST-1比色法定量检测试剂盒

姜黄素含量试剂盒

盐析法大量蛋白浓缩沉淀试剂盒

小鼠多效生长因子(PTN)elisa检测试剂盒

DENND1A蛋白抗体 DENND1A

DNA修复蛋白Rad50抗体 RAD50

磷酸化蛋白激酶C α/β2重组兔单克隆抗体 Phospho-PKC alpha (Thr638)

磷酸化接头蛋白Gab 1抗体 Phospho-Gab1 (Tyr627)

胞粘蛋白2抗体 Cytohesin 2

补体因子B抗体 Factor B

线粒体铁转运蛋白2抗体 Mitoferrin 2/SLC25A28

心肌肌钙蛋白抗体 Cardiac Troponin I/TNNC1

NUDT10蛋白抗体 NUDT10

Pacific Blue标记小鼠CD62L单克隆抗体 mouse CD62L/Pacific Blue

上皮粘连调控蛋白ESRP2抗体 ESRP2

神经细胞分化相关蛋白AHNAK抗体 AHNAK

核仁蛋白14抗体 Nucleolar protein 14

核转录因子SOX14抗体 SOX14

轴突导向因子SEMA3E抗体 Semaphorin 3E

转运蛋白SEC24A抗体 SEC24A

大鼠骨钙素(OT)elisa分析检测试剂盒

仓鼠基质金属蛋白酶9/明胶酶B(MMP-9/Gelatinase B) elisa生化检测试剂盒

MMP-9 ELISA Kit

人丁酰酯酶(BCHE)elisa生化检测试剂盒

人卵巢间质细胞BCHEELISAkit

注意事项：

1. 收到细胞后首先观察细胞瓶是否完好
，培养液是否有漏液
、浑浊等现象，若有上述现象发生请及时和老哥俱乐部联系。

2. 仔细阅读细胞说明书，了解细胞相关信息，如细胞形态、所用培养基
、血清比例、所需细胞因子等
，确保细胞培养条件一致
，若由于培养条件不一致而导致细胞出现问题，责任由客户自行承担。

3. 用75%酒精擦拭细胞瓶表面
，显微镜下观察细胞状态。因运输问题，部分细胞由于温度变化及剧烈碰亡破碎形成碎片，是正常现象

。观察好细胞状态后，75%酒精消毒瓶壁将T25瓶置于37℃培养箱放置4-6h
。

4. 贴壁细胞可以消化，悬浮细胞直接混匀收集细胞
，900 rpm-1000 rpm离心3 min
，弃上清
。加5 mL PBS重悬细胞，再900 rpm-1000 rpm离心3 min，
，用新鲜的*培养基重悬细胞，并接种到新的培养瓶或培养皿中，置于培养箱中进行培养。

5. 请客户用相同条件的培养基用于细胞培养
。

6. 建议客户收到细胞后前3天各拍几张细胞照片，记录细胞状态，便于和我司技术部沟通交流。由于运输的原因，个别敏感细胞会出现不稳定的情况
，请及时和老哥俱乐部联系
，告知细胞的具体情况
，以便老哥俱乐部的技术人员跟踪回访直至问题解决。

7. 该细胞仅供科研使用。

8. 备注：运输用的培养基(灌液培养基)不能再用来培养细胞

，请换用按照说明书细胞培养条件新配制的*培养基来培养细胞。收到细胞后次传代建议1

：2传代 。

9.注意： 1:2传代就是1个T25瓶传2个T25瓶或者2个6cm皿。不是1个T25瓶传2个10cm皿。